梅毒分子生物学实验诊断方法的研究进展

梅毒的临床表现十分复杂,诊断主要依靠实验室检测方法。传统的梅毒实验室诊断方法暴露出诸多缺点,本文综述了国外一些分子生物学技术用于梅毒实验室诊断的方法(以基因工程重组抗原的血清学方法和聚合酶链反应)的研究进展。

副衣原体的生物学特征及分离培养的研究进展

副衣原体是1997年初从2例女性阿米巴感染者鼻黏膜中分离出来的细胞内共生微生物。现有的证据表明副衣原体是引起人类呼吸道感染的重要病原体。因此,其分离培养对研究其致病机制以及快速诊断具有重要的意义。本文就近年来有关副衣原体的生物学特征、分离培养方法以及快速诊断方面的研究进展作一综述。

衣原体包涵体膜蛋白的结构特征及生物学功能研究进展

包涵体膜蛋白是一类由衣原体分泌并被转运至包涵体膜的衣原体特异性蛋白。进入宿主细胞后,衣原体即可分泌大量蛋白对包涵体膜进行修饰,这类蛋白位于衣原体-宿主细胞界面处,因此可在维持包涵体稳定性、衣原体营养摄取及与宿主细胞发生相互作用的过程中发挥重要功能。本文就包涵体膜蛋白的结构特征及生物学功能研究进展进行了综述,以期更深入了解这种衣原体效应蛋白。

噬菌体展示技术及其在病原微生物研究中的应用进展

噬菌体是能特异性地感染细菌的一类病毒,其基因数目少,结构相对简单,容易在分子水平上操控其基因。噬菌体展示技术是将外源肽或蛋白以融合蛋白形式表达并呈现在噬菌体衣壳表面的分子生物学技术。与传统的研究方法相比,噬菌体展示技术具有通量高、成本低、操作简单、耗时短等优点。本综述主要聚焦噬菌体展示技术在病原微生物抗原筛选、抗体制备和疫苗研制等方面的应用进展。

大学生人群乙型肝炎病毒感染的实验流行病学研究

目的探讨健康教育预防乙型肝炎病毒感染的效果,为制定人群乙型肝炎病毒感染的预防策略提供科学的理论依据。方法以某高校2000级、2001级13015名大学生为研究对象,2001级为实验组,给予乙型肝炎病毒预防知识讲座的干预措施,2000级为对照组。用ELISA法检测新生和毕业生静脉血中的HBsAg,计算HBsAg阳性率,采用SPSS13.0进行统计学分析。结果2000级、2001级新生入学体检时HBsAg阳性率分别为5.7%和6.2%,不存在显著性差异(χ2=1.52,P>0.05)。毕业生体检时,实验组的HBsAg阳性率为3.7%,对照组的HBsAg阳性率为9.0%,两者具有显著性差异(χ2=145.08,P<0.05)。2001级新生HBsAg阴转率为12.3%。2000级新生HBsAg阴转率为7.3%,具有显著性差异(χ2=5.46,P<0.05)。结论乙型肝炎病毒的预防知识讲座可以有效降低大学生人群HBsAg阳性率,在HBsAg阳性人群中进行乙型肝炎病毒预防知识讲座可以提高HBsAg阴转率。

土壤微生物多样性及其作用研究进展

土壤微生物是土壤的重要组成部分,是土壤有机质和土壤养分(N、C、P等)转化和循环的主要动力,它参与土壤有机质的分解、腐殖质的形成等生化过程.另外,又是土壤养分的储备库和植物生长可利用养分的一个重要来源,是土壤肥力水平的活性指标,在土壤生态系统中起着非常重要的作用.本文从土壤微生物多样性的定义、研究方法、土壤微生物的作用来阐述目前国内外土壤微生物多样性及其作用研究进展,并探讨了分子生物学在土壤微生物研究中的应用前景.

衣原体科分类现状及其分子生物学特征分析

分子生物学理论与技术的迅速发展给衣原体的分类鉴定带来了巨大的革新。用遗传学原理和方法分析衣原体种、属间的亲缘关系是决定生物表型特征的遗传物质核酸作为比较的准绳,不仅仅可发现和认识新菌株,还可进行流行病学分型等研究,因此显示出了巨大的优势,所以它是一种客观和可信度较高的分类方法。

虚拟仿真实验教学在病原学实验教育中的应用研究

在病原生物学实验开展虚拟仿真实验，主要包含实验室设置的虚拟仿真和实验内容的虚拟仿真。实验室设置的虚拟仿真实验可拓展对病原生物学实验中生物安全教育方面的内容，病原生物学实验操作的虚拟仿真不仅可以作为传统实验教学的补充，还有利于对学生综合能力的测试。虚拟仿真实验效果的评价可从教学效果和实验效果方面进行。

P2X7受体在胞内病原体感染中的研究进展

P2X7受体属于ATP激活的非选择性阳离子通道型受体,其在人体分布广泛,参与调控机体的多种生理过程。当细菌、病毒或寄生虫攻击免疫系统时,ATP从宿主细胞释放,在细胞外作为危险信号,激活P2X7受体,参与免疫应答和炎症反应,如活性氧的产生、促进溶酶体吞噬作用、释放细胞因子和趋化因子,介导NLRP3炎性小体的形成,促进IL-1β成熟和释放等。近年来,基于P2X7受体基因靶向敲除动物模型的成功构建和特异性P2X7受体拮抗剂的研发,该受体有望成为治疗胞内病原体感染的新靶点。本文以P2X7受体特征、分布,在细菌、病毒、寄生虫感染中的研究进展作一综述,并探讨该受体作为感染性疾病治疗靶点的潜力。

性传播疾病病原菌耐药性的研究进展

性传播疾病(sexually transmitted diseases,STDs)是一组主要通过人类性行为传播、严重危害人类身心健康的传染病,并已成为全球普遍关注的公共卫生问题。近年全球年新增STDs病例居高不下,其重要原因之一是由于STDs病原菌耐药性增加使得治疗变得困难。了解STDs病原菌的耐药机制和抗生素作用机制对于修正现有的药物和开发新的治疗药物十分必要。简述了4种常见的STDs及其治疗药物,并对常见病原菌的耐药性进行了概述。

衣原体感染宿主细胞后对相关信号通路影响的研究进展

衣原体(Chlamydia)是一类专性细胞内寄生的革兰氏阴性细菌,可感染宿主细胞引起多种疾病。衣原体胞内感染可导致宿主细胞多条信号通路激活,以此调控宿主细胞的生物学行为,实现衣原体自身的生长发育周期和代谢,并引起相关疾病。本文主要综述衣原体感染过程中对PI3K/AKT、MAPKs和MDM2-p53信号通路的激活及作用,为衣原体致病机制及防治研究提供参考。

诺卡氏菌研究进展

目的诺卡氏菌是一种新发的人兽共患病病原,呈全球性分布,它能引起不同程度的人类疾病。近年来,病例报道明显增加,但大多数人对该菌不熟悉,本文就诺卡氏菌的分布、感染途径、致病性、分类及鉴定等做一综述。

突变敏感性分子开关检测肺炎支原体对大环内酯类抗生素的耐药性研究

目的应用突变敏感性分子开关检测肺炎支原体对大环内酯类抗生素的耐药性。方法采用微量稀释法检测5种常用大环内酯类抗生素对40株Mp临床分离株的药物敏感性;建立高保真聚合酶和3′硫化修饰引物的分子开关,用分子开关进行Mp临床分离株的PCR扩增,检测其是否存在Mp 23SrRNA 2063、2064和2617 3个热点突变,并通过基因测序进一步确定是否存在点突变,分析点突变与大环内酯类抗生素敏感性之间的关系。结果 5种大环内酯类抗生素中,Mp对14元环的红霉素和克拉霉素耐药程度最高,其MIC≥128mg/L;对15元环的大环内酯类抗生素阿奇霉素和交沙霉素相对敏感,其中交沙霉素抗Mp活性最高,其MIC≤4mg/L。用高保真聚合酶和3′硫化修饰引物的分子开关行PCR扩增,检测出35株发生了2063位点基因突变,3株发生2064位点基因突变,未检测出2617位点突变。用基因测序检测到35株Mp发生A2063G的突变,3株发生A2064G的突变,未检测到2617位点突变,与分子开关的检测结果一致,并且2063、2064位点突变Mp株均对大环内酯类药物高度耐药。结论分子开关可识别23SrRNA基因突变,可用于分析Mp对大环内酯类抗生素的敏感性。

微孔板Alamar Blue显色法检测结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼耐药性研究

目的评价微孔板Alamar Blue显色法检测结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼耐药性的可行性。方法用微孔板Alamar Blue显色法对41株和70株结核分枝杆菌临床分离株分别检测利福平和异烟肼的最小抑菌浓度,记录获得结果时间,利用ROC曲线确定利福平和异烟肼的最佳耐药阈值,并和传统的药物敏感性实验罗氏比例法进行比较。结果微孔板Alamar Blue显色法获得结果平均时间为8d,利福平和异烟肼的最佳耐药阈值均为0.5μg/mL,以罗氏比例法为金标准,利福平的灵敏度和特异度均为100.0%,异烟肼的灵敏度和特异度分别为96.6%和100.0%。结论微孔板Alamar Blue显色法是一种简便、敏感、快速的药物敏感性检测方法,可用于结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼耐药性的快速检测。

诺卡菌的培养和染色特征研究

目的了解诺卡菌的培养及染色特征。方法采用脑心浸液琼脂培养基、哥伦比亚血琼脂基础培养基和沙保弱琼脂培养基,分别在25℃和37℃条件下培养,观察不同种类诺卡菌的生长时间和菌落生长形态。应用革兰染色、抗酸染色及改良抗酸染色方法进行染色,观察诺卡菌的染色特征和形态特点。结果共对从德国的DSMZ菌种保藏中心购得的7个种23株诺卡菌标准参照菌株进行了培养观察。诺卡菌的菌落形态和颜色多样,菌落形态有针尖状、雪花状、菜花状、不规则状等,菌落颜色有白色、黄色、橙红色、灰色等。诺卡菌为革兰氏阳性菌,弱抗酸性菌,用不同浓度的脱色液进行抗酸染色,所用脱色液浓度越低,抗酸染色阳性率越高,硫酸脱色液浓度为0.125%时,诺卡菌抗酸染色阳性率最高。结论诺卡菌具有独特的培养和染色特征,菌落形态和镜下形态多样。诺卡菌为弱抗酸菌,0.125%硫酸脱色液的改良抗酸染色方法检测阳性率最高。

梅毒螺旋体外膜蛋白Gpd基因的克隆、表达及其免疫活性研究

利用PCR技术从Tp Nichols株基因组模板中扩增梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)外膜蛋白Gpd基因,定向克隆构建真核表达重组体pcDNA3.1(+)-Gpd,免疫印迹和免疫组化技术检测pcDNA3.1(+)-Gpd在HeLa细胞中的表达;同时将真核表达重组体pcDNA3.1(+)-Gpd免疫新西兰兔,检测其在兔体内的免疫应答效果。免疫印迹和免疫组化鉴定均显示重组体在HeLa细胞中能有效表达一个41kD的Gpd融合蛋白。新西兰兔接种核酸疫苗后,能产生特异性抗体,第3次免疫后2周抗体最高滴度可达1∶1024,免疫后兔脾细胞受Gpd蛋白刺激有明显增殖反应。所诱导的抗体水平和脾淋巴细胞增殖情况均显著高于空质粒对照组和空白对照组(p<0.05)。Tp真核表达重组体pcDNA3.1(+)-Gpd的成功构建及能刺激新西兰兔产生较强特异的免疫应答,为Gpd蛋白生物学功能及梅毒DNA疫苗的深入研究奠定了一定的实验基础。

2010年～2011年衡阳地区泌尿系感染病原菌调查和药敏谱分析

目的探讨衡阳地区泌尿系感染病原菌的分布及其对抗菌药物的耐药性,以指导临床合理用药。方法对2010年1月～2011年12月两年间泌尿系感染的中段尿进行细菌培养、分离鉴定,并进行药敏试验。结果共有尿培养5 013例,检出1 505株病原菌,检出率为30.0%。尿路感染中最常见的病原菌是大肠埃希氏菌,占52.1%,其次是肠球菌属,占11.5%,真菌占10.3%;泌尿系感染病原菌革兰阴性杆菌对亚胺培南、美罗培南较为敏感,葡萄球菌和肠球菌属对万古霉素、呋喃妥因较为敏感,其它菌株对常用抗菌药物均产生了一定的耐药性。结论泌尿系感染病原菌的耐药严重,临床应尽早进行细菌培养和药敏试验,合理选择抗菌药物。

泌尿生殖道沙眼衣原体omp1基因多态性研究

从中国不同城市收集疑为沙眼衣原体(Ct)感染的泌尿生殖道标本323份,巢式PCR扩增Ctomp1基因片段(包括4个变异区),测定其中96份阳性标本omp1基因序列,根据同源性分型并分析其多态位点;根据氨基酸序列,用Mega 3软件构建进化树,分析临床株与相应参考株之间的亲缘关系。从96份沙眼衣原体阳性标本中,检出28种基因变体,其中E型最常见;同时发现Ct E、F型omp1基因高度保守,而其它基因型都显示一定的变异性。进化树分析发现,各临床株与相应参考株之间遗传距离较近。实验结果表明沙眼衣原体omp1基因呈现较大的多态性,可为其疫苗的研制及感染的防治提供重要的实验依据。

结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的耐药水平与其耐药基因突变的相关性研究

目的探讨Mtb耐药相关基因katG、inhA、oxyR-ahpC突变与对INH的耐药水平及rpoB突变与对RFP的耐药水平的关系。方法采用微孔板Alamar blue显色法分别检测59株耐INH的Mtb临床分离株对INH和30株耐RFP菌株对RFP的最低抑菌浓度(the minimum inhibitory concentration,MIC),同时用直接测序法检测对INH耐药菌株katG、inhA、oxyR-ahpC和对RFP耐药菌株rpoB的突变情况。结果 INH MIC为0.2500～1.0000μg/ml(低水平耐药菌株)和MIC≥2.0000μg/ml(高水平耐药菌株)的INH耐药株,inhA启动子突变率前者高于后者[53.8%(7/13),4.3%(2/46)],katG315突变率前者低于后者[15.4%(2/13),76.1%(35/46)],χ2值分别为15.57和13.48,P值均为0.000。RFP MIC为0.5000～16.0000μg/ml和MIC≥32.0000μg/ml的RFP耐药株,rpoB531和526位总突变率前者低于后者[62.5%(5/8),95.5%(21/22)],P确切概率=0.048。结论 INH耐药菌株inhA启动子突变与INH低水平耐药有关,katG315突变与INH高水平耐药有关;rpoB531和526位突变与RFP高水平耐药有关。