SARS-CoV-2核衣壳蛋白的生物信息学分析、纯化及多克隆抗体制备

目的分析新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核衣壳(N)蛋白的生物学性质、纯化及多克隆抗体制备。方法NCBI检索感染人的冠状病毒N蛋白氨基酸序列,采用Clustal Omega软件对其进行序列比对。利用SOPMA软件预测SARS-CoV-2 N蛋白的二级结构;应用Pondr和IUPred软件预测SARS-CoV-2 N蛋白的固有无序结构域;运用MoRFchib软件预测SARS-CoV-2 N蛋白的分子识别特征序列;利用IEDB网络分析其B细胞表位。纯化的N蛋白免疫BALB/c小鼠,分离小鼠血清,制备多克隆抗体;ELISA法测定血清中多克隆抗体滴度;MTT法检测N蛋白刺激小鼠脾细胞增殖情况。结果SARS-CoV-2 N蛋白与SARS-CoV N蛋白的同源性高于97%。N蛋白二级结构的无规卷曲占55.13%,α螺旋占21.24%,β折叠占16.71%,β转角占6.92%。N蛋白含有大量固有无序样结构,具有4个分子识别特征序列和11个线性B细胞表位。全长为51.5 kDa N蛋白可诱导BALB/c小鼠分泌高滴度抗体,并能导致淋巴细胞增殖。结论SARS-CoV-2 N蛋白含有大量固有无序结构域并获得了高滴度多克隆抗体。