生物化学CAI课件在教学中的应用

随着现代教育技术发展和教学改革的需要,CAI课件已经应用于生物化学教学中.文章结合生物化学教学特点及运用多媒体教学的实际情况,分析了CAI课件在应用过程中的优势和应注意的问题,指出CAI课件的应用只有与传统教学模式结合,才会发挥更大作用.

把握专业特色提高生物化学实验教学质量

本文根据生物化学学科发展特点,结合专业特色,对本科生物化学实验教学改革进行了探索与实践,取得初步成效,有效地激发了学生对生物化学的学习兴趣,为培养具有初步科研能力与创新精神的高素质人才打下坚实的基础。

泡沫细胞形成与胞浆Ca^(2+)水平变化

目的 :探讨巨噬细胞在泡沫化过程中 ,胞浆Ca2 +水平的变化规律及其病理机制。方法 :选择动脉粥样硬化易感性C5 7BL/ 6J小鼠 ,取其腹膜巨噬细胞 ,在 10mg·L-1氧化低密度脂蛋白中孵育 96h ,制备了富含脂质成分的泡沫样细胞。在此基础上 ,应用Ca2 +荧光指示剂技术和NADH氧化偶联差光谱变化的分析方法 ,检测了前述泡沫样细胞的胞浆Ca2 +水平及膜成分Ca2 +-ATP酶活性。结果 :泡沫样细胞的胞浆Ca2 +水平是对照巨噬细胞的 2 7倍 ,膜成分Ca2 +-ATP酶活性为后者的 2 4 %。结论 :在巨噬细胞源性泡沫细胞的形成过程中 ,伴随着缓慢的膜外Ca2 +内流或肌质网Ca2 +释放 ,这可能与初期膜上Ca2 +通道的持续性开放及后期膜上Ca2 +泵功能的不可逆性钝化有关。

L-精氨酸与N-硝基-L-精氨酸单甲酯对雄性大鼠促性腺激素分泌的影响

目的 :阐明NO前体左旋精氨酸 (L arginine ,L Arg)和NO合酶的竞争性抑制剂N 硝基 L 精氨酸单甲基酯(Nω nitrio L arginine methyl ester,L NAME)对雄性性腺轴中腺垂体内分泌功能具有调节作用。 方法 :雄性SD大鼠分为 4组 ,每组 10只 ,分别于腹腔内注射L Arg、L NAME、L Arg +L NAME和生理盐水 ,1次 /d ,注射 4 8d ,首次剂量加倍 ;分别于注射前及注射后 1、4、8、13、2 4、3 6、4 8d在大鼠尾部采血 ,用放射免疫测定法测定血清中黄体生成素(LH)和卵泡刺激素 (FSH)的含量 ,对所得数据进行统计学处理。 结果 :L Arg对FSH和LH的分泌具有促进作用(P <0 0 1) ,而L NAME则抑制FSH和LH的分泌 (P <0 0 1) ,两者都具有时间依赖性。L Arg和L NAME混合注射时 ,其FSH和LH的含量与生理盐水注射组无区别 (P >0 0 5 )。 结论 :NO对雄性大鼠垂体促性腺激素的分泌具有促进作用。

甲壳低聚糖对抗生素脱污染小鼠肠道菌群的影响

目的 观察甲壳低聚糖对抗生素脱污染小鼠肠道菌群的影响 ,为进一步开发壳聚糖提供理论依据。 方法 用盐酸林可霉素复制肠道脱污染小鼠动物模型 ,将模型小鼠随机分为治疗组和对照组 ,治疗组灌服甲壳低聚糖 6 0 0mg· kg- 1·d- 1 ,对照组灌服等体积蒸馏水。 7天后分析肠道菌群。 结果 模型小鼠治疗组肠道菌群基本恢复正常 ,与对照组相比差异具有显著性意义 (P<0 .0 5 )。 结论 甲壳低聚糖对小鼠肠道菌群失调具有一定的调整作用。

外源性Rb基因对U937细胞泡沫化过程中CD36表达的影响

为研究抑癌基因Rb基因在U937细胞泡沫化过程中的表达 ,应用重组腺病毒载体导入外源性Rb基因 ,采用逆转录聚合酶链反应和流式细胞术检测氧化型低密度脂蛋白致U937细胞泡沫化过程中清道夫受体CD36和Rb基因的表达和外源性Rb基因导入U937细胞后CD36和Rb基因的表达。结果发现 ,氧化型低密度脂蛋白致U937细胞泡沫化过程中 ,RbmRNA和蛋白的表达随作用时间延长呈下调趋势 ,CD36mRNA和蛋白的表达则呈上调趋势 ;随着外源性Rb导入U937细胞并表达 ,CD36表达呈下调趋势。结果提示 ,外源性Rb基因的导入可以下调清道夫受体CD36的表达。

利用hTM表达细胞株制备抗人血栓调节蛋白单克隆抗体

为了研制抗人血栓调节蛋白(hTM)的单克隆抗体(mAb),给经CHO细胞免疫的BALB/c小鼠腹腔注射环磷酰胺诱导其对CHO和CHO-TM5细胞的共同抗原表位产生免疫耐受,再用高效表达hTM的CHO-TM5常规免疫小鼠.细胞融合后,ELISA筛选分泌抗hTM的特异性mAb阳性克隆,并将其腹腔注射BALB/c小鼠诱生腹水.腹水中的mAb经亲和层析纯化后,采用ELISA、流式细胞术、免疫组织化学染色法及Westernblotting对其进行特异性鉴定.结果显示,共获得了5株阳性克隆,其中2F7可稳定分泌IgG1亚型的mAb,腹水抗体效价为1×10-6,含量为19.56g/L.2F7在体内与正常组织的交叉反应极少,对HUVEC、CHO-TM5有特异性结合,并可识别细胞裂解液还原条件下分子质量为105ku左右的蛋白质多肽.2F7的解离常数Kd约为1.22×10-9mol/L.实验结果表明,通过采用新的技术路线,直接应用hTM表达细胞株免疫小鼠,成功制备了具有高度特异性与高亲和力的抗hTMmAb,为其他来源困难的蛋白质mAb制备提供了可借鉴的技术方案,同时2F7的研究鉴定为进一步应用抗hTMmAb进行hTM生物学功能及临床意义研究提供了新的物质基础.

环磷酰胺免疫删减法制备细胞表面抗原单克隆抗体小鼠模型的建立

目的:观察不同剂量环磷酰胺(CP)诱导免疫耐受的作用,建立一个免疫删减法制备细胞表面抗原单克隆抗体(mAb)的动物免疫模型。方法:雌性BALB/c小鼠经CHO细胞免疫后分别给予不同剂量的CP诱导免疫耐受,选择血清抗体效价最低的一组小鼠按常规方式腹腔注射CHO-TM5细胞进行免疫。ELISA测定各小鼠血清中CHO抗体及CHO-TM5抗体效价,检测血清抗体对CHO细胞与CHO-TM5细胞结合反应的差异性。结果:BALB/c小鼠腹腔注射不同剂量的CP后,各剂量组均出现不同程度的免疫耐受作用。CP100mg/kg组与CP125mg/kg组小鼠血清抗体效价较低,接近阴性对照组。ELISA检测显示CP100mg/kg组血清抗体与CHO-TM5细胞呈阳性结合反应,不与CHO细胞结合;而CP0mg/kg组血清抗体与CHO细胞与CHO-TM5细胞的结合反应均呈阳性。结论:CP100mg/kg具有良好诱导小鼠对CHO和CHO-TM5细胞的共同抗原表位产生免疫耐受,相对增强对CHO-TM5细胞目的抗原hTM的免疫应答的作用,为免疫删减法制备细胞表面抗原mAb提供了一个理想的动物免疫模型。

薄膜分散-超声法工艺参数对烟酸姜黄素酯纳米粒粒径及包封率的影响

目的:探索薄膜分散-超声法制备烟酸姜黄素酯固体脂质纳米粒的工艺参数对其粒径及包封率的影响,以期获得制备粒径小、包封率高的工艺参数。方法:采用HPLC法测定烟酸姜黄素酯的含量,以烟酸姜黄素酯固体脂质纳米粒粒径及包封率为评价指标,通过正交设计试验法、95%可信区间重叠法统计分析,优选薄膜分散-超声法制备烟酸姜黄素酯固体脂质纳米粒粒径小、包封率高的工艺参数。结果:烟酸姜黄素酯固体脂质纳米粒的最佳工艺参数为:水浴温度40℃,茄型瓶旋转速度80 r·min-1。制得的固体脂质纳米粒平均粒径为107.8 nm,聚合物分散性指数(PDI)为0.583,包封率为68.91%。结论:茄型瓶旋转速度对薄膜分散-超声法制备烟酸姜黄素酯固体脂质纳米粒的粒径影响较大,而水浴温度对其包封率影响较大,两者兼顾考虑,在优选的工艺条件下,可获得平均粒径较小、包封率较高的烟酸姜黄素酯固体脂质纳米粒。

壳聚糖碘液的制备及抗真菌活性研究

目的制备壳聚糖碘溶液,并检测其体外抗真菌性能.方法以低分子壳聚糖为载体与碘络合,通过紫外、红外光谱测定其化学结构;采用RPMI 1640培养基稀释法测定壳聚糖碘液的最小杀菌与抑菌浓度.结果壳聚糖与碘形成了一种水溶性络合物--壳聚糖碘,且对几种常见真菌的最小杀菌与抑菌浓度达到1∶64以上.结论壳聚糖碘液具有良好的抗真菌作用,可开发成一种新型的抗真菌药物.

巨噬细胞源性与肌源性泡沫细胞的不同特性研究

目的：动脉粥样硬化损伤中的泡沫细胞来源于巨噬细胞和平滑肌细胞，本实验在离体细胞培养的基础上探讨了两种来源泡沫细胞的不同特性。方法与结果：选择Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠腹膜巨噬细胞与猪主动脉平滑肌细胞，在氧化低密度脂蛋白（Ｏｘｉｄｉｚｅｄ ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＯＬＤＬ）环境中孵育一定时间后，可形成特征性的泡沫样细胞。其中，巨噬细胞源性泡沫样细胞的形成环境为 １０ ｍｇ·Ｌ ＯＬＤＬ，作用时间为 ９６ ｈ，细胞内总胆固醇含量为 ７７．６±８．３ｍｇ·ｇ，胆固醇酯在总胆固醇中的构成比为５３.１％ ，胆固醇含量受消斑肽影响不大，第８ｄ开始大量死亡；而肌源性泡沫样细胞则不同，形成环境为 １５ ｍｇ·ＬＯＬＤＬ，作用时间为 ７２ ｈ，总胆固醇含量为 １８７．３±９．２ ｍｇ·ｇ，胆固醇酯构成比为 ６４．１％，胆回醇含量受消斑肽影响较大，第 ６ ｄ开始大量死亡。结论：两种来源的泡沫细胞在产生环境、形成速度、胆固醇含量、生存时间和逆转性等方面可能存在着一定的差异。

噬菌体随机肽库在确定单抗识别表位中的应用

以抗人感冒病毒凝血素蛋白单克隆抗体 12CA5为筛选配基 ,从丝状噬菌体 (M13)表面展示的随机 6肽库中筛选抗体特异性识别的多肽。噬菌体与单抗的结合可以用酶联免疫吸附法鉴定 ,而展示的氨基酸序列可以通过测定相应克隆的插入外源核苷酸来确定。筛选所得的多肽与单抗的表位 ,特别是C -端的四个氨基酸残基PDYA有高度的同源性 ,说明该四肽在单抗与抗原的结合中起到十分重要的作用。

稳定高效表达人血栓调节蛋白的CHO细胞株的建立

目的:构建稳定高效表达人血栓调节蛋白(human thrombomodulin,hTM)的CHO细胞株,以便于大量生产纯化hTM蛋白。方法:利用脂质体li-pofectamine 2000将包含hTM基因全长序列的重组表达质粒pThr402转染CHO细胞。转染后用G418的选择性培养液筛选、挑取抗性克隆。采用流式细胞术和Western blotting检测hTM在CHO细胞膜表面的表达情况,筛选建立稳定高效表达hTM的CHO细胞株并对其稳定性进行观察。结果:重组表达质粒pThr402转染CHO细胞后,流式细胞术证实hTM稳定高效表达于随机挑选的5个抗性克隆细胞株的细胞膜表面,但表达量有差异。Western blotting分析检测显示hTM表达量较高的CHO-TM1、CHO-TM4与CHO-TM5细胞株的细胞裂解液出现了与预期值相符的约105000的特异性条带。CHO-TM5已经经过冻存复苏前后各20次传代,且无论有无G418选择压力存在,hTM表达水平无明显差异。结论:成功构建了稳定高效表达hTM的CHO细胞株,可望获得大量蛋白,为进一步研究hTM的生物学功能以及制备和筛选抗hTM的单抗开辟新的途径。

硫酸软骨素生产工艺改进含量测定及其应用

硫酸软骨素(chondroitin sulfate，CS)系从猪、牛等动物喉、鼻软骨组织中提取纯化而得的酸性粘多糖。CS是一种聚阴离子化合物，分子量约为10000～35000，白色粉末，无臭无味，有引湿性，易溶于水而成粘稠液体，不溶于乙醇、丙酮和乙醚等有机溶剂，易与钠、钾、钙等阳离子结合，其盐类对热较稳定。

乙肝表面抗原弱反应性标本确认试验的初步应用

目的利用珠海丽珠试剂公司研发的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）确认试剂盒（中和试验法）对乙肝表面抗原弱反应性标本进行确认试验，以评价其应用价值。方法血清样本来源于本院门诊患者，经上海荣盛生物药业有限公司生产的HBsAg酶免试剂盒测定，取结果A值0．070～0．500的样本46份用于本试验。此46例样本确认试验参照丽珠试剂公司试制的HBsAg中和试剂盒说明书进行，并与用杭州艾康生物公司生产的金标试剂的检测结果比对。结果用荣盛生产的HBsAg ELISA检测，结果显示8例呈灰区阴性，26例呈灰区阳性，12例呈弱阳性。经艾康金标试剂比对检测，26例为阳性，20例为阴性。中和试验结果为阳性30例，阴性16例。在金标比对检测的20例阴性样本中，4例中和试验确认结果为阳性。结论丽珠试剂公司的HBsAg中和确认试剂盒具有良好的特异性和敏感性，能大大提高对国产HBsAg ELISA试剂测定结果为弱反应性样本或金标试剂测定阴性样本的检测结果的准确性，适用于临床推广使用，

芹菜素诱导人肝癌Hep G2细胞分化

目的:研究芹菜素诱导人肝癌Hep G2细胞分化作用。方法:体外培养人肝癌Hep G2细胞,瑞氏-姬姆萨和考马斯亮蓝染色观察Hep G2细胞形态和微管蛋白排列的变化。放射免疫法检测细胞液甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP);酶促反应试剂盒检测细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和γ-谷胺酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,γ-GT)的活性;Diamondstone分光光度法测定细胞酪氨酸α-酮戊二酸转氨酶(tyrosine-α-Ketoglutaric acid transaminase,TAT)的含量。结果:10μmol/L芹菜素和全反式维甲酸处理人肝癌Hep G2细胞48小时后,细胞的形态和微管微丝由肿瘤细胞向成熟细胞分化;细胞AFP的分泌和γ-GT的合成显著降低(P<0.01);ALP和TAT的合成则显著升高(P<0.01)。结论:全芹菜素具有诱导人肝癌Hep G2细胞分化作用。