甲基叔丁基醚对胎鼠神经元和神经递质影响

目的探讨大鼠妊娠期甲基叔丁基醚(MTBE)暴露对胎鼠脑组织神经元型一氧化氮合酶(nNOS)及神经递质谷氨酸(Glu)的影响。方法40只健康成年昆明种小鼠于妊娠第0 d开始至妊娠结束期间,用食用油稀释的不同浓度MTBE 0,25,100,400,800 mg/(kg.bw)进行灌胃染毒,每天1次,直到胎鼠出生。用免疫组化的方法(SABC)观察胎鼠脑组织中nNOS和神经递质Glu免疫阳性神经元的表达。结果当MTBE的剂量为400 mg/(kg.bw)时,胎鼠大脑皮质、海马和小脑nNOS和Glu阳性神经元细胞数较对照组减少(P<0.05),染色强度变浅,并存在明显的剂量-效应关系。结论妊娠期母鼠接触MTBE可致胎鼠脑组织nNOS及神经递质Glu的表达下降。

TBTCl致PC-12细胞凋亡及Bax/Bcl-2表达的变化

目的研究氯化三丁基锡(TBTCl)致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC-12细胞)凋亡作用及Bax与Bcl-2 mRNA表达的变化。方法当PC-12细胞处于代数生长期时,分别加入不同浓度(0.000、0.013、0.025、0.050、0.100、0.200、0.400 mg/L)的TBTCl处理48 h,MTT试验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测Bax和Bcl-2 mRNA的含量。结果随着TBTCl染毒浓度的增高,其对PC-12细胞增殖的抑制作用逐渐增强,当TBTCl浓度为0.400 mg/L时,其抑制率达到(68.25±3.83)%,IC50=0.15 mg/L,而细胞的凋亡率由对照组的(0.8±0.3)%上升到(25.4±1.5)%;TBTCl能上调Bax基因和下调Bcl-2基因的表达,0.400 mg/L TBTCl组Bax和Bcl-2分别是对照组的5.1±0.6倍和0.25±0.08倍。结论TBTCl能抑制PC-12细胞的生长,诱导细胞凋亡,其可能机制是上调Bax基因的表达和下调Bcl-2基因的表达。

茶多酚对铀矿尘致支气管上皮细胞损伤保护作用

目的探讨铀矿尘诱发细胞氧化损伤及茶多酚(tea polyphenols,TPs)的保护作用。方法以人支气管上皮细胞(BEAS-2B)为靶细胞,分别用辣根过氧化物酶介导的酚红氧化法、细胞色素C还原法和番红花红褪色法测定细胞外液过氧化氢、超氧阴离子和羟自由基含量;细胞内H2O2和O2.-分别用2,7-二氯荧光黄双乙酸盐和氢化乙锭标记,荧光法测定荧光产物2,7’-二氯荧光黄和溴乙锭荧光强度,多核细胞法体外研究细胞次黄嘌呤磷核糖基转移酶基因(HPRT)突变,自动生化仪测量乳酸脱氢酶。结果 BEAS-2B细胞经铀矿尘染毒后,细胞内和细胞外ROS含量明显增高,高剂量组细胞上清中超氧阴离子为(10.48±0.75)μmol/L,茶多酚保护组为(9.31±0.71)μmol/L;细胞乳酸脱氢酶溢出,HPRT突变率升高,高剂量组细胞突变率为1.092‰,茶多酚保护组为0.925‰,TPS对铀矿尘诱发的损伤有明显的抑制作用。结论铀矿尘可造成细胞的氧化损伤,TPS通过清除活性氧而达到保护作用,可为铀矿尘损伤的防护提供有效措施。

铀矿尘致大鼠肺纤维化过程中Ⅰ和Ⅲ型胶原及层粘连蛋白表达的变化

目的探讨铀矿尘致大鼠纤维化过程中Ⅰ、Ⅲ型胶原、层粘连蛋白（Laminin，LN）表达的变化特征。方法60只Wistar大鼠随机分为铀矿尘组（30只）和对照组（30只），铀矿尘组大鼠一次性非暴露气管内滴注20mg／ml的粉尘悬液1ml，对照组大鼠一次性气管内滴注生理盐水1ml，分别于处理后7、14、21、30及60d每组随机处死6只，取肺组织，HE染色观察肺组织形态学改变，天狼猩红染色法观察肺组织I、Ⅲ型胶原变化，免疫组织化学法检测LN蛋白的表达。结果铀矿尘致肺组织纤维化过程中可见Ⅰ、Ⅲ型胶原的大量增生，染尘后早期主要以Ⅰ型胶原增生为主。铀矿尘组21、30、60d时Ⅰ型、Ⅲ型胶原纤维面积百分比明显增高，与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。LN主要见于肺组织内血管、支气管周围、血窦壁以及肺间隔的基底膜，形态上以增粗的线状或丛状分布为主。铀矿尘组21、30、60d时肺组织中LN阳性细胞积分吸光度（14．89±2．25、22．98±2．29、30．34±2．19）增加，与对照组（9．06±1．21、8．98±0．86、10．04±2．00）比较，差异有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）。结论铀矿尘诱导大鼠肺组织纤维化早期以Ⅰ型胶原纤维为主，后期Ⅰ型、Ⅲ型胶原纤维均大量增多，分布范围扩大。肺组织过程中有LN高表达。

静态顶空-毛细管柱气相色谱法检测水中甲基叔丁基醚

目的：建立适用于水中甲基叔丁基醚的静态顶空气相色谱测定方法。方法：采用静态顶空极性毛细管柱气相色谱法测定水中甲基叔丁基醚。结果：在所建立的实验条件下水中甲基叔丁基醚的检出限为0.0163μg/L,线性范围为0.0156～120 mg/L,其相关系数r=0.9997,样品的加标回收率为92.6%～100.1%,相对标准偏差（RSD）低于1.1%。结论：此方法能够用于分析水中甲基叔丁基醚。

姜黄素对高脂饮食大鼠血脂含量和caveolin-1表达的影响

目的观察姜黄素对高脂饮食大鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量和caveolin-1表达的影响。方法将40只健康成年雄性大鼠分为正常对照组(普通饲料喂养)、高脂血症模型组(高脂饲料喂养)、姜黄素低剂量组(高脂饲料+姜黄素100mg/kg.bw/d)、姜黄素高剂量组(高脂饲料+姜黄素200mg/kg.bw/d)。分别于实验开始前1d、实验第8周末禁食12h后,测血清TC、TG、LDL-C含量的变化。同时Western-Blot印迹法检测大鼠血管壁caveolin-1表达的变化。结果与正常对照组比较,高脂血症模型组的TC、TG、LDL-C分别由对照组的(1.58±0.25)、(0.55±0.06)、(0.49±0.06)mmol/L升高到高脂饮食组的(3.47±0.35)、(0.92±0.07)、(0.88±0.04)mmol/L,并伴随caveolin-1蛋白表达水平下降3.25倍。姜黄素的介入能降低高脂饮食大鼠TC、LDL-C、TG的含量以及促进其caveolin-1的表达(P<0.05)。结论姜黄素具有降低高脂饮食大鼠TC、LDL-C、TG含量的作用,其作用机制可能与促进caveolin-1表达有关。

氯化三丁基锡对小鼠肢芽细胞遗传毒性的实验研究

目的了解环境污染物氯化三丁基锡(TBTCl)对小鼠胚胎肢芽细胞的遗传毒性。方法将孕12 d昆明种小鼠颈椎脱臼处死,分离胚胎,切取肢牙,剪碎,0.125%胰酶消化,用无血清的Ham’s F12基础培养基将其制成单细胞悬液。加入不同浓度的TBTCl,使其终浓度分别为:0、0.1、0.2、0.4、0.8 mg/L。37.5℃恒温孵育2 h,取细胞悬液做彗星实验。结果TBTCl染毒组随染毒剂量的浓度的增高,肢芽细胞彗星拖尾率和尾长分别从对照组的4.0%和(9.7±4.3)μm上升到0.8 mg/L TBTCl组的61.7%和(26.9±12.5)μm,呈明显的剂量-反应(效应)关系。结论TBTCl能损伤昆明种小鼠胚胎肢芽细胞DNA,具有遗传毒性。

氯化三丁基锡对斑马鱼胚胎发育的影响

目的观察氯化三丁基锡(Tributyltin chloride,TBTCl)对斑马鱼胚胎发育和幼鱼死亡的影响。方法成年健康斑马鱼雌雄按1∶1的比例交配产卵,分别用不同质量浓度的TBTCl对受精后4 h(Four-hour post-fertilization,4 hpf)斑马鱼进行染毒实验,统计斑马鱼胚胎受精后48 h的心率,72 h的孵出率,24、48、72、96、120 h的死亡率和畸形率。结果与对照组相比较,随着TBTCl染毒质量浓度的增加,斑马鱼胚胎的孵化率降低、心跳减缓、畸形率和死亡率增加。当TBTCl达到80μg/L时,斑马鱼的48 hpf的心率由对照组的(182.5±3.6)次/min下降到(130.3±3.2)次/min,72 hpf的孵出率由对照组的97.46%下降到23.08%,并且120 hpf的死亡率为65.00%、畸形率为69.17%。结论TBTCl能影响斑马鱼胚胎发育,导致斑马鱼胚胎和幼鱼的畸形与死亡。

铀矿尘致大鼠肺纤维化中转化生长因子β1的表达

目的探讨铀矿尘诱导肺组织纤维化过程转化生长因子-β1(TGF-β1)在肺组织中的表达以及TGF-β1含量的变化。方法36只大鼠随机等分为铀矿尘组和对照组。采用一次性非暴露式气管内滴注染尘方法,铀矿尘组每只大鼠气管内滴注20mg/ml的粉尘悬液1ml,对照组气管内滴注生理盐水1ml,分别于处理后第14、30d及60d每组随机处死6只取样,观察肺组织病理形态改变以及肺组织中TGF-β1的表达,测定肺匀浆和血浆中TGF-β1含量的改变。结果铀矿尘组在染尘后第14d时肺组织主要表现为炎症改变,第30d时出现纤维增生同时TGF-β1表达增强,第60d时表现为大量的纤维增生并伴有TGF-β1强表达。肺匀浆和血浆中TGF-β1含量在第14d时高于对照组,第30d及60d时肺匀浆和血浆中TGF-β1含量显著高于对照组(P<0.01)。结论铀矿尘诱导肺组织纤维化过程中存在TGF-β1高表达,肺匀浆和血浆中TGF-β1含量明显增加。

氯化三丁基锡致巨噬细胞凋亡作用

目的探讨氯化三丁基锡(tributyltin chloride,TBTCl)致巨噬细胞株RAW264.7细胞的凋亡作用。方法当RAW264.7细胞处于代数生长期时,分别加入不同浓度(0.0,0.025,0.05,0.10,0.20,0.40mg/L)的TBTCl处理48h,分别用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,观察TBTCl对RAW264.7细胞增殖影响;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色法观察凋亡细胞的形态,流式细胞仪检测TBTCl对RAW264.7细胞的凋亡率。结果TBTCl能抑制RAW264.7细胞的增殖,其半数抑制浓度(IC50)=0.179mg/L;TBTCl也能诱导细胞的凋亡,当TBTC1达到0.40mg/L时,细胞凋亡率达到19.5%。结论TBTC1可诱导细胞凋亡。