脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白的研究进展

脂肪酸结合蛋白(fatty acid binding protein,FABP)是低分子质量胞浆蛋白超家族,脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(adipocyte fatty-acid binding protein,A-FABP/aP2)为该家族成员之一。A-FABP可逆性地结合饱和及不饱和长链脂肪酸,促进脂肪酸的代谢和转运,调控脂类生成及降解。近年来研究表明,A-FABP生物反应在脂类代谢和各种疾病中显示出重要作用,尤其与代谢综合征、动脉粥样硬化关系密切。

金雀异黄素防治绝经后骨质疏松症机制的研究进展

大豆制品中所含的植物雌激素金雀异黄素,作为一种天然的选择性雌激素受体调节剂,具有雌激素样作用而无雌激素样副作用,已成为取代传统激素替代疗法的热门研发对象。金雀异黄素防治绝经后骨质疏松的机制可能涉及到多种途径,包括ER受体途径,局部细胞因子途径,旁分泌激素途径,OPG/RANK/RANKL途径等。

微小RNA与肿瘤发生和多药耐药的关系研究进展

非编码小RNA是非编码小分子单链RNA分子,与靶mRNA的3′非翻译区结合,抑制mRNA的翻译,促进其降解。而这种调控机制与很多肿瘤的发生有着密切的联系。肿瘤的多药耐药是临床化疗失败的主要原因。近年来研究表明,非编码小RNA的表达与肿瘤的多药耐药有着紧密的关系。现介绍非编码小RNA的生物学特性,并重点对其与肿瘤的发生和多药耐药的关系予以综述。

2型糖尿病与结直肠癌关系的研究进展

2型糖尿病患者易罹患结直肠癌,若接受胰岛素治疗,则不仅结直肠癌发病率更高,且肿瘤进展更加迅速。高胰岛素血症假说认为,异常增高的胰岛素及游离胰岛素样生长因子-1水平可促进结肠细胞增殖,最终导致结直肠癌的发生。由于结直肠癌可通过筛选试验得以早期发现,故建议2型糖尿病患者均应选择合适的筛选形式,特别是接受胰岛素治疗的患者应建议进行结肠镜检查,并且筛选间隔时间不得超过5年。

OSTP-DDP靶向抑制卵巢癌A2780细胞生长作用的研究

目的研究卵巢癌特异性结合肽(ovarian cancer specific targeting peptide,OSTP)与顺铂(cis-dichlorodiamineplatinum,DDP)偶联物(OSTP-DDP)对卵巢癌A2780细胞的靶向抑制作用。方法化学合成OSTP-DDP,体外培养卵巢癌A2780细胞,采用CCK-8法分别检测OSTP-DDP和DDP对卵巢癌A2780细胞的生长抑制作用;通过Annexin V-FITC凋亡试剂盒分别检测OSTP-DDP和DDP对卵巢癌A2780细胞的周期和凋亡作用。结果通过质谱分析和高效液相色谱(HPLC)分析,提示成功合成OSTP-DDP。CCK-8法检测显示,OSTP-DDP与DDP分别以不同浓度(10、20、40、80、160、320μmol·L^(-1))处理卵巢癌A2780细胞24、48、72 h后,均可对该细胞的生长起到抑制作用,且呈时间、浓度依赖性。且OSTP-DDP的作用强于DDP(P<0.05),提示OSTP-DDP具有靶向抑制细胞生长作用。流式细胞术检测结果显示,经OSTP-DDP和DDP处理后,细胞周期均被阻滞于G_1期,作用72 h后,OSTP-DDP对卵巢癌A2780细胞的周期抑制作用强于DDP,差异具有统计学意义(P<0.05)。作用24、48、72 h后,OSTP-DDP对卵巢癌A2780细胞凋亡的作用强于DDP(P<0.01)差异具有统计学意义,提示OSTP-DDP具有较强的靶向诱导细胞凋亡作用。结论 OSTP-DDP对卵巢癌A2780细胞的生长具有靶向抑制作用,OSTP作为化疗药物靶向载体治疗卵巢癌有良好的应用前景。

胃癌相关抑癌基因甲基化研究进展

DNA甲基化是一种表观遗传修饰,它与肿瘤的发生关系密切。DNA甲基化是基因表达调控的一种方式。抑癌基因启动子高甲基化可以使其表达失活,导致肿瘤发生。胃癌的发生与多基因异常表达密切相关,其中抑癌基因甲基化是胃癌发生发展的重要机制之一。

趋化因子CXCL16研究新进展

新发现的跨膜趋化因子SR-PSOX/CXCL16在动脉粥样硬化早期可以介导活性T淋巴细胞向内皮细胞黏附,促进平滑肌细胞增殖,介导单核巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取,促进泡沫细胞形成。在肿瘤方面,CXCL16及其受体对不同类型肿瘤的增殖与浸润起着关键性作用。在免疫应答方面,CXCL16通过自身作用及与表达其受体的免疫细胞结合,对机体的防御功能及其免疫损伤起着潜在作用。

E-cadherin在黏附连接的调控机制及肿瘤EMT中的作用研究进展

上皮组织中细胞间连接主要由3种基本结构构成并维持稳定：（1）紧密连接;（2）黏附连接;（3）桥粒体。黏附连接的形成主要包括以下几个步骤：（1）钙离子介导的上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）胞外段发生同嗜性结合;（2）连环蛋白（catenin,主要包括β-catenin和p120-catenin）被招募至E-cadherin的细胞质段;（3）借助catenin．E—cadherin最终连接到肌动蛋白细胞骨架形成结构和功能完整的黏附连接。

差异表达基因分析法在肿瘤学研究中的运用

肿瘤发生与多种基因的表达及相互作用有关。自上世纪80年代以来，多项技术已应用于肿瘤的分子遗传学研究。本文就差异表达基因分析法(从cDNA或mRNA水平入手)包括差异显示PCR、cDNA代表性差异分析、抑制消减杂交、cDNA微阵列等概述其原理、技术路线、各自优缺点及在肿瘤学中的应用。

SIRT1的生理功能及其与肿瘤相关性的研究进展

沉默信息调节因子1(sileniinformationregulatorl,SIRT1)是一个具有NAD+依赖性的III类组蛋白去乙酞化酶,属于SirtuinS家族成员之一。人类SIRT1在细胞存活与代谢等过程中有着重要的生理功能。从而涉及了多种人类重大疾病如肿瘤、神经退行性疾病、心血管疾病等的发生、发展。随着对其研究的深入,SIRT1将有望在新药作用靶点及疾病治疗方面发挥作用。

高糖作用下脐静脉内皮细胞中血管内皮生长因子基因表达与蛋白激酶C通路的关系

目的观察高糖作用人脐静脉内皮细胞时血管内皮生长因子mRNA和蛋白的表达与蛋白激酶C通路被激活和抑制的关系。方法提取并体外培养人脐静脉内皮细胞,分别加入不同浓度葡萄糖(5.5、11、22及44mmol/L)、蛋白激酶C激活剂和阻断剂并分别作用不同时间,应用逆转录聚合酶链反应检测血管内皮生长因子mR-NA水平,免疫细胞化学检测血管内皮生长因子及蛋白激酶C蛋白表达。结果经高糖处理的人脐静脉内皮细胞中血管内皮生长因子mRNA的转录水平明显高于对照组(P<0.05或P<0.01),但脐静脉内皮细胞经22 mmol/L葡萄糖作用72 h或佛波酯作用6 h,血管内皮生长因子mRNA水平不再升高,而呈下降趋势(P<0.05)。经22 mmol/L葡萄糖作用72 h后,血管内皮生长因子蛋白表达也逐渐下降。蛋白激酶C在22 mmol/L葡萄糖处理2 h后出现膜转位。而蛋白激酶C抑制剂GF109203X可阻断上述现象。结论高糖能引起脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子mR-NA和蛋白表达增高。高糖引起脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子基因表达增高,其机制与高糖激活蛋白激酶C通路有关。

p38丝裂素活化蛋白激酶在高糖损伤人脐静脉内皮细胞中的作用

目的探讨p38丝裂素活化蛋白激酶在高糖导致人脐静脉内皮细胞损伤过程中的作用及p38丝裂素活化蛋白激酶激活是否为蛋白激酶C依赖途径。方法体外分离培养人脐静脉内皮细胞,加入22 mmol/L葡萄糖及PMA、GF109203X(蛋白激酶C特异抑制剂)、SB203580(p38丝裂素活化蛋白激酶特异抑制剂)培养72 h。采用Western-blot检测磷酸化p38丝裂素活化蛋白激酶蛋白的表达,用逆转录聚合酶链反应检测p38丝裂素活化蛋白激酶mRNA的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果高糖及PMA使磷酸化p38丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达量与mRNA水平明显升高,人脐静脉内皮细胞凋亡率明显升高。高糖培养人脐静脉内皮细胞72 h后磷酸化p38丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达量、mRNA水平、人脐静脉内皮细胞凋亡率分别由0.189±0.0103、0.313±0.0153和5.15%上升至0.605±0.0407、0.447±0.0252和16.8%(P<0.05)。SB203580和GF109203X预处理后使p38丝裂素活化蛋白激酶蛋白磷酸化的表达量与mRNA水平明显下降,人脐静脉内皮细胞凋亡率下降(P<0.05)。结论p38丝裂素活化蛋白激酶激活在高糖导致人脐静脉内皮细胞损伤过程中起促进作用,p38丝裂素活化蛋白激酶激活可能为蛋白激酶C依赖途径。p38丝裂素活化蛋白激酶特异阻断剂对高糖损伤内皮细胞有保护作用。

氨基胍和维生素C对糖尿病肾病模型大鼠血清层粘连蛋白的影响

目的:研究氨基胍、维生素C对糖尿病肾病模型大鼠血清层粘连蛋白的影响。方法:将大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组和维生素C、氨基胍、维生素C+氨基胍治疗组;除正常对照组外,其余4组经腹腔注射链脲佐菌素建立1型糖尿病模型,造模成功后各组给予相应药物治疗16wk,观察并测定治疗期间及治疗后大鼠的一般状况、血糖、糖化血红蛋白、层粘连蛋白、尿素氮、血肌酐变化及24h尿蛋白排泄率。结果:造模后4组大鼠均出现血清层粘连蛋白升高和糖尿病性肾病;氨基胍、维生素C对血糖无影响,但能改善基本状况,二者合用比单用能显著降低糖尿病大鼠的血清层粘连蛋白含量、尿素氮、血肌酐及24h尿蛋白排泄率。结论:氨基胍、维生素C无降糖作用,但合用后可降低血清层粘连蛋白含量,保护肾功能,具有协同作用。

2型糖尿病合并视网膜病变老年患者血清脂联素及同型半胱氨酸的水平分析

目的探讨2型糖尿病合并视网膜病变老年患者的血清脂联素(APN)和同型半胱氨酸(Hcy)水平及其相关性。方法从该院2012年1月至2014年12月住院治疗的2型糖尿病患者中筛选68例合并视网膜病变老年患者(T2DM+DR组),调查其一般资料,检测常规生化指标并采用酶联免疫吸附法测定血清总APN、高分子量APN及Hcy水平,同时采用Pearson相关分析法评价三者间的相关性。选取同期65例老年2型糖尿病患者(T2DM组)和70例老年健康体检者(NC组)作对照。结果T2DM、T2DM+DR组的腰臀比、空腹血糖、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、糖化血红蛋白、空腹血胰岛素及胰岛素抵抗指数水平均高于NC组,高密度脂蛋白胆固醇水平低于NC组;T2DM+DR组的病程和体质量指数均高于T2DM组,差异均有统计学意义(P<0.05);T2DM、T2DM+DR组的总APN和高分子量APN水平均低于NC组,总APN与高分子量APN的比值(H/T)亦低于NC组(P<0.05),但Hcy水平高于NC组(P<0.05);且T2DM+DR组的总APN、高分子量APN水平均低于T2DM组,Hcy水平高于T2DM组,差异均有统计学意义(P<0.05);T2DM+DR组血清总APN(r=-0.654)、高分子量APN(r=-0.562)水平均与Hcy水平呈负相关(P<0.05)。结论 2型糖尿病合并视网膜病变老年患者的血清APN水平降低、Hcy水平升高,可能与2型糖尿病的视网膜病变进展有关。

槟榔碱对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

目的探讨槟榔碱对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化的影响及其机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和油红O染色检测不同浓度(10、30、50、100μmol/L)的槟榔碱对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响,荧光定量PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和CAA T/增强子结合蛋白α(C/EBPα)的表达。结果 10～100μmol/L槟榔碱作用3T3-L1前脂肪细胞12 h和24 h能促进3T3-L1前脂肪细胞增殖,且呈一定的量效关系。到分化的第9天,与对照组相比,50μmol/L槟榔碱组胞浆中的脂滴明显减少,同时PPARγ和C/EBPαmRNA表达水平显著降低。结论槟榔碱能促进3T3-L1前脂肪细胞的增殖、抑制其分化,其机制可能与PPARγ和C/EBPα的表达降低有关。

表观遗传调控在糖尿病及其并发症中的作用

表观遗传(epigenetics)是指DNA序列不发生变化但基因表达却发生了可遗传的改变.表观遗传调控过程十分复杂,主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰和微小RNA(miRNA)等.糖尿病是一种慢性代谢性疾病,常伴随大血管和微血管并发症.糖尿病的发生、发展不仅取决于遗传因素,而且也受到表观遗传修饰的调控.因此,对表观遗传调控的研究将为糖尿病及其并发症的预防和治疗提供新的思路和方法.

骨损伤刺激对骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:观察骨损伤性刺激对骨髓间充质干细胞的影响,为体内诱导骨髓间充质干细胞增殖提供方法。方法:实验于2004-07/2005-03在南华大学附属第一医院临床研究所完成。选取健康SD大鼠18只,每组9只,随机分成两组,一组为观察组,进行一侧闭合性股骨横断性骨折损伤模型处理,另一组为对照组不作骨折损伤处理,两组大鼠同等条件下饲养2周,然后取出双侧股骨进行骨髓间充质干细胞提取,流式细胞仪检测含CD44-FITC阳性而CD45-RPE阴性的细胞的构成比(骨髓间充质干细胞具有表现为CD44阳性而及CD45阴性的特点,因此把通过流式细胞仪检测到的CD44-FITC阳性同时CD45-RPE阴性的细胞认定为骨髓间充质干细胞,由此测得的该细胞数占总检测细胞数的比为骨髓间充质干细胞构成比),计算出两组骨髓间充质干细胞构成比均数。结果:实验大鼠18只均进入结果分析。①观察组处理侧骨髓间充质干细胞构成比均数高于对照组处理侧(29.19±5.06,13.05±9.08,P<0.01)。②观察组未处理侧股骨骨髓间充质干细胞构成比均数高于对照组未处理侧(22.90±5.44,14.12±8.98,P<0.01)。③观察组处理侧股骨骨髓间充质干细胞构成比均数低于未处理侧(29.19±5.06,22.90±5.44,P<0.05)。结论:骨损伤后骨髓间充质干细胞出现增殖,为骨折的愈合提供物质基础,提示骨损伤性刺激可作为活体内诱导骨髓间充质干细胞增殖的一种方法。

小鼠PGC-1α基因启动子的转录调控功能分析

目的克隆小鼠PGC-1α基因的启动子并分析其转录调控模式。方法设计引物,以小鼠肝脏组织DNA为模板,PCR扩增PGC-1α基因启动子区并克隆入荧光素酶报告基因表达载体pGL3-Basic中,构建具有PGC-1α启动子转录活性的报告质粒pGL3-PGC-1α-Luc。通过特异性引物,引入替换碱基突变相关转录因子调控模序,构建点突变融合载体,并将其转染1c1c7及c2c12细胞系,检测荧光素酶的表达情况。结果构建的pGL3-PGC-1α-Luc系列报告质粒经过酶切鉴定及DNA测序分析都显示正确;PGC-1α基因启动子区域(-2533^+78)具有较强的转录活性;突变失活PGC-1α基因启动子区域中的CRE及IRE反应原件导致转录活性明显降低。结论成功构建小鼠PGC-1α基因启动子报告质粒,PGC-1α基因上游区域(-2533^+78)具有较强的启动子活性;启动子区域中的CRE和IRE反应原件为主要转录调控位点。

PPARγ基因转染对兔骨髓间充质干细胞向脂肪细胞早期分化的影响

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因表达在骨髓间充质干细胞(MSC)向脂肪细胞早期分化中的调控作用及对脂肪分化相关蛋白(ADRP)表达的影响.方法:原代培养新西兰大白兔MSC,应用脂质体转染法将pEGFP-N1-PPARγ表达载体转入MSC中,G418筛选.成脂诱导剂诱导向脂肪细胞分化,RT-PCR检测PPARγ,ADRPmR-NA表达,Western Blot检测ADRP蛋白表达,细胞形态学、油红O染色法行脂肪细胞计数和定量.结果:未分化的MSC中PPARγ,ADRP mRNA不表达,经pEGFP-N1-PPARγ转染后,调控成脂肪细胞方向分化的转录因子和早期标志PPARγ mRNA(0.87±0.08vs0.28±0.01,P<0.01),ADRP mRNA(0.52±0.03vs0.21±0.02,P<0.01)表达增强;MSC向成脂肪细胞方向分化,成脂率及脂质量提高,分别为(78.5±4.2)%vs(51.4±3.0)%和(0.46±0.05)vs(0.21±0.02),P<0.05;分化成脂的细胞ADRP蛋白表达呈阳性,转染组较空转染组表达增强.结论:PPARγ在MSC向脂肪细胞分化的早期中起重要的正向调节作用,并促进ADRP基因和蛋白的表达;PPARγ基因过表达可增强MSC向脂肪细胞分化的能力,缩短分化进程,提高分化效率,可能与增强ADRP的表达有关.