视网膜色素上皮细胞吞噬纤维连接蛋白时细胞内信号传导通路的研究

目的 探讨视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞对纤维连接蛋白(fibronectin ,FN)的吞噬及相关细胞内信号传导通路的作用。方法 以FN包被的聚苯乙烯微球 (微球 )作为吞噬标记物 ,建立人胎儿RPE细胞吞噬模型。所研究的细胞内信号传导通路包括蛋白激酶C(proteinkinaseC ,PKC)通路、酪氨酸激酶 (tyrosinekinase ,TK )通路和磷脂酰肌醇 3 激酶(phosphatidylinositol 3 kinase ,PI 3 K)通路 ,分别使用这 3种信号通路的抑制剂预处理RPE细胞 ,37℃吞噬 3h ,流式细胞仪定量检测吞噬指数。结果 与对照组比较 ,RPE细胞对FN包被微球有明显吞噬作用 (P <0 0 5 )。PKC抑制剂PMA(phorbol 12 myristate 13 acetate,10 0nmol/L)或CalphostinC (4 0 0nmol/L)非特异性地增加了RPE细胞对FN包被或未包被微球的吞噬指数 (P <0 0 1) ;TK和PI 3K的抑制剂Genistein (10 0 μg/ml)与Wortmannin(5 μmol/L)分别降低了FN包被微球的吞噬指数 (P <0 0 0 1) ,但对对照组无影响。联合使用不同抑制剂Genistein或Wortmannin可对抗PMA对FN吞噬的增强作用 ,但二者联合使用则具有相累加的抑制吞噬作用。结论 RPE细胞对FN的吞噬受细胞内PKC、TK和PI 3 K信号传导通路的调节 ,此结论将为进一步研究治疗增殖性玻璃体视网?

细胞外基质蛋白和转化生长因子β_2共同作用诱导人视网膜色素上皮细胞向肌纤维母细胞转化

目的了解转化生长因子β2(TGFβ2)和细胞外基质(ECM)调节人胚胎视网膜色素上皮(hfRPE)细胞向肌纤维母细胞分化的作用,确定这种调节的信号传导机制。方法hfRPE细胞培养于由ECM包被或未包被的培养皿上,培养液中加入或不加入TGFβ2,用免疫组织化学、流式细胞仪、蛋白印迹技术检测α-平滑肌机动蛋白(α-SMA)的表达。在培养液中分别加入calphostinC,染料木黄铜(genistein),PD98059和渥曼青霉素(Wortmannin),测定α-SMA的表达。结果hfRPE细胞培养于ECM包被的培养板上,培养液中加入TGFβ2后,出现明显的形态学改变,包括细胞伸展变长,可见肌动蛋白微丝的形态。流式细胞仪及免疫细胞化学检测结果显示,培养液中加入TGFβ2可明显增加α-SMA的表达,并与剂量成正相关。当TGFβ2的刺激浓度为50ng/ml时,与培养于未包被的培养板上的hfRPE细胞相比,用纤维连接蛋白(FN)包被培养板后,总的平均荧光强度(TMFI)增加(38.01±1.14)%(P<0.05)。蛋白印迹技术检测显示同样的结果。而上述效应可以大部分被蛋白激酶C(PKC)通路抑制剂calphostinC(10nmol/L)抑制(P<0.01)。结论TGFβ2可诱导hfRPE细胞向肌纤维母细胞转化,并与其剂量成正相关,这种作用可被FN加强。TGFβ2和ECM的这种调节作用可能是通过PKC细胞内信号传导通路而发挥作用。

冰试验诊断重症肌无力上睑下垂的价值

目的观察冰试验在重症肌无力(MG)上睑下垂诊断中的价值。方法对32例MG上睑下垂患者和33例非MG上睑下垂患者进行冰试验和休息试验,MG上睑下垂患者另行新斯的明实验。所有接受检查者均在同一天交替进行冰试验和休息试验2次,MG患者在接受冰试验和休息实验后行新斯的明实验。由两名不知道其临床诊断的观察者在试验前后用精确度为0.5mm的20mm钢尺测量上下睑缘中点之间的宽度,以同一受检者两次冰试验或休息试验前后睑裂宽度之差的平均值为上睑下垂改善程度。结果冰试验和休息试验均能改善部分MG上睑下垂,但对非MG上睑下垂无改善,两者的特异度均为100%。冰试验比休息试验能更大程度的改善MG上睑下垂,具有更高的灵敏度(78%)。对于完全性上睑下垂,冰试验亦能有效的改善其睑裂宽度。与新斯的明试验相比,冰试验敏感性略低,但冰试验检查时间短,无需注射,避免了注射带来的不适,而且无任何毒副作用。结论冰试验是诊断MG上睑下垂的一种简单、安全且灵敏度和特异度较好的检查手段,有较好的临床应用价值。

肝细胞生长因子诱导实验性视网膜脱离的病理机制研究

目的观察肝细胞生长因子（HGF）对视网膜色素上皮（RPE）细胞屏障功能的影响以及RPE内过度表达HGF导致视网膜脱离（RD）的病理机制。方法编码HGF（AdCMV．HGF）、绿色荧光蛋白（AdCMV．GFP）的E1／E3缺失的腺病毒载体，以5×10^4噬斑形成单位（pfu）／眼注射到成年有色兔的视网膜下。检查注射后3、7、14、28d时的眼底及组织病理变化，利用免疫组织化学和酶联免疫吸附试验（EusA）3-法检测HGF在视网膜和玻璃体的表达水平。结果对照组注射AdCMV．GFP眼显示GFP几乎仅表达于PRE单核细胞层，AdCMV．HGF注射眼在注射点处的PRE细胞出现强的HGF免疫阳性反应。玻璃体内HGF的表达水平在注射7d后达到最高峰、28d后降低到基础水平。在HGF的表达期内AdCMV．HGF注射眼出现慢性RD和脉络膜慢性炎症。在RD区域，视网膜下的空间内可见增生性的RPE细胞，部分实验兔眼还产生多层的细胞膜结构。结论RPE内过度表达的HGF能引发慢性浆液性RD，同时伴有视网膜下RPE增生。提示HGF可能作为治疗RD的作用靶点。

CD25含量与T辅助细胞对IL-2的促增殖反应性

目的研究不同激活状态下T辅助细胞（Th）中IL－2R各亚基的表达变化及对IL-2反应的相关性。方法以包被的抗CD3抗体激活Thl细胞，同时设立未激活对照。’H掺入法测定其对IL-2的促增殖反应；real－timePCR检测IL-2R各亚基编码基因的表达；流式细胞术检测CD25及CDl22的含量；以I125标记的IL-2检测不同状态的Thl细胞对IL-2的亲和力。脂质体法转染IL-2RotsiRNA至激活的Thl细胞，比较不同CD25含量时Thl细胞对IL-2的反应性。自小鼠体内分离CD4细胞，以抗CD3抗体激活后在不同时间点收集细胞，比较它们的CD25含量及对IL-2的反应性。结果较未激活对照相比，激活的Thl细胞中IL-2Rα亚基，即CD25的表达显著增加，而其他两个亚基则无变化；同时伴有对IL－2亲和力的升高，但对IL-2的促增殖反应性却显著降低。以siRNA适当下调IL-2Rα基因的表达则可显著提高激活的Thl细胞对IL-2的反应性。虽然激活后的naiveCIM细胞对IL-2的反应性明显增加，但却不与CD25的含量及激活度正相关。最高的IL-2反应性出现在低度激活的CD4细胞中。结论CD25在激活后的Th细胞中显著增多，并可通过自身数量的变化来调节所在细胞对IL-2的促增殖反应性。适度高表达的CD25可使靶细胞具有最高的IL-2反应性，过度表达的CD25则可导致对IL－2反应性的降低。

视网膜移植后结构和功能的重建

视网膜退行性变性疾病是一种视力渐进性减退最终丧失而致盲的眼底疾病。当今世界上治疗视网膜退行性变性疾病的方法主要有：视网膜移植（包括视网膜细胞移植、片层移植、全层移植等），人工视网膜植入，基因治疗和药物治疗等，其中用视网膜移植的方法来治疗视网膜退行性变性疾病的基础研究及临床应用在近10余年中开展的最普及和深入，

干眼中医内外治法的临床与基础研究

干眼是由于泪液的量或质,或流体动力学异常引起的泪膜不稳定和(或)眼表损害,从而导致眼部不适症状及视功能障碍的一类疾病.干眼常见症状有眼部异物感、干涩感、烧灼感、眼胀眼痛、眼疲劳等,严重影响人们的生活.在祖国医学中,干眼属于"白涩症""神水将枯"范畴.其危险因素主要有老龄、女性、高海拔、糖尿病、翼状胬肉、空气污染、眼药水滥用、使用视屏终端、角膜屈光手术、过敏性眼病和部分全身性疾病等.由于视屏终端及电子产品的泛滥应用,该病发病年龄渐趋于年轻化.近年来干眼在我国的发病率逐渐上升,约21%~30%,明显高于欧美国家.已知干眼的发病机制是全身病理变化所导致的局部病变,主要病因病机有免疫炎性因素、性激素失衡、神经机能障碍及细胞凋亡等导致泪液质和量改变,及泪膜稳定性下降.目前国际上对干眼的治疗,主要为人工泪液点眼,此种方法仅为对症治疗而非对因治疗,部分患者使用人工泪液后并不能缓解干眼症状,甚至加重.中医药外用内服治疗干眼有几千年历史,有肯定的疗效,值得进一步研究和开发.