Survivin基因特异性siRNA腺病毒介导的肿瘤放射增敏作用

目的:构建携带沉寂Survivin基因表达特异性siRNA的重组腺病毒载体,观察其在荷瘤动物体内对Survivin基因的表达以及对瘤细胞放射敏感性的影响。方法:设计合成针对Survivin基因序列的siRNA,构建并重组腺病毒AdEGFP-siR-NA。建立裸鼠SMMC7721肝癌移植瘤模型,分5组进行实验,siRNA+放疗组和siRNA组以AdEGFP-siRNA瘤内多点注射,siRNA(-)组以AdEGFP-siRNA(-)瘤内多点注射,隔日1次,每次2×108pfu/100μl,共5次;单纯放疗组和空白对照组以等量生理盐水代替病毒注射;于第10、12、14、16天siRNA+放疗组和单纯放疗组给予5Gy/次的照射;定时测量瘤体体积;观察周期结束,取瘤组织免疫组化检测Survivin蛋白的表达。结果:成功构建并重组表达Survivin基因特异性siRNA序列和绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的腺病毒AdEGFP-siRNA。裸鼠SMMC7721移植瘤在注射AdEGFP-siRNA后生长受到明显抑制,抑瘤率为56.2%;AdEGFP-siRNA病毒治疗和放疗结合,可将抑瘤率提高到82.6%。移植瘤组织免疫组化检查显示,特异性siRNA显著降低了肝癌细胞Survivin的表达。结论:Survivin特异性siRNA能够沉寂其基因的表达和抑制肿瘤的生长,同时可以提高肿瘤细胞的放射敏感性,改善治疗效果。

肺癌生存素基因的表达及其与放疗敏感性的关系

目的:研究肺癌细胞生存素(survivin)基因表达及其与放疗敏感性间的关系,探讨survivin作为预测肺癌放疗敏感性分子标志物的可能性。方法:设计合成survivin基因引物,并对肺癌组织标本行RT-PCR以检测其survivin表达。对原代培养肺癌细胞行2.0Gy X线照射后,采用Cell Proliferation Kit I(MTT)法进行细胞活力检测。结果:survivin在肺癌组织中阳性表达率较高,为60.9%,而在正常肺组织中阳性表达率仅为14.3%。肺癌细胞经2.0Gy的X线照射后,细胞增殖明显受抑,存活率下降。但survivin阳性肺癌细胞的存活率(40.0%～70.0%)显著高于survivin阴性肺癌细胞(20.0%～50.0%)。结论:肺癌高表达survivin,并与其放射敏感性有关。X线照射对癌细胞生长有明显抑制作用,但survivin阳性的癌细胞对X线照射有一定耐受性。检测肺癌细胞survivin表达有望成为预测肺癌对放疗不敏感的辅助指标之一。

抑癌基因p16和Rb的失活与肺癌临床病理学的关系

目的 研究抑癌基因p16和Rb与肺癌生物学特征和临床进展的关系。方法 采用免疫组织化学和Southern杂交的方法对 68例肺癌进行了抑癌基因 p16和Rb的检测。 结果 肺癌 p16蛋白总丢失率为 48.5 % ,且主要发生于非小细胞肺癌病例 ,与淋巴结转移、临床病理分期有关。Southern杂交发现 p16基因缺失的频率为 17.6% ,缺失多发生于p16蛋白阴性的病例。肺癌Rb蛋白丢失率为 2 9.4% ,主要发生于小细胞肺癌病例。Southern杂交发现 2 3 .5 %的肺癌有Rb基因异常。结论 p16基因和Rb基因缺失是该基因失活的重要原因 ,是肺癌发生、发展中重要的分子事件 ,与肺癌的临床进展密切相关。

^(60)Coγ射线诱发Lewis肺癌细胞Fas基因蛋白表达及其与细胞凋亡的关系

目的:研究６０Ｃｏ γ射线对Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞Ｆａｓ基因蛋白表达的影响及其诱发细胞凋亡的分子机制。方法:采用免疫电镜技术,对受照Ｌｅｗｉｓ细胞的小鼠移植瘤组织进行Ｆａｓ基因蛋白的超微结构定位观察。结果:受照Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞的小鼠移植瘤组织,癌细胞呈Ｆａｓ基因蛋白阳性表达,阳性产物分布于细胞膜表面;而未受照射的对照组Ｌｅｗｉｓ细胞的移植瘤组织,癌细胞Ｆａｓ蛋白全部阴性。结论:γ射线诱发Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞发生凋亡主要依赖于Ｆａｓ蛋白表达的上调及Ｆａｓ介导的凋亡信号传导途径的激活。

Survivin小发卡RNA增强放射线诱导的肝癌细胞凋亡

放射线诱发癌细胞凋亡是肿瘤放疗的重要机制，但癌细胞遗传背景、细胞周期、肿瘤微环境等直接影响放射敏感性[1-2]。研究发现癌细胞高表达Survivin与其放射敏感性有关，因此检测癌细胞Survivin表达有望成为预测肿瘤放射敏感性辅助指标[3]。本研究探讨Survivin表达与放射线诱导的肝癌细胞凋亡之间关系，为临床优化治疗方案提供指导。