ptr-MIR156a启动子克隆及特征分析

miR156a在火炬松、烟草、拟南芥中的表达与病原菌侵染密切相关。为了研究miR156a在杨树与病原菌互作过程中分子机制,以毛果杨全基因组DNA为材料,预测ptr-MIR156a启动子的大概区域,设计特异性PCR引物,克隆了ptr-MIR156a上游启动子区500、1 000和1 500 bp片段,并进行顺式作用元件分析,然后分别构建了绿色荧光蛋白(GFP)报告基因植物表达载体,最后通过原生质体的瞬时表达体系对其进行了活性检测。结果表明,1 500 bp片段活性最高,1 000 bp片段次之,500 bp片段活性最低。

‘南林895’杨PdNAC1基因克隆及蛋白的亚细胞定位

以‘南林895’杨（Populus deltoides×P．euramericana cv ‘Nanlin895’）为材料，通过RACE－PCR技术，获得了NAC1基因的全长cDNA，命名为PdNAC1。该序列含有1个长906 bp的开放阅读框，编码302个氨基酸。该蛋白的分子质量为34．23 ku，等电点为7．44。分析其氨基酸序列发现，该蛋白具有典型NAC转录因子特征，NAM结构域位于11-135个氨基酸之间，含有A、B、C、D、E 5个亚结构域，该区域可以结合DNA；而C端含有一个高度变异的转录激活区。利用杨树原生质体对PdNAC1蛋白进行细胞亚定位，结果发现PdNAC1不仅明显定位于细胞核中，而且在细胞膜上也有表达。但PdNAC1是否具有相应的跨膜结构域尚不明确。

假俭草EoNLA基因克隆与其转基因拟南芥在不同磷水平下的表型鉴定

【目的】磷元素是植物必需的大量营养元素,在植物的生长发育中必不可少。NLA(nitrogen limitation adap-tation)蛋白是一种RING型E3泛素连接酶,参与磷转运蛋白的泛素化调控,在植物体的磷素平衡调节方面发挥重要作用。以假俭草这类天然适应低磷土壤条件的植物为研究材料,通过研究假俭草EoNLA的磷高效转运分子机制,为草坪草适应酸性土壤生境的磷高效转运分子育种和栽培调控提供理论依据。【方法】通过RACE方法克隆获得EoNLA基因,应用生物信息学分析确定基因的全长序列及编码氨基酸序列,采用原生质体瞬时表达体系确定EoNLA蛋白膜定位;通过qRT-PCR方法分析EoNLA基因低磷诱导下的表达模式,并通过农杆菌介导转化拟南芥进行基因功能鉴定。【结果】EoNLA基因序列全长1 353 bp,编码一个长度为331个氨基酸的蛋白。该蛋白具有NLA蛋白典型的RING结构域和SPX结构域,EoNLA蛋白定位于细胞膜,EoNLA基因在根组织的表达量显著高于在茎和叶的表达。【结论】EoNLA基因具有根组织表达特异性,且基于拟南芥转基因植株进行的功能鉴定,进一步显示EoNLA基因具有磷素调控相关的功能。