病理学考试试卷分析与评价

目的通过分析南华大学2004级临床医学专业专升本学生病理学期末考试试卷，对教学质量进行评估。方法随机抽查2004级临床医学专升本学生的200份考试试卷进行统计分析。结朵考试成绩呈负偏态分布，平均成绩为（78．88±8．02）分。难度为0．79，区分度为0．19。结论这份试卷能较全面地评价学生对课程的掌握程度，试题难度适中，区分度尚可，为今后提高试卷的命题水平及调整教学安排提供了经验。

活性氧改变在PIG11高表达诱导人肝癌HepG_2细胞凋亡中的作用

目的:探讨活性氧(reactive oxygen species,ROS)改变在PIG11蛋白高表达诱导人肝癌HepG2细胞凋亡中的作用。方法:本研究采用2’,7’-二氯氢化荧光素二脂(2’,7’-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)荧光探针标记PIG11蛋白高表达肝癌细胞株pLXSN-PIG11-HepG2细胞内ROS,用N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcystine,NAC)清除细胞内ROS后,FCM检测细胞内ROS水平的变化以及细胞凋亡率。结果:FCM测定结果显示,pLXSN-PIG11-HepG2细胞内ROS水平(15.60±0.92)明显高于pLXSN-HepG2细胞(4.90±0.70)和HepG2细胞(5.37±1.17),差异有统计学意义(P<0.01)。NAC(10 mmol/L)清除细胞内ROS后,FCM检测显示pLXSN-PIG11-HepG2细胞凋亡率较未清除前明显降低(P<0.01)。结论:PIG11高表达诱导细胞凋亡的机制可能与细胞内ROS水平升高有关。

核糖体蛋白L6对K562/A02细胞耐药性及凋亡的影响

本研究观察核糖体蛋白L6(RPL6)基因表达的改变对白血病细胞耐药性的作用及其可能的机制。通过RT-PCR方法获得RPL6 cDNA序列,用真核表达载体pcDNA3.1(+)分别构建正向插入和反向插入的RPL6 cDNA重组质粒。以脂质体将正义RPL6 cDNA真核表达质粒转染K562细胞,将反义RPL6 cDNA真核表达质粒转染K562/AO2细胞。以MTT、流式细胞术和荧光分光光度计观察RPL6对化疗药物耐药性、凋亡和caspase-3的作用。结果表明:转染正义RPL6 cDNA真核表达质粒后,K562细胞对阿霉素的耐药性增强到原来的325%,凋亡和caspase-3活性明显降低(P<0.005);转染反义RPL6 cDNA真核表达质粒后,K562/A02细胞对阿霉素的耐药性降低原来的38%;凋亡和caspase-3活性明显增加(P<0.005)。结论:RPL6基因过表达通过改变药物诱导的凋亡在K562/A02细胞耐药性的形成中起重要作用。

过表达CREB减轻内皮细胞氧化应激损伤

目的探讨过表达CAMP反应元件结合蛋白(CREB)在内皮细胞氧化损伤中的作用。方法建立H2O2诱导的血管内皮细胞损伤模型,将内皮细胞ECV304分为对照组、H2O2组、转染PCI空载体组、转染PCI空载体+H2O2组、转染PCI-CRESAP组和转染PCI-CREB+H2O2组,采用MTT法检测细胞存活率,硫代巴比妥酸检测丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果转染CREB+H2O2组的细胞存活率和SOD活性明显高于H2O2组(P<0.05),而转染CREB+H2O2组的MDA含量明显低于H2O2组(P<0.05)。结论过表达CREB对H2O2诱导的内皮细胞氧化损伤具有保护作用。

金樱子对大鼠糖尿病肾脏的实验研究

目的研究中药金樱子对糖尿病大鼠肾脏的保护作用并探讨其保护机制。方法用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射诱导法建立SD大鼠糖尿病模型,随机分为糖尿病模型组和金樱子干预组,同时另设正常对照组和金樱子对照组。观察大鼠一般状态,测定血糖、体重(BW)及肾重(KW)、肾脏指数(KW/BW),肾组织光镜检查了解组织形态,肾组织免疫组化检查观察金樱子对糖尿病大鼠肾脏组织转化生长因子1β(TGF-1β),Ⅳ型胶原表达影响。结果糖尿病模型组血糖及肾脏指数明显升高,肾脏病理改变明显,TGF-β1、Ⅳ型胶原表达明显增加。治疗24周后,金樱子干预组血糖降低,肾脏肥大明显改善,TGF-1β,Ⅳ型胶原表达明显下降(P<0.05),肾脏病理改变较糖尿病模型组有较大改善,但金樱子对照组肾组织无明显病理改变。结论金樱子对糖尿病大鼠肾脏有保护作用,其机制与抑制糖尿病大鼠肾脏TGF-β1,Ⅳ型胶原蛋白过度表达有关。

人核糖体蛋白L6编码基因的克隆及正反义真核表达载体的构建

目的:通过克隆人核糖体蛋白L6(RPL6)cDNA序列,构建其正反义真核表达载体,以探讨RPL6与白血病多药耐药的关系。方法:用RT-PCR技术扩增RPL6 cDNA序列,DNA重组技术构建其正反义真核表达载体。结果:成功扩增RPL6 cDNA序列,经DNA测序,证实与GenBank中的人RPL6编码区序列一致,酶切证实目的基因分别按正反两个方向亚克隆至真核表达载体。结论:成功克隆人RPL6 cDNA序列,并构建了正反义真核表达载体。

三氧化二砷对人肝癌细胞凋亡及Bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响

目的研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导HepG2细胞凋亡及其机制。方法采用MTT法、形态学观察及流式细胞术方法检测As2O3对HepG2细胞的生长抑制、凋亡作用的影响,用Western blot检测As2O3处理后HepG2细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3的表达。结果As2O3对HepG2细胞有明显的抑制增殖作用,且呈浓度和时间依赖性,细胞呈典型的凋亡形态学改变,As2O3呈时间依赖性诱导HepG2细胞凋亡。As2O3处理不同时间后,Bcl-2蛋白表达水平下调,caspase-3蛋白表达水平升高。结论As2O3具有诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的作用,其机制可能与其下调Bcl-2蛋白的表达,促进caspase-3活化有关。

人核糖体蛋白L6对白血病K562/A02细胞耐药性的影响

目的观察核糖体蛋白L6(RPL6)表达的改变对白血病耐药性的作用。方法通过RT-PCR方法获得RPL6cDNA序列,用真核表达载体pcDNA3.1(+)分别构建正向插入和反向插入的RPL6cDNA重组质粒。以脂质体将正义RPL6cDNA真核表达质粒转染K562细胞,将反义RPL6cDNA真核表达质粒转染K562/A02细胞,以MTT观察其对化疗药物耐药性的作用。结果转染正义RPL6cDNA真核表达质粒后,K562细胞对阿霉素的耐药性比未转染的K562细胞增强3.25倍,转染反义RPL6cDNA真核表达质粒后,K562/A02细胞对阿霉素的耐药性比未转染的K562/A02细胞降低62%。结论RPL6基因过表达在K562/A02细胞耐药性的形成中起重要作用。

5-Fu抗结肠癌作用与细胞凋亡及P-gp蛋白表达的关系

目的探讨5-氟尿嘧啶(5-Fu)抗结肠癌作用中,细胞凋亡与P-gp(P-glycoprotein)蛋白表达的关系。方法应用琼脂培养MTT法,测定人结肠癌对抗代谢药的药物敏感性,同时观察5-Fu对结肠癌病人手术前化疗疗效;用S-P免疫组化和图像定量分析技术,测定34例人结肠癌组织中P-gp蛋白表达量;采用末端标记法(TUNEL),检测结肠癌细胞的凋亡指数。结果(1)P-gp蛋白表达量与5-Fu抗药指数呈正相关(r=0.675,P<0.05)。(2)凋亡率与5-Fu抗药指数呈负相关(r=-0.53,P<0.05)。(3)以5-Fu抗药指数1.0为界,>1为耐药组,<1为敏感组,两组间P-gp蛋白表达量、凋亡指数差异均有显著性(P<0.05)。结论5-Fu通过诱导细胞凋亡产生抗结肠癌作用,而P-gp蛋白高表达阻碍5-Fu诱导的凋亡。

阿奇霉素治疗对儿童哮喘Eotaxin水平的影响

目的:观察阿奇霉素治疗儿童哮喘患儿嗜酸粒细胞趋化因子(Eotaxin)在治疗前后血清和痰液中水平的变化并探讨可能机制。方法:选取哮喘儿童60例,随机分成常规治疗组(A组)和阿奇霉素治疗组(B组),每组各30例,两组患儿均采用GINA方案中布地奈德吸入疗法,B组另加阿奇霉素口服6周,另选择同期健康儿童20名作为正常对照组(C组)。运用ELASA法检测受试者血清和痰液中Eotaxin水平,并比较各组疗效及指标。结果:①治疗前A、B组血清中Eotaxin水平分别明显高于C组(P均<0.01),痰液中Eotaxin水平亦高于C组(P均<0.01);②治疗后B组血清中Eotaxin水平明显低于A组(P<0.05),痰液中Eotaxin水平明显低于A组(P<0.01);③A、B组治疗后血清和痰液中Eotaxin水平均明显低于治疗前(P均<0.01);④B组哮喘控制疗效显著。结论:阿奇霉素治疗儿童哮喘效果显著,可能通过减少哮喘患儿Eotaxin水平发挥其作用。

骨髓间充质干细胞修复兔皮肤缺损创面的实验研究

目的研究骨髓间充质干细胞(MSCs)参与皮肤缺损创面修复重建表皮的可能性,为组织工程化皮肤提供新的种子细胞来源。方法自体来源的骨髓MSCs应用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记后,以Ⅰ型胶原为载体植入兔背部左侧全层皮肤缺损创面(治疗组),右侧全层皮肤缺损创面仅植以Ⅰ型胶原作为对照组。于术后6、12天观察创面收缩率,记录愈合时间;术后4、5周切取创面中央再生皮肤组织,行常规病理和BrdU免疫组织化学染色检测,进行对比研究。结果创面收缩率,治疗组>对照组(P<0.05);愈合时间,治疗组<对照组(P<0.05)。常规病理检测治疗组再生皮肤表皮层明显增厚,细胞数目显著增多;免疫组化检测,在治疗组再生皮肤附件毛囊内层以及表皮基底层、棘层可见BrdU阳性标记细胞。结论骨髓间充质干细胞在全层皮肤缺损创面可能分化为表皮细胞参与表皮重建并具有促进创面愈合的作用。

NO-1886抑制糖尿病兔肝糖原分解和肝脏脂肪病变的实验研究

目的 探讨合成化合物NO-1886是否降低高糖高脂饲料诱发的糖尿病新西兰兔的血清葡萄糖浓度和肝脏病变。方法 体重2kg左右的雄性新西兰兔60只,随机选取20只饲以基础饲料为A组(正常对照组);20只饲以高糖高脂饲料为B组(糖尿病对照组);20只饲以高糖高脂饲料加1.0%NO-1886为C组(糖尿病治疗组)。分别在0,4,8,12,16,20,24,28周时从禁食过夜的兔耳静脉抽取血样测定葡萄糖、甘油三酯水平。第32周末,处死动物,取肝脏一小块,10％福尔马林液固定,常规石蜡包埋切片,分别作H.E和肝糖原染色,光学显微镜下观察。结果糖尿病对照组1个月后即出现高血糖、高甘油三酯,并随着喂养时间延长而逐渐升高。正常对照组血糖、甘油三酯未见明显升高,两组对比差异具有显著性意义(P<0.05),与糖尿病对照组比较,糖尿病治疗组血糖、甘油三酯有所降低。从肝脏病理切片观察所见,糖尿病对照组肝脏脂肪变性明显,具大量脂肪空泡,并有局灶溶解性坏死,肝糖原极少或消失。而糖尿病治疗组肝脏未见明显脂肪空泡变性,组织结构基本正常,肝糖原丰富。结论NO-1886不仅可改善脂质代谢紊乱,而且可降低血清葡萄糖,减少肝糖原分解和减轻肝脏脂肪病变。可开发为治疗糖尿病糖代谢紊乱和脂质紊乱的药物。

低温下大鼠死后骨骼肌及肝组织平均ATP含量变化与PMI关系的研究

目的通过研究大鼠大腿骨骼肌及肝组织平均ATP含量的降解情况来寻求一种新的推断死后间隔时间(PMI)的方法。方法利用生物发光法检测低温下(5～10℃)大鼠死后0～24h内不同时间点大腿骨骼肌及肝组织中平均ATP含量。结果两种组织内平均ATP含量在死后均迅速下降，而肝组织比大腿骨骼肌组织内平均ATP含量下降更快，其下降速度分别于死后5、7h以后趋于平缓并逐步接近于零。两组织平均ATP含量变化与PMI之间有显著相关性(P<0．01)。结论根据以上两组织ATP含量的降解对于死后一定时间内PMI推断有一定的应用价值。

MNNG诱发大鼠腺胃粘膜不典型增生与高分化腺癌形态定量分析

目的探寻大鼠腺胃粘膜不典型增生与高分化腺癌的形态定量参数指标，探讨大鼠实验性胃癌与人类胃癌形态定量指标的异同性。方法利用HPIAS-1000型图象分析系统对以 MNNG诱发的大鼠腺胃粘膜不典型增生及高分化腺癌进行形态定量研究。结果大鼠腺胃粘膜不典型增生与高分化腺癌8项形态定量参数指标经统计学处理比较，其中核面积、核周长、核等效直径、核体积、核长径，核形状因子8项形态定量指标（P<0.01）有高度显著性差异，而核短径和核长短径比值（P>0.05）无显著性差异。结论这些形态定量参数指标对区别大鼠腺胃粘膜不典型增生与高分化腺癌有一定价值，形态定量参数指标也是随着癌前病变、癌的顺序逐渐递增；大鼠腺胃粘膜上皮癌变与人类胃粘膜上皮癌变有着相似的形态学变化过程。

甲状腺滤泡性腺瘤与滤泡性腺癌形态定量分析

利用 PIPS-2 0 2 0型超清晰图象分析系统对 2 7例甲状腺滤泡性腺瘤和 2 4例甲状腺滤泡性腺癌进行胞核形态定量研究。结果显示 ,甲状腺滤泡性腺瘤与甲状腺滤泡性腺癌 8项胞核形态定量参数经统计学处理比较 ,核面积、核周长、核等效直径、核面积体积、核长径、核短径、核长短比、核形状因子等 8项指标均有高度显著性差异 ( P<0 .0 1) ,提示上述形态定量参数可作为鉴别甲状腺滤泡性良恶性肿瘤的参考指标。

苏木水提物对大鼠溃疡性结肠炎细胞因子影响的实验研究

目的观察苏木水提物对溃疡性结肠炎(UC)大鼠TNF-α、IL-6的影响,探讨苏木对溃疡性结肠炎的治疗机理。方法将Wistar大鼠随机分成正常对照组、模型对照组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组、苏木水提物高、中、低组六组,除正常对照组外,其余各组大鼠用家兔结肠匀浆和福氏佐剂混合成乳化剂注射,免疫学方法制作实验UC模型。正常对照组和模型对照组每天灌服0.9%NaCl溶液2次,每次2 mL,药物组每天灌服苏木水提物药品液2次,每次2 mL,3周后处死,用ELASA方法测定巨噬细胞中TNF-α、IL-6的含量。结果SASP组和苏木水提物组TNF-α、IL-6明显低于模型组,差异有显著性,与正常对照组比较差异无显著性。结论苏木可显著降低UC大鼠TNF-α、IL-6的含量,有治疗UC的前景。

MNNG诱发大鼠腺胃不典型增生与高分化腺癌形态定量研究

为探寻大鼠腺胃正常粘膜与异型增生和腺癌的形态定量参数指标 ,探讨大鼠实验性胃癌与人类胃癌形态变化的异同性 ,利用 HPIAS-10 0 0型图象分析系统对大鼠腺胃正常粘膜与由 MNNG诱发粘膜异型增生及腺癌进行形态定量研究。结果显示 。

MNNG诱发大鼠腺胃粘膜癌变过程形态定量研究

目的 探寻大鼠腺胃正常粘膜与异型增生和腺癌的形态定量参数指标 ,探讨大鼠实验性胃癌与人类胃癌形态变化的异同性。方法 利用HPIAS - 10 0 0型图象分析系统对大鼠腺胃正常粘膜与由MNNG诱发粘膜异型增生及腺癌进行形态定量研究。结果 大鼠腺胃粘膜与不典型增生细胞核八项形态定量指标经统计学处理比较 :其中核面积 ,核周长 ,核等效直径 ,核体积 ,核长径 ,核形状因子六项指标 (P <0 .0 1) ;核短径、核长短径比 (P >0 .0 5 )差异无显著性。大鼠腺胃异型增生与腺癌细胞核八项形态定量指标比较 ,核面积 ,核周长 ,核等效直径 ,核体积 ,核长径 ,核形状因子六项形态定量参数指标差异有高度显著性。结论 大鼠腺胃粘膜癌变与人类胃粘膜癌变有同样的形态学改变过程。

PIG11与热休克蛋白60的相互作用介导肝癌HepG2细胞凋亡

为了探讨候选肝癌抑癌蛋白PIG11(p53-induced gene11,PIG11)诱导细胞凋亡的机制,首次在HepG2细胞株中鉴定了11个PIG11结合蛋白,热休克蛋白60(heat shock protein60,Hsp60)为其中之一.采用免疫共沉淀联合Western blot技术对Hsp60进行了验证.用Western blot检测其蛋白质表达,结果显示:pLXSN-PIG11-HepG2细胞中Hsp60蛋白表达较pLXSN-HepG2、HepG2细胞组下调(n=3,P<0.01).选取与Hsp60关系密切的Bax蛋白进行研究,Western blot结果显示PIG11高表达可引起胞浆Bax向线粒体转位.以上结果表明,PIG11蛋白能与HepG2细胞中的Hsp60结合,促进Hsp60-Bax的分离,引起Bax从胞液到线粒体转位,激活线粒体凋亡途径,这可能是其诱导HepG2细胞凋亡的主要机制之一.

家兔死后玻璃体液HBDH、CHE、LDH活性与PMI关系的研究

目的研究死后家兔玻璃体液多种酶的活性降解规律，寻找一种新的推断死亡时间的方法。方法应用全自动生化检测仪(用比色法)检测在高、低两组温度(25～30℃；10～15℃)下家兔死后0～54h玻璃体液中羟丁酸脱氢酶(HBDH)、胆碱脂酶(CHE)、乳酸脱氢酶(LDH)三种酶活性降解情况。结果三种酶的活性降解在死后一定时间内均出现一个平台期，平台期后酶活性迅速下降，高温组在死后48h酶活性接近为零，低温组在死后54h酶活性接近为零。三种酶活性与PMI之间有显著的负相关性，P<0．01。结论在一定时间内三种酶的活性降解可作为推断PMI的参考指标。