医教结合模式下普及眼保健知识对儿童视觉发育的影响

目的：在幼儿园中应用医教结合模式普及儿童眼保健知识,研究该模式对儿童视觉发育的影响并评价其效果。方法：在南京市雨花区随机抽取3所幼儿园大班儿童（5~6岁）作为试验组,应用医教结合模式普及儿童眼保健知识;另在南京市建邺区随机抽取3所幼儿园大班儿童（5~6岁）为对照组。两组进行为期一学年的对照研究,分析试验组与对照组儿童的视力低常率、屈光偏离转诊率、散光患病率、等效球镜度数均值、生理性远视不足比率等指标有无差异。结果：一学年后,医教结合模式下的试验组儿童视力低常率、屈光偏离转诊率、散光患病率与对照组比较均明显降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）,与试验前比较亦有明显降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）;试验组儿童等效球镜均值增加,生理性远视不足比率降低,与试验前及对照组比较均有统计学意义（P〈0.05）。结论：应用医教结合模式普及儿童眼保健知识对于促进儿童视觉的正常发育,降低视力不良发生率,延缓近视发生有着积极意义。

学龄前儿童视力发育状况及影响因素分析

目的：探讨南京市部分幼儿园学龄前儿童不同年龄段视力发育标准及视力异常的影响因素。 方法：选取2011年南京市部分4～6岁儿童进行视力检查，并填写影响因素调查问卷，进行统计分析。 结果：选取4，5，6岁儿童视力水平P5分别为0．4，0．5，0.6，屈光、孕周、出生体质量、近距离用眼时间、每日看电视时间、每日户外活动时间、挑食情况、咀嚼情况、父母屈光度、家庭的采光状况等与视力异常有统计学关联，影响因素评分的P5为5。 结论：将各年龄段视力小于P5定位视力异常，影响因素评分小于5的定位视力异常高危人群，需要密切关注视力情况。

持续性操作测验在学龄前儿童注意缺陷多动障碍诊断中应用价值探讨

目的:探讨4～5岁儿童注意力持续测试软件(Conners’kiddie continuous performance test,K-CPT)在诊断学龄前儿童注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)中的临床应用价值。方法:以美国精神障碍诊断和统计手册第4版(DSM-IV)为诊断标准,对41例临床诊断ADHD的儿童,进行Conners’父母用简明症状问卷(parent symptom questionnaire,PSQ)调查和K-CPT评估。结果:K-CPT评估结果与DSM-IV诊断标准比较,在ADHD检出率方面无显著性差异(P>0.05)。K-CPT诊断学龄前ADHD的灵敏度为73.3%,特异度为81.8%,假阳性率为18.2%,假阴性率为26.7%,符合率为75.7%,Kappa值为0.470(P<0.001),K-CPT与金标准之间存在中度一致性。K-CPT和PSQ在患儿阳性检出率方面,差异均无显著性(P>0.05)。结论:K-CPT测试结果可作为客观诊断指标,用于学龄前ADHD的协助诊断。

关注学习障碍儿童的视知觉

视知觉是学习过程中最基本的因素,视知觉相关问题会直接影响儿童的学习效率和能力。学习障碍儿童会出现一系列与视知觉相关的临床表现,但是这些表现容易被误解为儿童主观上的不努力或是好动、注意力不集中。认识、重视和关注学习障碍儿童的视知觉问题,通过多学科的合作给予恰当的专业评估和干预训练,通过家长教育配合家庭训练,可改善儿童的视知觉功能,减轻相关症状,提高儿童的学习能力,有助于学习障碍的矫治。

关注儿童体能测评与干预

儿童体能不仅影响其健康及运动水平,而且与多种疾病,如肥胖、发育性协调障碍等密切相关。文章就儿童体能发展现状、评估方法及干预原则等进行综述。

不同血铅浓度对学龄前儿童智力发育的影响

目的 了解血铅水平对儿童智能发育的影响.方法 随访132例学龄前儿童,采用韦氏学龄前与学龄初期智力量表（WPPSI-R）测量儿童智力发育和石墨炉原子吸收光谱法检测血铅含量.结果 不同血铅浓度〈40、40～、70～110 的儿童智力测试总智商（IQ）分别为（100.2±14.2）、（91.4±13.4）、（86.2±10.2）,差异有统计学意义.结论 儿童智商发育程度与血铅水平密切相关,应开展有效教育和铅污染环境的干预.

南京地区0~5岁儿童25-羟基维生素D水平及其与季节的关系

目的：了解南京地区儿童血清25-羟基维生素D[25-（OH）D]水平,为临床维生素D制剂使用提供参考依据。方法选取2013年6月至2014年5月在南京医科大学附属南京妇幼保健院儿童保健门诊进行健康体检的0~5岁儿童为研究对象,采用人25-（ OH） D检测试剂盒检测其血清维生素D水平；统计不同年龄段儿童维生素D平均水平,计算各年龄组维生素D缺乏情况；分析其与年龄、性别以及季节变化之间的关系。结果0~5岁儿童维生素D水平为（81.5±30.4） nmol/L,其中男童维生素D水平为（81.9±31.6）nmol/L,女童维生素D水平为（81.3±29.8） nmol/L,平均缺乏率达9.5%（271/23944例）；缺乏主要存在于〉4~5岁儿童；且〉4~5岁组男童维生素D水平[（64.9±21.2） nmol/L]显著高于女童[（60.8±21.2） nmol/L]（t=0.98,P〈0.05）；维生素D水平受季节变化影响显著,第3季度水平[（108.1±11.6）nmol/L]显著高于其他季度[（71.8±15.6） nmol/L、（95.5±21.2） nmol/L、（86.6±3.5） nmol/L]（F=4.53,P=0.03）。结论维生素D作为儿童生长发育的必要营养元素,其补充应该贯彻儿童发育的不同时期,且不同年龄段儿童还应该根据当地季节变化补充维生素D。

孕鼠叶酸缺乏对子代心脏叶酸结合蛋白1基因及WNT信号转导途径的影响

目的探讨孕鼠叶酸缺乏(FD)对子代心脏发育过程中叶酸结合蛋白1(Folbp1)基因表达及WNT信号转导途径的影响。方法成熟雌性SD大鼠36只随机分为实验组和对照组各18只,分别喂以缺乏叶酸和添加叶酸的纯合饲料。2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕13.51、7.5 d胚胎鼠及新生鼠心脏。用RT-PCR方法检测Folbp1基因及WNT信号转导途径中Wnt和-βcatenin基因mRNA表达。结果Folbp1、Wnt及-βcatenin基因mRNA在孕13.51、7.5 d胚胎心脏及新生鼠心脏中的表达量,实验组均显著低于对照组(P均<0.05)。结论FD影响Folbp1、WNT及-βcatenin基因表达,可能引起叶酸受体功能低下和WNT信号转导途径障碍,从而可能导致心脏发育中形态异常,造成心脏功能缺陷。

南京市城区学龄前儿童母亲育儿压力影响因素分析

目的调查南京市城区3～6岁幼儿母亲的育儿压力并分析相关的影响因素,为指导母亲科学育儿提供依据。方法采用简式育儿压力问卷(Parenting Stress Index-short Form,PSI-SF)和自编基本情况调查表、育儿环境调查表、母亲工作情况调查表对随机抽取的400名南京市城区的3～6岁幼儿及其母亲进行调查并比较分析。结果在调查的母儿生理因素、家庭育儿环境、母亲文化程度及母亲工作状况相关因素中,母亲健康状况、母亲流产史、家庭住房面积、养育方法、母亲文化程度、母亲职业(企业单位与事业及机关单位)、母亲工作量增减及母亲收入增减与母亲育儿压力差异有统计学相关(P均<0.05)。结论学龄前儿童母亲的育儿压力受多方面因素影响。

抑癌基因PTEN对人原代子宫内膜细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:通过人原代子宫内膜细胞实验研究第10号染色体缺失的磷酸酶(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)对子宫内膜异位症发生、发展的作用和意义。方法 :利用慢病毒载体分别在人原代子宫内膜细胞中过表达和静默PTEN基因的表达;流式细胞仪检测慢病毒感染之后不同PTEN表达组的细胞周期及凋亡变化情况。结果:PTEN过表达组人原代子宫内膜细胞G0/G1期比例增加,与对照组比较差异具有统计学意义,G2/M期比例逐渐减少,细胞周期阻滞在G0/G1期;空白对照组、PTEN过表达组、PTEN静默组的细胞凋亡率分别是(11.70±0.03)%、(15.80±0.14)%、(5.33±0.08)%。结论:PTEN可显著增加人原代子宫内膜细胞凋亡,抑制细胞周期,对子宫内膜异位症的发生发展有一定抑制作用。

hsa-miR-100的生物信息学分析

目的对hsa-miR-100进行靶基因、功能预测等生物信息学分析,为深入研究hsa-miR-100功能提供理论和试验基础。方法利用Pubmed检索miRNA-100相关文章,通过miRBase、NCBI、UCSC Browser等在线工具分析hsa-miR-100序列,应用miRanda、TargetScan及PicTar预测hsa-miR-100靶基因,结合已证实的靶基因进行功能富集分析和信号通路富集分析。结果 hsa-miR-100与多种肿瘤发生、发展有关,其序列在各物种间具有高度保守性。hsa-miR-100靶基因功能富集于基因沉默、染色质沉默、细胞生物合成负性调节等(P<0.01),涉及肿瘤信号通路、溶酶体信号通路、凋亡信号通路等信号转导通路(P<0.05)。结论 hsa-miR-100可能参与肿瘤发生相关的生物学过程。

生物信息学预测hsa-miR-26b的作用靶标及功能

目的通过生物信息学预测hsa-miR-26b的靶基因,进一步分析其潜在功能,为其后续功能研究提供理论依据。方法用pubmed、谷歌(google)等工具检索hsa-miR-26b相关文献;用miRbase、NCBI、UCSC Browser和Promoter scan等在线工具分析hsa-miR-26b序列及所在基因组特征;用TargetScan、PicTar及miRanda预测hsa-miR-26b的靶基因;通过功能富集分析(GOanalysis)和信号转导通路富集分析(Pathway analysis),预测所得靶基因和已证实的靶标基因。结果研究证实hsa-miR-26b与神经发育、心肌肥大及各种肿瘤发生、发展有关;hsa-miR-26b位于CTDSP1基因内含子内,但可能具有与该基因不同的启动子;3种方法预测结果取交集获得可能靶标基因33个,合并已知靶标基因14个;hsa-miR-26b靶基因主要参与钠离子转运、溶酶体组织和生物形成、抑制细胞增殖、转运等生物学过程,涉及Notch、氨基糖类代谢、ABC转运子、VEGF及TGF-β等信号转导通路。结论 hsa-miR-26b的功能较为广泛,与发育、代谢等密切相关。

叶酸缺乏对孕鼠子代心脏发育中糖原合成酶激酶3β表达影响

目的探讨孕鼠叶酸缺乏(FD)对子代心脏发育过程中GSK3β基因表达的影响。方法成熟雌性SD大鼠36只随机分为实验和对照组各18只,分别喂以缺乏叶酸和添加叶酸纯合饲料。2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕13.5、17.5d胚胎鼠及新生鼠心脏。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测GSK3β基因mRNA表达。结果GSK3βmRNA在孕13.5、17.5d胚胎心脏及新生鼠心脏中的表达量,实验组均显著低于对照组(Pa<0.05)。结论叶酸缺乏可影响GSK3β基因表达水平,可能导致心脏发生发育中形态改变,造成心脏功能缺陷。

miR-26b过表达对不同时间点人脂肪细胞分泌脂因子的影响

目的探讨miR-26b过表达在人脂肪细胞分化过程中对各种脂因子分泌的影响。方法以miR-26b过表达病毒感染人脂肪前体细胞并诱导分化;收集不同时间点的细胞培养基上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各个时间点的脂因子(白介素-6、瘦素、抵抗素、肿瘤坏死因子-α)分泌量。结果与对照组比较,在miR-26b过表达病毒感染的人脂肪前体细胞分化过程中,白介素-6、瘦素分泌量降低,而抵抗素分泌量升高;两组均未检测到肿瘤坏死因子-α。结论 miR-26b在一定程度上可以改善人脂肪细胞炎症状态及改善胰岛素抵抗,为肥胖治疗提供潜在靶点。

hsa-miR-1908靶基因预测及生物信息学分析

目的对hsa-miR-1908进行系统的生物信息学分析,预测其可能参与的生物学过程及信号通路,为深入研究其在人脂肪细胞分化、肥胖发生等过程中的功能与机制奠定基础。方法应用miRBase获取hsa-miR-1908的序列,并分析其特征;应用miRanda预测hsa-miR-1908的靶基因,并取预测结果及基因芯片结果的交集,进一步进行基因功能注释(Gene ontology)和生物通路富集分析(Pathway enrichment)。结果 hsa-miR-1908在各物种之间有一定保守性,其靶基因功能富集于Wnt受体信号的调控、细胞周期、细胞凋亡等生物学过程;其靶基因信号通路富集于促性腺激素释放激素信号通路、MAPK信号通路、胰岛素信号通路、细胞周期等信号转导通路及胰腺癌等疾病通路中。结论 hsa-miR-1908预测的靶基因集合富集于多个信号通路及生物学过程,与肥胖密切相关,为后续has-miR-1908在人脂肪细胞中生物学功能研究奠定基础。

LYRM1基因过表达对3T3-L1脂肪细胞线粒体代谢的影响

目的观察LYRM1基因过表达对3T3-L1脂肪细胞线粒体代谢的影响。方法体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,分别构建LYRM1基因过表达细胞株(LYRM1-pcDNA3.1/myc-His B)和空载对照细胞株(pcDNA3.1/myc-His B);实时定量RT-PCR验证转染情况;RT-PCR检测诱导分化成熟后的线粒体代谢酶HKI,ACC,CS,CPT1和Cyc-C基因表达水平。结果 RT-PCR结果证实LYRM1质粒转染成功;与空载对照组比较,LYRM1过表达组HKI,ACC,CS,CPT1和Cyc-C mRNA表达水平均显著降低(P均<0.05)。结论 LYRM1基因过表达下调了3T3-L1脂肪细胞中线粒体的代谢关键酶基因表达水平,可能参与调节脂肪细胞线粒体的代谢。

高脂饮食大鼠血清抵抗素水平及下丘脑细胞因子信号转导抑制因子-3基因表达的变化

目的观察高脂饮食大鼠血清抵抗素水平及下丘脑细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS-3)基因表达变化及其关系,探讨高脂饮食引发肥胖的发生机制。方法雄性6周龄SD大鼠16只。体质量80～100 g。随机分为基础饮食组和高脂饮食组,每组8只。单笼饲养,自由饮食饮水,明暗周期12 h,环境温度21～23℃,每周称体质量、测体长和尾长1次。大鼠饲养9周后,以乌拉坦(0.4 g/kg)深度麻醉,取心脏全血离心,采用ELISA法检测其血清抵抗素水平,葡萄糖氧化酶法检测其血清葡萄糖水平。取其下丘脑组织100～120 mg,用Trizol一步法提取总mRNA,经电泳显示28、18、5 S清晰条带,测定A260/A280>1.8。应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测其SOCS-3 mRNA表达水平。PCR产物经18 g/L琼脂糖凝胶电泳后,利用凝胶图像分析系统测定电泳条带密度值,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参照,计算SOCS-3 mRNA相对水平,结果以SOCS-3条带占GAPDH条带密度百分率(%)表示。结果1.高脂饮食组大鼠体质量、体长、尾长及Lee′s指数明显高于基础饮食组(Pa<0.001);2.高脂饮食组大鼠血清血糖及抵抗素水平明显升高,与基础饮食组比较均有显著性差异(Pa<0.01);3.高脂饮食组大鼠下丘脑SOCS-3 mRNA表达水平显著高于基础饮食组(P<0.05);4.二组大鼠血清抵抗素水平与下丘脑SOCS-3 mRNA表达水平无明显相关性(Pa>0.05)。结论高脂饮食可导致大鼠血清抵抗素水平升高,进而诱导SOCS-3基因表达,在肥胖、抵抗素所致的胰岛素抵抗过程中SOCS-3可能发挥了重要的介质作用。

hsa-miR-26b沉默载体的构建及验证

目的构建hsa-miR-26b沉默载体,与其靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞验证其沉默效果。方法用miRNA海绵体技术设计并合成与hsa-miR-26b成熟序列反向互补的3个重复序列的双链DNA,将短发卡状RNA(shRNA)克隆入LV3-GFP-Puro载体,与靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞,于24 h后收集细胞RNA,用real-time PCR检测hsa-miR-26b表达水平,同时用双荧光素报告系统检测其对靶基因的作用。结果成功构建了有效的hsa-miR-26b沉默载体,经测序验证与设计序列一致;real-time PCR验证hsa-miR-26b表达水平降低了75%;双荧光素报告系统验证其对靶基因无抑制作用(P>0.05)。结论成功构建hsa-miR-26b沉默载体,并验证其对靶基因PTEN无抑制作用。

FCCP对P19细胞向心肌细胞诱导分化的影响

目的:探讨羰基-氰-对-三氟甲氧基本腙(carbonyl cyanide p-trifluoromethoxyphenylhydrazone,FCCP)对P19细胞向心肌细胞诱导分化的影响。方法:在P19细胞向心肌细胞诱导分化的过程中加入5μmol/L的FCCP,同时设立阴性对照组,显微镜观察分化过程中不同时间点P19细胞形态的变化,并采用real-time PCR和蛋白质印迹法分别检测GATA4、NKX2.5及cTnT在分化过程中的mRNA和蛋白表达水平。结果:FCCP处理组P19细胞形成的胚胎样小体较对照组体积小,结构较松散,形态不均一。在整个分化过程中,FCCP处理组GATA4、NKX2.5及cTnT基因均有表达,但整个动态表达过程较对照组延迟;Western blot结果显示,FCCP处理组GATA4、NKX2.5蛋白在第5、7、9天的表达量均较对照组低;在第11天,两组间GATA4蛋白的表达量差异无统计学意义;而NKX2.5在FCCP处理组的表达量仍低于对照组。FCCP处理组和对照组cTnT蛋白在分化第5、7天的表达量差异无统计学意义,而在第9、11天cTnT蛋白表达量FCCP组均较对照组低。结论:FCCP可抑制P19细胞向心肌细胞诱导分化的进程。

人miR-152基因的慢病毒载体的构建及稳定株筛选

目的构建人miR-152基因重组慢病毒载体并筛选稳定表达株。方法 PCR扩增包括miR-152前体所在区域的基因组DNA,克隆到慢病毒载体表达质粒pGIPZ中,得到重组的pGIPZ-miR-152表达载体,通过与包装质粒共转染HEK-293T细胞,获得携带miR-152 minigene的重组慢病毒。用病毒感染HepG2细胞,72 h后用嘌呤霉素筛选。用real-time PCR法检测miR-152基因的表达。结果构建的重组质粒经双酶切验证和测序比对鉴定正确;该质粒转染293T细胞获取的慢病毒滴度达7.5×107TU/mL;用病毒感染HepG2细胞,感染效率达70%以上。药物筛选10 d后,获得的过表达株miR-152表达量比正常细胞高近10倍。结论成功构建人miR-152基因慢病毒载体质粒pGIPZ-miR-152,并筛选出miR-152过表达细胞株,为后续实验奠定基础。