沉默RORα通过活化Wnt/β-catenin通路靶基因促进人胃癌细胞增殖

目的探讨人胃癌细胞中维甲酸相关孤核受体(ROR)α与Wnt/β-连环素(catenin)通路的相互作用。方法噻唑蓝(MTT)实验验证沉默RORα对胃癌细胞系MGC803的增殖作用;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹与免疫共沉淀检测敲低RORα对Wnt/β-catenin通路相关分子与靶基因表达;荧光素酶报告检测c-Myc基因启动子活性。结果敲低RORα可显著促进胃癌细胞增殖(P<0.05)。当RORα被敲低时可显著上调Wnt1 mRNA和蛋白表达(P<0.05);但对β-catenin无明显影响(P>0.05)。免疫共沉淀提示敲低RORα可显著降低RORα与β-catenin的结合效率(P<0.05)。RORα敲低后,核内β-catenin与转录因子(TCF)-4表达水平明显升高(P<0.05)。Wnt通路下游基因Axin、c-Myc、c-Jun和基质金属蛋白酶(MMP)-9的mRNA和蛋白水平显著上调(P<0.05)。荧光素酶报告提示,敲低RORα可显著增强c-Myc启动子活性(P<0.05)。结论敲低RORα可活化Wnt/β-catenin信号通路从而促进胃癌细胞增殖。

miR-27a低表达对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖的影响

目的 研究miR-27a低表达对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖的影响。方法 构建miR-27a低表达HEC-1-A细胞株。细胞实验分为空白对照组(HEC-1-A不做任何处理)、NC-miR组(转染miR-27a空载体)及miR-27a inhibitor组(转染miR-27a抑制剂)。qRT-PCR法检测各组细胞miR-27a表达情况;MTT比色法和平板克隆技术检测各组细胞增殖能力。结果 成功构建miR-27a低表达HEC-1-A细胞株。miR-27a inhibitor组miR-27a水平及细胞增殖能力均低于NC-miR组及空白对照组(P<0.05)。结论 miR-27a低表达抑制子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖能力。

DADS通过RORα/β-catenin抑制人胃癌MGC803细胞侵袭与EMT

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)通过RORα/β-catenin信号对人胃癌MGC803细胞迁移侵袭与上皮-间质转化(EMT)的影响。方法MGC803细胞实验分为MGC803组、DADS组、SR1078组、SR1078+DADS组。MTT检测细胞增殖能力;细胞划痕和Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭能力。Western blotting与免疫荧光检测RORα/β-catenin信号与EMT相关分子表达情况,免疫共沉淀检测RORα蛋白与β-catenin蛋白结合能力,相差显微镜观察细胞形态改变。结果与MGC803组比较,DADS组、SR1078组细胞增殖能力分别呈时间依赖性降低(P<0.05);细胞迁移与侵袭能力降低(P<0.05);RORα蛋白与E-cadherin明显上调(P<0.05),而核内β-catenin、转化生长因子-β1、Rac1与Vimentin表达下调(P<0.05);RORα与β-catenin结合明显减少(P<0.05);长梭形细胞减少,异型性降低(P<0.05)。SR1078+DADS组的上述指标结果更明显(P<0.05)。结论DADS通过RORα/β-catenin信号抑制人胃癌MGC803细胞增殖、迁移侵袭与EMT,提示DADS与SR1078的作用相似。

CADM-1对人宫颈癌Hela细胞转录组学的影响及意义

目的 探讨粘附分子CADM-1基因对人类宫颈癌细胞系Hela细胞转录组学的影响。方法 构建rLV-hCADM-1-ZsGreen-Puro慢病毒和rLV-ZsGreen-Puro对照慢病毒,将感染rLV-h CADM-1-ZsGreen-Puro慢病毒的Hela细胞作为rLV-CADM-1组,将感染rLV-ZsGreen-Puro对照慢病毒的Hela细胞作为rLV组。筛选差异基因集并进行基因转录能力、基因本体(GO)功能、京都基因与基因组数据库(KEGG)信号通路、Reactome通路及疾病本体(DO)功能分析。结果 rLV-CADM-1组CADM-1相对表达量(38.57±2.58)显著高于rLV组(0.90±1.08),差异有统计学意义(t=20.460,P<0.05)。基因差异分析共筛选出321个差异表达的基因,其中表达上调171个、表达下调150个。差异最显著的前10个表达上调基因包括OLFM1、TUSC3、ENSG00000285779、SPARC、CCL5、ENSG00000261512、CADM-1、OAS1、CLIC3及CSAG3。差异最显著的前10个表达下调基因包括COL16A1、SYTL4、ENSG00000278996、CGA、SLC47A1、TNC、ENSG00000276570、UGT3A1及MARCOL。功能分析结果显示,CADM-1改变了Hela细胞部分基因的转录能力、参与调控GO功能、KEGG信号通路、Reactome通路及DO功能。结论 CADM-1可明显影响Hela细胞的转录组学。