NaI裂解法提取微量全血DNA

人全血DNA提取,常用的方法是溶血剂裂解红细胞后,用蛋白酶K、SDS等消化蛋白质,随后用酚、氯仿、异戊醇等有机试剂抽提纯化DNA,此类方法取血量多,且酚等有机试剂对人体有害;重蒸酚预处理过程复杂。我们参照文献报道的方法并加以改良,摸索出一种适于限制性片段长度多态性(RFLP)分析的DNA制备法,现介绍如下。 1 材料和方法 1.1 血样品 EDTA·K_3抗凝全血取自临床确诊脑梗塞病人60例,非脑梗塞病人35例,各采血0.5ml。 1.2 试剂 1.2.1 DNA制备试剂裂解液:0.32mol/L蔗糖,1% TritonX-100,5 mmol/LMgCl_2,10mmol/L Tris-HCl(pH 7.5)。

新生大鼠脑细胞凋亡与缺氧、缺血两因素析因研究

目的探讨新生动物缺氧缺血性脑病（ＨＩＥ）中脑细胞损伤时是否存在细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，Ａｐｏ），探索在ＨＩＥ发病机制中缺氧、缺血两因素与凋亡是否存在相关关系。方法通过建立ＨＩＥ标准化动物模型，应用ＨＥ染色、电镜、组织切片原位末端标记技术（Ｔｕｎｅｌ）等手段，分别对缺氧、缺血、缺氧缺血和对照四组动物的实验侧脑皮质、海马中凋亡细胞的形态、特点、密度进行观察和比较。结果光镜和电镜显示细胞皱缩、染色质断片、Ａｐｏ小体；原位标记显示在脑皮质、海马回、丘脑均有裂解的ＤＮＡ存在；四组凋亡指数：脑皮质区域、海马区域两因素及其交互作用均有统计学意义（Ｆ＝３５６．３４，Ｐ＜０．０１，Ｆ＝４１７．４４，Ｐ＜０．０１）。结论缺氧、缺血两因素均可引起脑细胞凋亡，联合作用与脑细胞凋亡有明显相关性，在ＨＩＥ中细胞死亡不仅是传统的坏死结果，而且存在着凋亡机制的作用。

缺氧缺血对新生大鼠脑皮质细胞凋亡的影响

为了探讨新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）脑损伤时，是否存在细胞死亡的另一种形式—凋亡（apoptosisApo），选用48只健康新生7天的SD大鼠，建立HIE标准化动物模型，将其随机分为对照组和缺氧缺血后1、4、18、24、40、72h、7天组。应用HE染色、电镜、组织切片原位末端标记技术（TUNEL）等手段，观察和比较各组实验侧脑皮质细胞的凋亡形态、特点和密度。结果光镜和电镜下可见细胞皱缩、核碎裂、Apo小体；原位标记显示实验侧皮质、海马回、丘脑均有末端标记阳性的细胞，证实HIE中的Apo现象。8组皮质区阳性细胞数／mm2F＝109．21P＜0．001。两两比较结果：各级之间P＜0．001。说明缺氧缺血可引起脑细胞凋亡，其强度与细胞凋亡有明显统计学意义。其中在皮质区18h点标记细胞最明显，Apo出现早于坏死，在缺氧缺血脑损伤的早期。提示机体在遭遇病理因素时，首先启动自身内部机制，让部分细胞主动性的死亡。

抗氧化剂NAC抑制新生大鼠脑缺氧缺血损伤相关的神经细胞凋亡

目的 研究抗氧化剂 (NAC)对缺氧缺血脑损伤引起的神经细胞凋亡的作用。方法 利用新生大鼠缺氧缺血脑损伤的动物模型 ,通过末端转移酶介导的原位缺口标记 (TUNEL)法 ,检测并比较在有或无药物保护下脑皮质、海马中神经细胞凋亡的程度。结果 抗氧化剂(NAC)处理显著减少缺氧缺血脑组织中凋亡阳性细胞数。结论 抗氧化剂 NAC可有效抑制缺氧缺血脑损伤引起的神经细胞凋亡 ;

用银染法测定人睫状神经营养因子基因的核苷酸序列

目的介绍一种采用银染法的非同位素ＤＮＡ序列分析技术。方法用ＴａｑＤＮＡ聚合酶扩增ＤＮＡ模板进行测序反应，在测序反应中不使用任何标记，测序凝胶上的ＤＮＡ条带直接用灵敏的银染法检出。结果用银染法测定了人睫状神经营养因子基因的核苷酸序列，得到的ＤＮＡ测序图谱与同位素相近，但全部结果可在测序反应后２小时内得到。结论银染法是一种十分经济方便并且快速可行的ＤＮＡ测序方法。