解剖学知识融入生理学教学中的探索与实践

生理学是一门研究机体生命活动各种现象及其功能活动规律的学科,是医学院校的重要基础课程。如何在生理学教学过程中融入解剖学知识,在促进医学生专业素质提升的同时潜移默化地提高生理学教学质量,真正做到“课程育人、专业育人”,培养德才兼备的高素质医学人才,是生理学教学改革的关键。文章探讨了解剖学知识融入式教学模式在医学生理学教学中的应用。在传统课堂教学的基础上,教师通过精选与生理学课程知识密切联系的解剖学知识,引导学生知识体系的构建与讨论,以加深学生对生理学知识的理解与掌握,并且拓展视角,促进学生自主学习能力和综合能力的培养与提高。

胞外酸化经ASIC1/RIP1途径抑制TFEB介导的巨噬细胞脂噬

目的 探讨胞外酸化对巨噬细胞脂噬的影响及其作用机制。方法 采用RAW264.7巨噬细胞,以pH 6.5培养液与25 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育24 h构建胞外酸化诱导的泡沫细胞模型。分别以ASIC1特异性阻断剂PcTx-1和RIP1抑制剂Nec-1干预胞外酸化诱导的RAW264.7巨噬细胞24 h,油红O染色检测细胞内脂质蓄积;蛋白质印迹(Western blot)检测总ASIC1、膜ASIC1、p-RIP1 Ser166、p-TFEB Ser142、LC3和p62蛋白的表达;激光共聚焦显微镜观察脂滴(Bodipy示踪)与自噬标志物LC3II和LAMP1共定位;透射电镜观察细胞内脂滴和脂噬泡的数量变化;胆固醇荧光试剂盒检测ABCA1介导的胆固醇流出。结果 与pH 7.4组相比较,pH 6.5胞外酸化组胞内的脂质蓄积和细胞质膜上的ASIC1蛋白表达显著增加,p-RIP1Ser166、p-TFEB Ser142水平升高,LC3II蛋白减少和p62蛋白增加,脂滴与LC3II和LAMP1的共定位都分别减少,细胞内的脂滴数量显著增加,自噬体和脂噬泡的数量则明显减少,ABCA1介导的巨噬细胞内胆固醇流出显著减少。然而,胞外酸化对RAW264.7巨噬细胞的上述效应能被ASIC1特异性阻断剂PcTx-1和RIP1抑制剂Nec-1所取消。结论 胞外酸化经激活ASIC1/RIP1途径促进TFEB磷酸化抑制巨噬细胞脂噬,ASIC1可能是防治动脉粥样硬化等脂质蓄积疾病的新靶点。

神经肽Y诱导血管平滑肌细胞凋亡相关基因表达与细胞内液pH变化的关系

为探讨细胞内液pH在神经肽Y诱导血管平滑肌细胞凋亡过程中的变化 ,以体外培养血管平滑肌细胞模型为研究对象 ,运用激光共聚焦显微镜和免疫荧光组织化学技术 ,定量和动态观察研究神经肽Y诱导血管平滑肌细胞凋亡相关基因bcl 2和bax表达与细胞内液pH变化之间的关系。结果发现 ,在神经肽Y作用下 ,体外培养的血管平滑肌细胞凋亡相关基因bcl 2和bax表达的平均荧光值分别为 134 9.6 7± 10 8.2 8和 1397.5 0± 10 4.43,与对照组的 986 .6 4± 91.2 2和 10 6 0 .44± 10 7.5 4相比 ,差异明显 (P <0 .0 1) ,bax与bcl 2两者平均荧光值之比为 1.0 4;神经肽Y还可降低血管平滑肌细胞内液pH的平均荧光值 ,使细胞浆酸化。此结果提示 ,神经肽Y诱导血管平滑肌细胞凋亡相关基因的表达与神经肽Y降低细胞内液酸碱度、细胞浆酸化有关。

去甲肾上腺素和刺激隐神经对大鼠体感皮层Ⅰ区神经元自发活动的调制

目的 :探讨去甲肾上腺素是否对体感皮层Ⅰ区神经元的自发活动具有调制作用 ,以及这种调制作用是否影响体感皮层对传入信息的感受。方法 :以SD大鼠为实验对象 ,采用多管玻璃微电极刺激记录技术和微电泳注射的方法 ,观察了不同剂量的去甲肾上腺素和刺激隐神经单独作用和共同作用于体感皮层Ⅰ区神经元时自发活动平均放电率的变化。结果 :去甲肾上腺素能易化体感皮层Ⅰ区电泳部位神经元的自发活动 ,使平均放电率增大。当微电泳电流强度从 5nA逐渐加大至 145nA时 ,平均放电率的增加值从 (0 .5 2± 0 .47)脉冲 /s增大到 (2 4.1± 6 .9)脉冲 /s ,表明易化作用逐渐加强 ,且呈剂量———效应正相关依赖关系。去甲肾上腺素对体感皮层Ⅰ区神经元的自发活动有抑制效应 ,但无剂量依赖关系。刺激隐神经的电流强度较弱 ,单纯A类纤维传入时对记录部位神经元的自发活动有抑制作用 ;刺激强度较强 ,A类和C类纤维共同传入时 ,能易化记录部位的自发活动。而且发现 ,去甲肾上腺素与传入信息对体感皮层Ⅰ区神经元自发活动的调制有相互作用 :去甲肾上腺素既能取消传入信息对体感皮层Ⅰ区神经元自发活动的兴奋效应 ;又能使其抑制作用减弱。结论 :去甲肾上腺素通过调制体感皮层Ⅰ区神经元的自发活动来改变信号一噪声比 。

氮芥所致DNA损伤分子标志物探讨

目的 利用烷化剂的毒理机制 ,评价生长抑制和DNA损伤 (GrowtharrestandDNAdamage,Gadd)基因的表达作为DNA损伤的分子标志物的可行性。方法 通过烷化剂类药物氮芥诱导人肝瘤HepG2细胞 ,运用RT -PCR的方法检测Gadd基因的表达水平 ,同时佐以MTT试验、单细胞凝胶电泳试验来分析氮芥对细胞的毒性作用和DNA损伤程度。结果 氮芥能诱导Gadd基因不同程度的表达 ,但随着浓度和时间的增加有由表达增强逐渐转为抑制的趋势 ;氮芥对人肝瘤HepG2细胞能产生明显的DNA损伤作用 ,有浓度依赖关系 (rs=0 5 91 ,P <0 0 1 ) ;氮芥对细胞有毒性作用 ,不同浓度的氮芥 (0 5～ 4 0 μg/L)使细胞存活率从 97%下降到 5 2 %。结论 Gadd基因的表达可以作为判断DNA损伤的比较敏感的分子标志物。

神经肽Y对人血管平滑肌细胞脂质代谢的调制作用

为探讨神经肽Y在血管平滑肌细胞中对脂质代谢是否具有调制作用 ,以成人血管平滑肌细胞体外培养模型为研究对象 ,经不同浓度的神经肽Y作用后 ,运用激光扫描共聚焦显微镜和免疫荧光组织化学技术 ,定量观察神经肽Y对人血管平滑肌细胞的低密度脂蛋白受体表达的影响。结果发现 ,对照组人血管平滑肌细胞的低密度脂蛋白受体表达的平均荧光强度为 2 4 4 3± 1 89,而在浓度为 1 0 8mol L、1 0 7mol L、1 0 6mol L和 1 0 5mol L的神经肽Y作用下 ,各组的平均荧光强度分别为 2 0 1 5± 1 64、1 890± 1 4 5、1 841± 1 2 3和 1 786± 1 36 ,与对照组相比分别下降了1 7.49%、2 2 .62 %、2 4 .64 %和 2 6 .92 % (P <0 .0 1 ) ,且各浓度组之间多有显著差异 ,呈现一定的剂量依赖效应。结果提示 ,神经肽Y很可能通过下调人血管平滑肌细胞低密度脂蛋白受体的表达 ,从而影响血管平滑肌细胞的脂质代谢。

细胞内游离钙离子在神经肽Y刺激血管平滑肌细胞增殖中的作用

为探讨细胞内游离钙离子在神经肽Y刺激血管平滑肌细胞增殖过程中的变化 ,以体外培养的血管平滑肌细胞模型为研究对象 ,运用激光共聚焦显微镜和免疫荧光组织化学技术 ,定量和动态观察了神经肽Y对血管平滑肌细胞内游离钙离子浓度与血管平滑肌细胞增殖间的相互关系。结果发现 ,神经肽Y组中血管平滑肌细胞的增殖活度 (MTT法 )和增殖细胞核抗原的表达较对照组明显增强 ;与此同时 ,神经肽Y作用下体外培养的血管平滑肌细胞内游离钙离子浓度也逐渐升高。此结果提示 ,神经肽Y刺激血管平滑肌细胞增殖的细胞内信号传导机制与神经肽Y提高细胞内游离钙离子浓度有关。

去甲肾上腺素调制大鼠体感皮层神经元电活动的受体机制Ⅰ.α-肾上腺素能受体的作用

目的 :探讨α-肾上腺素能受体在去甲肾上腺素 (NA)调制大鼠体感皮层神经元的诱发和自发放电活动中的作用。方法 :用SD大鼠、多管玻璃微电极刺激和记录、微电泳注射 ,以及对诱发单位放电 (SI-SEUD)过程作标准化互协方差函数 (NCCVF)处理 ,对自发放电过程作平均放电率 (MFR)处理 ,观察微电泳去甲肾上腺素、α -肾上腺素能受体拮抗剂酚妥拉明和育亨宾前后放电过程的变化。结果 :当小剂量 (2 0nA)NA使SI -SEUD的积分值减少 (P <0 .0 0 1) ,对其产生抑制效应 ,微电泳α -肾上腺素能受体拮抗剂酚妥拉明和育亨宾都能阻断这种效应 ,使NCCVF积分值恢复到微电泳前的对照水平 ;当大剂量 (80nA)NA使SI -SEUD的积分值加大 (P <0 .0 0 1) ,对其产生易化效应时 ,微电泳酚妥拉明能部分阻断该种易化作用 (与微电泳NA比较 ,P<0 .0 1) ,使SI -SEUD积分值朝向微电泳前的对照水平变化 (与对照实验比较 ,P <0 .0 5 ) ;而微电泳α2 -肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾无此作用 ;③当中等剂量 (5 5nA)NA使体感皮层神经元自发放电的MFR明显升高 (P <0 .0 0 1) ,对其产生兴奋效应时 ,微电泳α2 -肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾能阻断这种兴奋效应 ,使其MFR降低到对照水平。结论 :去甲肾上腺素对体感皮层Ⅰ区神经元的抑制诱发放电和易化自发?

生长抑制和DNA损伤基因表达对氮芥所致DNA损伤的监视作用

目的探讨生长抑制和DNA损伤(growtharrestandDNAdamage,Gadd)基因表达对DNA损伤的监视作用。方法以1、5ng/μl的烷化剂氮芥处理人肝癌HepG2细胞3、24、48h后提取细胞总RNA,运用逆转录(RT)-PCR方法检测Gadd基因的表达水平。结果分别用1ng/μl氮芥处理肝癌细胞3、24、48h和分别用1、5ng/μl氮芥处理肝癌细胞24h,Gadd基因的表达都呈现由增强(P<0.05)转为抑制的趋势,但两者均高于阴性对照水平(P>0.05)。结论Gadd基因表达能够监视氮芥所致的DNA损伤。

高果糖饲料诱导SD大鼠氧化应激及对其脂质代谢的影响

目的探讨高果糖饲料诱导SD大鼠氧化应激和对其脂质代谢的影响。方法实验大鼠分为2组熏分别用普通饲料和高果糖饲料喂养8周,检测大鼠空腹血糖(FBG)、血胰岛素(FSI)、血脂、总抗氧化力(T鄄AOC)、丙二醛(MDA)及超氧化物岐化酶(SOD)等。结果高果糖饲料组胰岛素敏感指数(ISI)低于普通饲料组(P<0.01),甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL鄄C)升高(分别为P<0.01,P<0.05和P<0.01),高密度脂蛋白胆固醇(HDL鄄C)降低(P<0.05),T鄄AOC、SOD活性降低(P<0.01),MDA水平升高(P<0.01)。结论高果糖饲料可诱导SD大鼠产生氧化应激,引起脂质代谢紊乱。

一叶萩碱对延髓迷走复合体神经元电活动及十二指肠运动的影响

目的:初步探讨左旋一叶萩碱是否对延髓迷走复合体神经元具有兴奋作用,以及对十二指肠运动是否有促进作用。方法:以SD大鼠为实验对象,采用下丘脑腹内侧区微量注射、微电极神经元放电记录及十二指肠运动记录等方法,观察下丘脑腹内侧区微量注入不同剂量的一叶萩碱对延髓迷走复合体神经元电活动与十二指肠运动的影响。实验中VMH微量注射L-Sec解除了GABA能紧张性抑制而引起MFR增加和十二指肠收缩幅度与频率均增强。随着剂量的加大,MRF增加值亦逐渐加大。呈剂量-效应正相关关系,相关系数γ=0.9975(P<0.001)。结果:一叶萩碱对延髓迷走复合体神经元具有兴奋效应,并能促进十二指肠运动。当注射剂量从4μg逐渐加大至54μg时,平均放电率的增加值从(0.61±0.38)脉冲/S增大到(12.24±1.62)脉冲/S1呈现剂量-效应正相关关系。结论:一叶萩碱通过解除γ-氨基丁酸能紧张性抑制机制而引起延髓迷走复合体神经元的平均放电率增加,并使十二指肠收缩幅度与频率均增大。

去甲肾上腺素调制大鼠体感皮层Ⅰ区神经元电活动的β肾上腺素能受体机制

目的：探讨β肾上腺素能受体在去甲肾上腺素调制大鼠大脑皮层躯体感觉I区神经元诱发电活动中的作用，方法：以SD大鼠为实验对象，采用多管玻璃微电极刺激和记录技术，微电泳注射方法，以及对大脑皮层躯体感觉I区隐神经诱发的单位放电过程作标准化互协方差函数处理，观察微电泳去甲肾上腺素，肾上腺素能β受体拮抗剂心得安和心得宁（又拮抗β1受体）前和微电泳过程中放电过程的变化。结果：（1）当大剂量（80nA)去甲肾上腺素使皮层感觉I区隐神经诱发的单位放电的积分值加大（P＜0．001），对其产生易化效应时，微电泳心得安和心得宁都能阻断这种易化作用，使皮层感觉I区隐神经诱发的单位放电积分值不发生变化（与对照比较，P＞0．05），两者的拮抗效应相同；（2）当小剂量（20nA)去甲肾上腺素使皮层感觉I区隐神经诱发的单位放电的积分值减小（P＜0．001），对其产生抑制效应时，微电泳心得安和心得宁都只能部分阻断这种效应，使积分值朝着恢复到微电泳前水平的方向变化，结论：去甲肾上腺素对鼠大脑皮层躯体感觉I区神经元诱发电活动的易化作用是通过β1肾上腺素能受体来介导的，而抑制诱恨放电的作用可能也与β1肾上腺素能受体有关。

家兔脑基底动脉离体制备动脉环与张力记录方法的改进及应用价值

为了更好地研究脑血管药物的作用机制 ,对家兔脑基底动脉离体制备动脉环和记录张力变化的方法进行了改进。主要有三个方面 :①急性放血 ,从颅顶开颅快速取出脑基底动脉 ;②在冷光源下 ,将已离体的脑基底动脉悬浮于预冷灌流液中 ,再行制备动脉环和进行记录前的各项操作 ;③利用BL - 310微机型生物机能实验系统记录脑基底动脉环在药物作用下的张力变化。结果发现 ,BL - 310微机型生物机能实验系统的精密度、准确度和精确度都比二道生理记录仪高 ;制备的家兔脑基底动脉环标本在KCl、苯福林和组胺等药物作用下张力变化明显 ,用BL- 310系统能真实地记录到这些张力变化。此结果说明 ,改进的家兔脑基底动脉离体制备动脉环灌流和记录张力的方法更适用于小动脉生理、病理生理和药理的实验研究。