前列腺癌发生发展相关信号转导通路的研究进展

前列腺癌的发生与发展经历一系列复杂的过程,细胞内信号通路的异常是前列腺癌发生发展的重要机制之一。研究表明Hedgehog信号通路、Wnt信号通路、Notch信号通路和MAPK信号通路与前列腺癌的发生、浸润、转移等有密切关系。本文就现阶段与前列腺癌发生发展相关的信号转导通路的研究进展作一简要综述,以期为临床早期诊断和防治前列腺癌提供新的靶点和参考。

支架、细胞、因子：组织工程血管化策略的研究与前景

背景:随着组织工程皮肤、骨、软骨、血管、肌瓣等组织的再生与修复方面已取得显著的进展,组织工程组织血管化的障碍问题引起了学者们的广泛关注。目的:总结血管形成的机制(血管生成与血管再生),血管化的策略(种子细胞,支架材料,生长因子)以及组织血管化的模型(体内与体外)等与组织血管化相关的研究,为组织工程血管化的基础研究提供理论依据。方法:计算机检索2000年1月至2016年4月Pub Med、Springerlink、Web of Science、Science Direct数据库相关文献,检索词"tissue engineering、vascularization、scaffolds、cell growth factors、vasculogenesis、angiogenesis";并检索中文期刊CNKI、维普、万方数据库相关文献,检索词为"组织工程、血管化、细胞生长因子、血管的再生、血管的生成"。55篇与组织血管化相关的同时反映其最新研究进展的文章被纳入。结果与结论:体外构建组织内微血管中运用的较多,将支架材料做成具有血管样结构的模型,再种植二维细胞,在生长因子的刺激下,二维细胞朝着血管样结构的形状增殖、迁移,进而形成微小的血管。目前,大多数在体外实验能很好的形成血管的细胞-支架复合物,都沿着移植于体内方向发展。体内血管化模型中还存在着很多问题,移植于体内的炎症反应是不可避免的,它直接影响细胞-支架复合物的功能发挥及在体内的存活问题,在组织的再生与康复中,血管化仍是组织工程中一大难题。

TO901317促进人乳腺癌细胞凋亡的研究

目的:研究肝X受体激动剂TO901317对人乳腺癌细胞凋亡的影响。方法:不同浓度(0,10,20,40μmol/L)TO901317处理MCF-7和MDA-MB-231两种人乳腺癌细胞不同时间(0,12,24,48 h),用MTT法检测细胞活力,Hoechst33342染色及流式Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot进一步检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase 3和cleaved-Caspase 3等的表达。结果:随着TO901317处理浓度的增加和时间的延长,对细胞活力的抑制作用逐渐增强,凋亡现象逐渐明显。进一步通过Western blot检测发现,TO901317可下调Bcl-2蛋白表达,促使凋亡蛋白Bax和cleaved-Caspase 3表达增多,进一步证实TO901317促进两种乳腺癌细胞凋亡。结论:TO901317能促进MCF-7和MDA-MB-231两种人乳腺癌细胞凋亡。

EGFR基因G719S和T790M突变载体的构建及临床应用研究

目的构建与宫颈癌组织表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因G719S和T790M位点突变型重组载体,利用其建立分子开关平台检测宫颈癌EGFR基因突变。方法以野生型重组质粒为模板,利用重叠PCR技术,得到突变型融合目的 DNA片段,再将此目的片段连接入p MD19-T质粒中,构建成突变型重组载体,将其转化入大肠埃希菌E.coli DH5α感受态细胞进行表达,用菌液PCR和基因组测序进行鉴定。设计特异性检测引物,建立分子开关检测平台用于临床宫颈癌样本的检测。结果通过基因组测序证实G719S和T790M突变位点成功引入,定点突变载体构建成功。成功建立了分子开关检测平台用于宫颈癌组织DNA的检测。结论利用重叠PCR技术简便、高效地构建了EGFR基因突变重组载体,并建立了分子开关检测平台,为基因定点突变及临床上检测EGFR基因突变提供了新的技术手段。

乳腺癌细胞条件培养基抑制成骨细胞增殖的作用研究

目的以高转移恶性乳腺癌细胞MDA-MB-231和恶性程度较低的MCF-7乳腺癌细胞为研究对象,探讨两种乳腺癌细胞条件培养基对hFOB1.19细胞增殖作用的影响。方法收集MDA-MB-231、MCF-7和正常对照MCF-10的条件培养基用于hFOB1.19细胞的培养,并采用MTT法检测细胞的增殖效果,流式细胞术检测细胞的生长周期,Western blot检测其周期蛋白CyclinA2的表达。结果以加入不同用量的MDA-MB-231、MCF-7条件培养基培养hFOB1.19细胞和以60%各细胞条件培养基培养hFOB1.19细胞不同时间后,hFOB1.19细胞的增殖均受到抑制,且呈剂量和作用时间依赖性;两者明显影响hFOB1.19细胞的S期,其周期蛋白Cyclin A2的表达在低浓度出现上调,但随浓度的增加而表达下降,而正常对照MCF-10条件培养基对hFOB1.19细胞的增殖影响无显著差异。结论 MDA-MB-231、MCF-7条件培养基对hFOB1.19细胞的增殖具有抑制作用,可能与其影响hFOB1.19细胞周期的S期和Cyclin A2的表达有关。

白杨素苯并咪唑衍生物合成及其体外抗肿瘤活性的研究

目的合成一系列白杨素苯并咪唑衍生物并研究其体外抗肿瘤活性。方法以白杨素为起始原料,通过醚化反应引入苯并咪唑衍生物,合成9个白杨素苯并咪唑衍生物3~11。采用MTT法检测化合物3~11对人源性胃癌细胞MGC-803,乳腺癌细胞MCF-7、肝癌细胞Hep G-2和鼠源性胃癌细胞MFC的体外抗增殖活性。流式细胞仪检测化合物10作用24 h后细胞的凋亡和周期情况。结果合成的白杨素苯并咪唑衍生物均用1H NMR,MS确证。相比于乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞Hep G-2,化合物3~11对胃癌细胞MGC-803的抗增殖活性更好。化合物4、6、7、9、10、11对胃癌细胞MGC-803的抗增殖活性优于白杨素,化合物7、10、11对胃癌细胞MGC-803和胃癌细胞MFC的抗增殖活性优于阳性对照药5-氟尿嘧啶,其中化合物10对鼠源性胃癌细胞MFC的IC 50值为(25.72±3.95)μM。用不同浓度的化合物10处理后细胞凋亡率明显增加,G0/G1期细胞逐渐增多,而S期和G2/M期细胞逐渐减少。结论化合物10抗肿瘤细胞增殖活性最强,能以剂量依赖方式诱导MFC细胞凋亡,并使细胞停滞于G0/G1期。化合物10可作为抗肿瘤候选药物进一步优化和评价。

黄酮苯并咪唑衍生物的合成及体外抗肿瘤活性研究

根据药效基团拼合原理,苯三甲氧基在黄酮B环上进行结构修饰,再与苯并咪唑类化合物衍生化得到9个全新的3'4'5-三甲氧基-7-羟基黄酮苯并咪唑衍生物。采用MTT法检测化合物的体外抗肿瘤活性。化合物4-12对MGC-803细胞株和MCF-7细胞株更为敏感。其中,化合物8的体外抗肿瘤活性最好,对胃癌细胞MGC-803、乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞HepG-2的IC_(50)值分别为20.47±2.07μmol/L、43.42±3.56μmol/L和35.45±2.03μmol/L,均优于阳性对照药5-氟尿嘧啶。化合物8具有较强的抗肿瘤活性,值得进一步探究其抗肿瘤活性与活性机制。

蛋白质精氨酸甲基转移酶2的研究进展

蛋白质精氨酸甲基转移酶2(PRMT2)是PRMTs家族成员之一。PRMT2通过甲基化底物精氨酸位点和介导蛋白质与蛋白质相互作用的方式,在调控细胞生长、增殖、分化中起着重要作用。本文从PRMT2分布、分类、产物、结构特征及作用底物出发,论述PRMT2的生化特性;分析了PRMT2在RNA代谢、转录调节、信号转导中的生物学功能及其活性调控方式;以乳腺癌和心血管疾病为重点,讨论PRMT2在这两类疾病发病机制中的表观遗传学调控作用。

几种常见天然化合物对ABCA1表达影响的研究进展

动脉粥样硬化是心血管疾病的主要病理基础,细胞内胆固醇蓄积引起的泡沫细胞形成是导致动脉粥样硬化发展的重要因素。三磷酸腺苷结合盒运转体A1(ABCA1)在胆固醇代谢中有着重要作用。许多天然化合物如葛根素、姜黄素、芍药醇等能够增加ABCA1的表达,促进胆固醇流出,减少细胞内胆固醇蓄积,抑制泡沫细胞形成。本文主要综述了天然化合物对ABCA1表达调控及动脉粥样硬化的影响,为心血管疾病的预防与治疗提供新的思路。

黑骨藤追风活络胶囊抗类风湿性关节炎的药理作用及机制

目的探讨苗药黑骨藤追风活络胶囊的抗类风湿关节炎的药理作用及机制。方法将雄性Sprague Dawley(SD)大鼠50只分为正常SD大鼠10只正常为对照组,另40只建立关节炎大鼠后分为模型非给药组、黑骨藤追风活络胶囊组(给予黑骨藤追风活络胶囊)、两种阳性药物对照组(分别以强的松及吲哚美辛治疗),每组10只;观察黑骨藤追风活络胶囊对关节炎大鼠足肿胀、脏器指数,以及血浆、关节液中白细胞介素(IL)-1β、白介素-10和肿瘤坏死因子(TNF)-α等炎症因子水平的影响。结果与正常对照组相比较,关节炎模型组大鼠足肿胀程度逐渐增加,胸腺、脾脏、肾上腺和肾脏指数增加(P<0.05);同时,关节炎大鼠血浆、关节液中IL-1β、IL-10、TNF-α等炎症因子水平明显升高。给予药物黑骨藤追风活络胶囊治疗后,足肿胀程度、胸腺和脾脏指数显著降低(P<0.05),肾上腺、肾脏指数无明显改善,效果与强的松、吲哚美辛对照药组相当。炎症因子IL-1β、TNF-α水平在药物治疗组显著降低(P<0.05),但IL-10水平较给药后有进一步升高。结论黑骨藤追风活络胶囊能够起到抗风湿性关节炎的作用,其作用机制可能与调节免疫器官功能有关。

ATM基因rs175048位点单核苷酸多态性与湖南衡阳地区汉族人群肺癌易感性的相关性

目的:探讨肺癌易感性与毛细血管扩张性共济失调突变基因(ATM) rs175048 位点单核苷酸多态性(SNP)之间的相关性。方法:选取2015 年10 月至2016 年8 月在南华大学附属第一医院及衡阳市中医院就诊的汉族肺癌患者血液样本225 例(病例组),同时收集在院体检的健康人血液样本128 例作为对照组。采用高保真聚合酶介导的单核苷酸多态性敏感性分子开关结合PCR技术检测肺癌患者与健康体检者ATM基因rs175048A/T多态位点的多态性,统计其基因型及等位基因频率,比较其在病例组与对照组的分布差异,并且分析其与肺癌临床病理特征的相关性。结果:ATM基因rs175048 多态位点的AA、AT、TT 3 种基因型的频率在病例组分别为24.9%、52.9%、22.2%,对照组为42.2%、42.2%、15.6%(均P<0.01);病例组等位基因A、T 的频率为51.0%、49.0%,对照组为63.0%、37.0%(均P<0.01);TT基因型可能会增加、而AT基因型可能减少肺癌发病风险。rs175048 单核苷酸多态位点与吸烟、年龄、性别和家族史等临床病理特征明显相关(均P<0.05)。结论:ATM基因rs175048 位点单核苷酸多态性与肺癌的发生明显相关,且TT基因型可以增加肺癌发病的风险。

双相萃取-液相色谱检测细胞培养液样品中的山银花黄酮类化合物

乙醇-磷酸氢二钾双水相体系萃取细胞培养液中的山银花黄酮类化合物,用高效液相色谱法分析样品中的山银花黄酮类化合物的含量,色谱柱为C_(18),流动相为甲醇-水(50%∶50%v/v,用磷酸酸化至pH 4.0),流速1.0 m L/min,检测波长352 nm。结果表明,双水相萃取山银花黄酮上相乙醇,得到5个信号较强的化合物,其色谱行为与未经萃取的相同浓度山银花黄酮粗提物样品基本一致;萃取山银花黄酮粗提物细胞培养液样品获同样结果,表明乙醇-磷酸氢二钾双水相萃取结合液相色谱可检测细胞培养液中的山银花粗提物的黄酮化合物,该双水相能较好萃取并浓缩黄酮类化合物分配于上相乙醇中,有利于成分复杂、低浓度生物样品中待测化合物的分离、纯化、浓缩。

重叠PCR法构建宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M融合重组载体

目的构建包含与宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M位点重组p MD19-exon18-exon20载体,为制备突变型EGFR基因重组载体提供模板。方法以健康人全血基因组DNA作为模板,设计2对有重叠互补区的特异性引物,对EGFR基因的exon18和exon20两片段分别进行扩增,用重叠PCR技术将exon18和exon20片段进行连接,再将连接产物exon18-exon20片段插入p MD19-T质粒,构建成野生型p MD19-exon18-exon20载体,转入至大肠埃希菌感受态细胞DH5α中进行表达,利用菌液PCR和基因组测序进行鉴定。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示,exon18和exon20两位点扩增片段在778 bp和596 bp处有清晰的目的条带,两片段的融合产物exon18-exon20片段可在1 374 bp处见一清晰目的条带;经菌液PCR和基因组测序结果鉴定,EGFR基因融合重组质粒均与预期结果一致。结论利用重叠PCR法将exon18和exon20片段进行融合,且成功构建了EGFR基因重组表达载体。

长链非编码RNA尿路上皮癌胚抗原1调节肿瘤耐药机制的研究进展

尿路上皮癌胚抗原1(UCA1)是在膀胱癌中发现的一种长链非编码RNA(lncRNA),在膀胱癌、乳腺癌、黑色素瘤等多种肿瘤中存在差异表达。UCA1可对多种信号通路进行调控,并且作为竞争性内源RNA(ceRNA)参与转录后调控。近期研究发现UCA1的异常表达与肿瘤化疗耐药密切相关,有望成为肿瘤化疗耐药的潜在靶标,为逆转肿瘤耐药提供新思路。本文就UCA1参与肿瘤化疗耐药调节的具体分子机制作一综述。

黄豆、豆浆、豆渣中黄豆苷、染料木苷、染料木素的含量测定

建立同时测定黄豆中黄豆苷、染料木苷、染料木素的RP-HPLC法,为豆类食品中以上有效化学成分的检测和合理食用提供参考。样品经80%甲醇超声提取15 min,采用Eclipse XDB-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5.0μm)色谱柱,以甲醇∶0.1%磷酸=62.5∶37.5为流动相,流速为1.00 mL/min,进样量为10μL,检测波长为254 nm。以峰面积计算结果为黄豆苷、染料木苷、染料木素分别在0.5~32.0 mg/L,4.0~128.0 mg/L,0.1~16.0 mg/L呈良好线性关系,相关系数r均为0.999 9;测定黄豆苷、染料木苷、染料木素的高、中、低浓度精密度均<2.0%,三成分的重现性精密度分别为1.67%,0.06%,0.07%,表明该方法精密度和重现性良好。测定黄豆样品中黄豆苷,染料木苷,染料木素的平均含量分别为724.3,1 306.7,16.0μg/g。黄豆苷在其豆浆和豆渣中含量分别为黄豆的39.6%,23.2%;染料木苷在其豆浆、豆渣中分别为黄豆的53.5%,34.9%;染料木素在豆渣中含量约占黄豆的43.1%,而豆浆中因浓度低而未检出。

乳腺癌细胞条件培养基对成骨细胞增殖抑制作用的机制探讨

目的:探讨MDA-MB-231、MCF-7乳腺癌细胞条件培养基对hFOB1.19成骨细胞的增殖抑制作用与Notch信号通路的相关性。方法:MTT法检测MDA-MB-231、MCF-7乳腺癌细胞条件培养基对hFOB1.19细胞的增殖抑制效果;Western Blot与qRT-PCR分别检测hFOB1.19细胞的Notch1、Jagged1、Hes1蛋白与mRNA的表达。结果:MDA-MB-231、MCF-7条件培养基抑制hFOB1.19细胞增殖,DAPT(Notch阻断剂)可明显降低MDA-MB-231、MCF-7条件培养基对hFOB1.19细胞增殖的抑制作用。MDA-MB-231、MCF-7条件培养基上调hFOB1.19细胞Notch1、Jagged1、Hes1的mRNA和蛋白的表达,并随着条件培养基浓度的增加,以上指标的表达呈先上升而后下降的趋势。Notch阻断剂DAPT明显抑制两细胞条件培养基对hFOB1.19细胞的Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA和蛋白表达的上调作用。结论:MDA-MB-231、MCF-7条件培养基对hFOB1.19细胞增殖抑制作用的机制与Notch信号通路相关。

EGFR基因G719S和T790M突变与宫颈癌的相关性研究

目的探讨高保真聚合酶介导的分子开关突变检测技术对于筛查宫颈癌患者表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因G719S、T790M突变的价值,并分析上述突变与宫颈癌的相关性,以指导小分子酪氨酸激酶抑制剂类药物(tyrosine kinase inhibitor,TKI)的合理使用。方法设计两个位点的野生型与突变型序列的特异性引物,并硫化修饰引物的3′末端。以实验室构建的重组质粒为对照模板,进行高保真酶介导的PCR反应。将上述方法应用于临床样本的突变检测,并辅以测序验证。结果在80例宫颈癌组织以及31例癌旁组织的DNA样本中均未检测出EGFR基因的G719S、T790M突变,与DNA测序的结果一致。病例组的基因型分布频率与对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论建立了检测EGFR基因G719S、T790M突变的分子开关技术平台。EGFR基因的G719S、T790M突变可能与宫颈癌无关。

以白藜芦醇为结构单元的丹酚酸A类似物的合成及其体外抗氧化作用测定

目的以白藜芦醇为结构单元设计合成丹酚酸A的结构类似物,测定其体外机抗氧化作用。方法通过简单的四步反应进行合成并确定其结构,同时对合成的丹酚酸A类似物进行体外抗氧化1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)活性测试。结果成功建立丹酚酸A类似物。DPPH抗氧化活性测试结果显示化合物d、e和f的自由基清除率远大于对照品丹酚酸A和抗坏血酸。结论设计合成的丹酚酸A类似物具备极强的抗氧化活性,具有进一步研究的价值。

黄酮水杨酸衍生物的合成及抗肿瘤活性测定

合成一系列黄酮水杨酸衍生物并研究其体外抗肿瘤活性。通过Friedel-Crafts反应和改进后的Baker-Venkataraman重排反应得到化合物2。水杨酸衍生物甲基化和酰氯化后,与化合物2和白杨素发生酯化反应得到目标化合物。采用MTT法检测化合物的体外抗肿瘤活性。化合物2、5a、5b、6a、6b对胃癌细胞MGC-803整体的抗增殖活性更好,均优于白杨素与5-氟尿嘧啶。其中5b对胃癌细胞MGC-803的抗肿瘤活性(21.59±5.75μmol/L)优于其它化合物。黄酮骨架引入苯三甲氧基基团在一定程度上能增强其抗肿瘤活性。化合物5b具有较好的抗肿瘤活性,可作为抗癌候选药物进一步优化和评价。

黄酮衍生物的合成与抗肿瘤活性评价

目的合成一系列具有抗肿瘤活性的黄酮衍生物。方法通过Friedel-Crafts反应和改进后的Baker-Venkataraman重排反应合成三甲氧基黄酮2和4,再与水杨酸衍生物6a和6b通过酯化反应得到目标化合物7a、7b、8a、8b、9a、9b。采用MTT法检测目标化合物对人源性胃癌细胞MGC-803、鼠源性胃癌细胞MFC、肝癌细胞Hep G-2和乳腺癌细胞MCF-7的体外抗增殖活性。流式细胞仪检测化合物7b作用于MFC细胞24 h后的凋亡情况。结果目标化合物经1H NMR,ESI-MS确证。化合物7b对肿瘤细胞生长的抑制作用最强,优于其黄酮母体2和5-氟尿嘧啶,并对人正常肝细胞L-02的毒性较低。化合物7b对MFC细胞表现出显著的生长抑制作用,IC50为(13.73±2.04)μM。凋亡实验结果进一步证明化合物7b对MFC细胞凋亡的诱导呈浓度依赖性。结论化合物7b有望成为新型高效低毒抗肿瘤的候选药物,需进一步探究其抗肿瘤活性及其作用机制。