南京市精液分析质量控制的初步研究

目的：调查并分析南京市各家医院对精液分析项目中的精子浓度、精浆果糖、α葡糖苷酶及酸性磷酸酶（ACP）的检测结果，为进一步开展省内乃至全国范围内的精液分析的外部质量控制打下基础。方法：制备低、高浓度的4种检测项目的质控品8份，分装后检测每份质控品的结果并计算变异系数（CV）。质控品分发至南京市11家医院，收集并分析质控品回收结果。以分装后检测结果为参考值，计算不同实验室测得的质控品结果的总相对误差（RE）。结果：8份质控品分装后检测的CV为3．83％～11．16％。11家医院回报的精子浓度结果11份，精浆α葡糖苷酶、果糖和ACP结果5份。不同实验室高、低浓度精浆果糖的检测结果差异最小（CV分别为8．99％和3．95％），其次为α葡糖苷酶（CV分别为16．66％和18．41％），而精浆ACP的检测结果差异最大，CV分别为54．12％和65．58％。RE亦有相同的趋势，不同实验室精浆果糖检测的总RE分别为11．99％和20．31％，α葡糖苷酶为22．92％和27．26％，而ACP为7．34％和318．35％，即高浓度ACP检测结果的RE最大。11家医院中，6家用计算机辅助精液分析（CASA）系统检测精子浓度，5家用改良牛鲍血球计数池的方法检测。血球计数池计数的精子浓度结果[分别为（62．74±16．63）×10^6／ml和（163．32±36．24）×10^6／ml]和RE值（分别为148．47％和187．59％）显著高于CASA系统检测的结果分别为[（24．88±4．16）×10^6／ml和（54．24±23．06）×10^6／ml]和RE值（分别为13．97％和10．48％）。结论：目前男科学实验室精浆α葡糖苷酶和果糖的检测方法比较稳定，结果的变异在可接受的范围内，而ACP检测的方法可能不适合于临床常规使用，尚需进一步改进。血球计数池明显高估精子浓度，不适合用作精子浓度分析。

海训野战医疗所中医学检验的实践与思考

医学检验是完成战场救治任务的重要保证。现代战争对野战医学检验的实施提出了新的挑战。医学检验存在技术与装备的特殊要求,需要在野战条件下不断演练,通过实践-认识-再实践-再认识的过程不断改进和完善。近几年来,我院奉命组建野战医疗所,配属海训部队训练。

精浆游离L-肉毒碱水平及其与精子密度、活动率及活力的相关性研究

目的:研究正常生育及不育男性精浆中游离L-肉毒碱水平差异及其与精子密度、活动率(a+b+c级精子百分率)及活力(a+b级精子百分率)之间的相关性,探讨精浆中游离L-肉毒碱水平对男性生育力的影响及其在不育症检查和治疗中的作用。方法:分别采用高效液相色谱法和计算机辅助精液分析系统,测定了230例不育症患者(精子密度正常117例,少精子症81例,无精子症32例)和30例正常生育男性精浆中游离L-肉毒碱水平及精子密度、活动率、活力等参数。根据检查结果对不育症患者分组后,以SPSS12.0软件包进行统计学分析,比较各组间游离L-肉毒碱水平的差异以及游离L-肉毒碱水平与精子密度、活动率、活力之间的相关性。结果:正常生育组精浆游离L-肉毒碱水平明显高于不育组(P<0.01)。精液中精子密度越低、活力越弱,这种差异性越显著。相关性分析结果显示,精浆游离L-肉毒碱水平与精子密度呈显著正相关关系(r=0.521,P<0.01),与精子活动率和活力之间也具有正相关关系(r=0.319,P<0.01;r=0.251,P<0.01)。结论:精浆L-肉毒碱水平与精子密度、活动率和活力之间密切相关,其含量测定作为一项有用的生化指标,可为男性不育症检查及临床诊治和进行有关男性生殖功能机制研究提供参考。

精液分析前质量控制的初步研究

目的:探讨并研究精液分析分析前质控的一些环节对分析结果的影响,结合全面质量管理(TQM)的理念加以讨论,力求减少这些环节对检验结果准确性的影响。方法:21例要求生育前体检,有烟酒嗜好并自愿禁忌烟酒72 d以上的志愿者,分别检测其禁忌烟酒前后及精液留取后的第0.5 h,1 h,2 h和3 h的精液参数。结果:禁忌烟酒后志愿者的精子密度、精子活动率,a+b级精子百分率均显著高于禁忌前,精液留取后随着时间的递增,精子密度无显著差异(P>0.05),但精子活率和a+b级精子百分率多明显下降(P<0.05)。结论:分析前质控的环节众多,影响因素烦杂,包括患者的烟酒嗜好,精液标本的采集运送以及临床医师能否正确的选择检验项目、患者准备等,均可能对分析结果构成影响。必须慎重认真对待每一个环节,以达到整个精液分析过程的TQM,为临床诊疗提供可靠的实验室依据。

铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制的研究

目的:研究铜绿假单胞菌(PA)对亚胺培南的耐药机制,为临床合理选择抗生素提供确切的依据。方法:用2-巯基丙酸和头孢他啶双纸片协同法,检测临床分离的48株耐亚胺培南PA金属β-内酰胺酶(MBL)产生率,并提取各菌株的外膜蛋白,进行SDS-PAGE电泳分析,比较各耐药菌株外膜蛋白与标准菌株的差异。结果:48株耐亚胺培南PA中8株产MBL;在外膜蛋白SDS-PAGE图上发现32株缺少外膜蛋白OprD2,其中8株还伴随其他外膜蛋白的改变。结论:PA对亚胺培南耐药的主要原因是外膜蛋白OprD2缺失或含量减少以及MBL的产生,或由两者共同作用所致。

男性不育的遗传学病因研究进展

许多非梗阻性无精子症和严重少精子症患者的病因尚不清楚。据估计,其中约有30%的患者是由于染色体畸变或基因突变等遗传学因素引起的。男性不育的遗传学病因有染色体畸变、Y染色体微缺失和基因突变等,其中Klinefelter综合征和Y染色体微缺失最为常见。与男性不育相关的基因突变包括囊性纤维化跨膜介导的调节子(CFTR)基因、雄激素受体(AR)基因、胰岛素样因子3(INSL3)基因和富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体8(LGR8)基因。CFTR基因突变可导致囊性纤维化、输精管缺如和梗阻性无精子症。AR基因突变会引起雄激素不敏感综合征和生精损伤。INSL3和LGR8基因突变则与睾丸下降异常和隐睾相关。Meta分析显示,仅有3个遗传多态性与男性不育显著相关,即AZFc区部分缺失、雄激素受体(AR)基因(CAG)n长度和亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性。本文主要综述了男性不育常见的遗传学病因以及与男性不育相关的遗传多态性研究进展。

内皮损伤与勃起功能障碍研究进展

内皮在维护血管稳态、调节血管紧张度及血流、预防血管内血栓形成等方面起重要作用。血管内皮是阴茎勃起过程中的重要角色,ED多数情况下存在不同程度的内皮功能障碍,内皮损伤是ED的重要病理基础。不良生活方式、心血管疾病、氧自由基、炎症因子等均可导致内皮损伤。血管内皮具有自我修复机制,内皮损伤是损伤因素与修复因素失衡的结果。本文就内皮损伤机制、内皮损伤后的修复、内皮损伤与ED关系等方面的进展作一综述。

摩根摩根菌对碳青霉烯类药物耐药机制的研究

目的分析从外科重症监护病房(SICU)分离的对碳青霉烯类药物耐药的3株摩根摩根菌(M1、M2和M3)的耐药机制和传播方式。方法采用琼脂稀释法进行药物敏感性试验;肠杆菌科基因间重复性一致序列(ERIC)-聚合酶链反应(PCR)用于分析菌株的分子流行病学特征;特异性PCR扩增检测细菌编码β-内酰胺酶的基因;接合试验和提取质粒进行酶切分析耐药基因可传递性和耐药质粒的同源性;耐药基因两边序列测序分析耐药基因的遗传背景;提取外膜蛋白电泳分析菌株外膜蛋白的改变。结果 3株分离菌和对应的接合子均扩增出介导碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)-2型基因,其中M1和M2为相同克隆株;质粒接合试验成功传递了对碳青霉烯类药物的耐药性,KPC-2基因被携带在酶切后片段完全不同的3个质粒上,耐药基因的遗传背景却相同;3株菌均缺失了相对分子质量约为38 000的外膜蛋白而出现36 000的外膜蛋白。结论 3株菌来自2种克隆株,均携带KPC-2基因。该基因由3个不同的质粒携带,同一可移动序列可能介导了KPC-2基因在3株细菌的不同质粒上转移。产KPC-2型碳青霉烯酶及外膜蛋白缺失可能共同导致了所分离的摩根摩根菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药。

不育男性无精子症因子微缺失的分子与临床特征:5年研究回顾

目的:近年来,Y染色体长臂无精子症因子(AZF)微缺失与男性不育关系的研究已经取得了很大的进展。然而,AZF微缺失的形成机理及各种缺失类型与临床表型之间的关系还不十分确定。本研究的目的是探讨中国不育男性的Y染色体微缺失的发生率、缺失类型以及基因型与表型之间的关系。方法:本研究对2005年至2009年本院男科门诊502例非梗阻性无精子症和306例严重少精子症的不育男性进行Y染色体AZF缺失分析。结果:AZF总体缺失率为7.80%(63/808),其中无精子症不育男性缺失率为9.16%(46/502),严重少精症患者为5.56%(17/306)。完全的AZFa缺失或AZFb缺失患者的精液中均没有成熟精子,而AZFc缺失的表型是多样化的。1例部分AZFb缺失患者有成熟精子发生,精子密度呈轻度进行下降。最常见的缺失类型为AZFc b2/b4亚型,占60.32%(38/63),其中39.47%(15/38)的患者精液中能发现成熟精子,其中1例为自然遗传的AZFc b2/b4缺失。63例缺失患者中仅1例AZFc b2/b4缺失患者的精子密度超过2×109/L。结论:AZF微缺失对精子发生障碍具有良好的诊断和评估价值。对Y染色体微缺失的大样本临床研究有利于进一步明确基因型与表型的关系,更好地理解AZF缺失的机制。

45,X,der(Y)t(Y;13)不育男性患者的临床细胞和分子遗传学研究

目的:了解核型为45,X,der(Y)t(Y;13)(q11.1;q12),-13伴无精子症、双侧乳腺轻微发育和多发性皮下结节男性患者的分子遗传学特点。方法:进行常规染色体核型分析,用荧光原位杂交(FISH)进一步确定患者核型。用PCR-STSs以确定Yq上的断裂点。用DNA多态性方法检测位于13q12上的BRCA 2基因拷贝数。对患者的睾丸和皮下结节进行活检。结果:细胞遗传学和FISH证实患者SRY基因和Y染色体着丝粒位于13号染色体上。因此,患者核型为45,X,der(Y)t(Y;13)(q11.1;q12),-13.ish der(Y)(SRY+,DYZ3+,wcp13+)。Y染色体长臂上的AZFa,b,和C区域全部丢失,断裂点位于sY82以下。BRCA2基因的多态性检测无拷贝数的丢失。睾丸活检结果为唯支持细胞综合征。皮下结节病理检查为血管脂肪瘤。结论:患者的男性表型是由于基因组中存在SRY基因。无精子症、睾丸体积小与病理结果一致,是由于Y染色体Yq11.1→Yqter片段丢失所致。但血管脂肪瘤的分子机制仍然不清楚。

氨基糖苷类药物双圈耐药型鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基因研究

目的探讨在K-B法药物敏感试验中对氨基糖苷类药物双圈耐药的鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基因携带状况以及药物诱导对该基因mRNA表达量的影响。方法收集42株鲍曼不动杆菌,K-B法测定其药敏情况;PCR法扩增三种16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtB及rmtC;用RT-PCR的方法分析阿米卡星诱导前后耐药基因表达量。结果 90.4%(38/42)的菌株阿米卡星药敏纸片周围呈现双圈耐药,且均检测到armA,未检测到rmtB及rmtC,其余3株为敏感,1株为普通耐药,且PCR检测耐药基因为阴性。RT-PCR结果显示经阿米卡星诱导后细菌armA基因mRNA表达量显著上升。结论双圈耐药现象与armA基因诱导型表达有关。

精子质量参数分析的标准化与质量控制的研究进展

精液分析是评价男性生育能力的最基本测试。最近几年,对精液分析标准化的迫切需求已引起男科学家的广泛重视。本文对精子质量参数———精子密度、活动率和形态学分析的标准化及质量控制进行了综述。精子密度分析的关键是计数池的标准化,因此Cell-VU计数池应该是最佳的选择;精子活动率和精子形态学的分析由于主观性太强,CASA系统可能是其标准化的最终选择。精液质量参数分析的质量控制主要是质量控制材料的选择,以及在男科学实验室实施EQC和IQC项目,而一些监测质量控制的图表和计算方法应被相应地建立。

类风湿关节炎新血清学指标研究与临床初步应用

目的建立并完善类风湿关节炎(RA)血清学实验诊断体系,寻找新的RA标志性自身抗体,探讨其在RA疾病发生、发展中的诊断价值。方法采用肽酰精氨酸脱亚氨基酶(PAD)分别对人纤维蛋白原(hFib)和牛Ⅱ型胶原(bCⅡ)瓜氨酸化(cit-rullination,Cit),以环瓜氨酸肽(CCP)作对照,并选择CⅡ短肽(CⅡ260-272),建立检测3种抗原自身抗体的ELISA法,进行临床标本检测及与其他实验室指标进行相关分析,评价其对RA的诊断价值。结果抗Cit-hFib和抗Cit-bCⅡ抗体在RA患者血清中的检出率分别为59.4%和56.3%,均显著高于其他疾病和健康对照组(P均<0.01)。诊断RA的敏感性和特异性均较抗hFib和抗bCⅡ抗体有明显提高。抗CⅡ短肽抗体对RA的诊断效能与抗CCP抗体接近,对RA的诊断敏感性分别为67.2%和68.8%;特异性分别为95.3%和97.8%;阳性预测值分别为76.8%和88.0%;阴性预测值分别为92.6%和93.1%;阳性似然比分别为14.3和31.3;阴性似然比分别为0.34和0.32;Youden指数分别为0.625和0.666。在13例早期RA患者中,抗CⅡ短肽抗体和抗CCP抗体阳性率均为76.9%。抗CCP抗体对RA诊断的ROC曲线下面积(AUC)值为0.946,抗CⅡ短肽抗体为0.924。联合应用抗CⅡ短肽与抗CCP抗体、或抗CⅡ短肽与RF,均可进一步提高对RA的有效诊断水平。相关分析和一致性检验结果显示,各自身抗体均与抗CCP抗体显著相关,仅有抗Cit-hFib抗体、抗Cit-bCⅡ抗体与抗CCP抗体检出结果表现出较好的同步性(0.4<Kappa<0.75),检出符合率分别为84.4%(54/64)和78.1%(50/64)。各自身抗体水平均与C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)呈高度正相关(P均<0.01),提示与RA疾病活动程度密切相关;抗CⅡ短肽抗体水平有随RA临床症状改善而明显下降趋势。结论瓜氨酸化蛋白及其自身抗体在RA疾病发生、发展过程中起重要作用。抗CⅡ短肽抗体及抗CCP、抗Cit-hFib和抗Cit-bCⅡ抗体均与RA疾病活动性密切相关,这些抗体可能发展成为RA新的血清学监测和诊断指标。

刺梨汁促人急性单核细胞白血病U937细胞凋亡作用的研究

目的:探讨刺梨汁(RRTJ)促U937细胞凋亡作用和可能的机制。方法:不同浓度RRTJ在体外作用于人急性单核细胞白血病U937细胞株。应用光学显微镜观察细胞形态变化;细胞计数测定细胞生长情况;流式细胞仪分析细胞生长周期的变化;逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)观察凋亡相关基因bcl-2、bax表达的变化;硝酸还原酶法测定细胞一氧化氮(NO)分泌量;并通过测定细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性分析RRTJ对细胞的毒性作用。结果:刺梨汁显著抑制U937细胞生长,并表现出剂量依赖性。随RRTJ浓度增加,U937细胞凋亡率增高,baxmRNA表达量上升,而bcl-2 mRNA表达水平明显下降。U937细胞NO释放量也随RRTJ浓度增加而增加。结论:RRTJ可能是通过影响细胞生长周期、降低bcl-2/bax比值,同时诱导NO分泌,促进U937细胞凋亡。

早泄与中央型腰椎间盘突出相关性的初步研究

目的:研究早泄(PE)与中央型腰椎间盘突出(CLIDH)的相关性,以探究PE可能的病因,并寻求简便有效、无创的治疗方法。方法:按照入选标准对门诊PE患者行腰椎间盘(腰3～骶1)CT/MR检查,240例CLIDH阳性患者随机分为治疗组(n=180)和对照组(n=60),分别行腰椎牵引和口服盐酸舍曲林治疗。治疗前后,均利用中国PE患者性功能评价表(CIPE-5)进行评分,记录射精潜伏期和性生活满意度,评价疗效。结果:治疗组患者通过腰椎牵引治疗,可以显著提高射精潜伏期,提高性生活满意度,与治疗前相比具有极显著性差异(P<0.01)。对照组治疗前后疗效无显著性差异。治疗组与对照组疗效相比有显著性差异(P<0.05)。结论:CLIDH可能是造成大多数"不明原因PE"的重要病因之一,对此类PE患者行腰椎牵引治疗,无创,简便易行,疗效明显,为临床诊断和治疗PE提供了一个新的思路和方法,值得临床推广和普及。

两种精子分析系统的比较研究

目的:评估自动化精子质量分析仪SQA-V与计算机辅助精液分析(CASA)系统之间各主要参数的差异性及其在不育和生育男性精液质量分析中的应用。方法:用SQA-V和CASA系统分别检测12例正常生育者和73例不育患者新鲜精液标本,分别分析精子密度、精子活动率、活动精子浓度、精子活动力指数、精子头侧向位移、鞭打频率、精子曲线运动速度、精子前向运动速度、平均路径速度、直线性及前向性运动速度等参数,针对两者进行相关性分析。结果:不育组和生育组男性各项指标间存在显著差异,两种分析系统检测的精子密度之间(r=0.58,P<0.01)、活动精子浓度之间(r=0.75,P<0.01)、平均精子速度(SQA-V)和精子路径速度(CASA)之间(r=0.59,P<0.01)具有较好的一致性,SQA-V的活动精子指数(SMI)和CASA的前向性、曲线运动速度、精子运动的直线性、前向运动速度、平均路径速度、鞭打频率等参数具有显著相关性(P<0.05)。结论:SQA-V和CASA系统比较,在各主要参数上具有较好的一致性,能够反映临床不同组群患者精液的差异性。

单克隆抗体靶向治疗卵巢癌研究进展

卵巢癌(ovarian cancer,OC)是妇科生殖器官恶性肿瘤之一,死亡率占妇科肿瘤首位,主要原因在于其缺乏有效的早期诊断治疗措施、对常规化疗药物的耐药性和腹膜外转移。随着卵巢癌相关抗原被陆续发现,其特异性单克隆抗体以及抗体-抗肿瘤药物偶联物已成为卵巢癌治疗的新手段。通过靶向肿瘤抗原(cancer antigen 125,CA125)、黏蛋白1(mucin 1,MUC1)、人类表皮生长因子受体2(human epidermal factor receptor-2,HER2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)等目标抗原,针对性地治疗卵巢癌,有些已经显示出一定的临床疗效,具有很好的应用前景。阿巴伏单抗、Oregovomab、人乳脂肪球1(human milk fat globule 1,HMFG1)和曲妥珠单抗等已进入Ⅲ期临床试验中。

DPY19L2基因与圆头精子症研究进展

圆头精子症是一种严重的畸形精子症,临床上100%圆头缺陷精子的病例比较少见,这类患者精液中精子头部呈圆形,一般无顶体或者顶体异常,可伴有杂乱的中段和尾部。由于顶体内含有精子和卵细胞受精所需要的酶类,这类异常的精子无论体内或体外都不易自主与卵细胞受精,因而圆头精子症患者临床表现为不育。最新研究表明,一种编码跨膜结构域蛋白基因DPY19L2(dpy-19-like 2)的缺失是导致圆头精子产生的主要原因。本文就DPY19L2与圆头精子症的研究进展做一概述,为圆头精子症的基因诊断和分子机制研究提供依据。