m^(6)A RNA修饰在非小细胞肺癌治疗耐药中作用及机制的研究进展

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是世界范围内常见的恶性肿瘤之一,虽然治疗手段不断进步,但耐药问题仍然制约着治疗效果和患者预后。近年来,研究表明在NSCLC中,N6-甲基腺嘌呤(m^(6)A)RNA修饰在治疗耐药中起到了新的作用。m^(6)A RNA修饰是一种广泛存在于RNA分子中的重要修饰形式,它能够调控RNA的稳定性、剪接、翻译和定位,从而影响基因表达和细胞功能。本综述将综合分析m^(6)A RNA修饰在NSCLC治疗耐药中的新作用及其潜在的机制,以期为NSCLC治疗提供新的策略和方法。

OBE联合混合式教学的基础检验学教学研究

目的探讨基于OBE理念+混合式教学模式的《临床基础检验学技术》课程教学效果。方法研究对象为2019级80例医学检验与卫生检验学本科生,使用随机数字表法将其分为对照组(40名)和观察组(40名)。对两组学生均实施《临床基础检验学技术》课程,对照组采取传统教学模式,观察组采取基于OBE理念联合混合式教学模式。将两组学生考核成绩(技能操作、理论笔试、行动能力、病例分析)及教学模式满意度情况进行对比。结果将两组学生各项考核成绩进行对比,观察组均明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。将两组学生教学模式满意度进行对比,观察组均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在《临床基础检验学技术》教学阶段采取基于OBE理念+混合式教学模式效果理想,有助于提高教学质量,激发学生的学习兴趣,对于提高学生的综合素质与教学满意度具有积极作用。

探索临床医学检验专业新型实习带教模式

临床医学检验专业的实习是临床实践的重要过程。南华大学附属第一医院临床检验教研室通过更新带教内容和形式、制定实习带教计划,引入主动教育理念,并且通过讲座、沙龙等形式提高学生临床沟通能力;改革教学考核模式,医院和科室采用指定教学专干的模式,由专人进行教学管理,并且重视实习生科研能力的培养等方面建立临床医学检验专业新型实习带教模式,为培养优秀的检验工作者提高理论基础和实践帮助。

优化《临床检验基础》二段式教学模式改革探讨

优化《临床检验基础》二段式教学模式改革的策略是:根据培养目标,修订教学大纲;实行引导式教学,活跃理论教学课堂;加强实验前准备,紧密衔接理论与实验教学;模拟临床检验,"活"化实验教学;注重教学效果评价等。

衡阳地区某三甲医院2015年细菌耐药性监测

目的了解衡阳地区某三级甲等医院临床分离菌对常用抗菌药物的敏感性和耐药性。方法收集南华大学附属第一医院临床分离的细菌,统一采用自动化仪器法进行细菌药物敏感性实验。按照美国临床和实验室标准协会(CLSI)2015版指南判断结果。结果临床总计分离细菌7 332株,革兰阳性菌1 482株,占20.2%,革兰阴性菌5 850株,占79.8%。金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中耐甲氧西林的平均检出率分别是46.5%和74.9%;未发现万古霉素和利奈唑胺耐药株。肠球菌属中以屎肠球菌为主(76.4%),粪肠球菌对万古霉素、利奈唑胺的耐药率分别为4.2%和5.6%;屎肠球菌对万古霉素、利奈唑胺的耐药率分别为7.8%和7.0%。共分析链球菌属294株,主要为肺炎链球菌(213株,占链球菌属的72.4%)。肺炎链球菌非脑膜炎株对青霉素的中介和耐药率分别为17.9%和12.1%。肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素仍保持很高的敏感性,敏感率>80%。鲍曼不动杆菌耐药严重,鲍曼不动杆菌对美罗培南的耐药率是62.3%,对替卡西林/克拉维酸的耐药率为66.7%,其他药物耐药率均>60%。结论革兰阳性葡萄球菌中未发现万古霉素和利奈唑胺耐药株,革兰阴性菌对碳青霉烯高度敏感,但耐药菌有增加趋势。医院需及时采取有效的感控和临床手卫生措施,防止细菌耐药性加剧。

维生素C与葡萄糖同时检测以消除其对血液葡萄糖检验中干扰的研究

目的探讨分析维生素C与葡萄糖同时检测以消除其对血液葡萄糖检验中干扰的临床效果。方法收集在我院行健康体检的检查人员的血清,将收集到的样本随机分为10份,先检测样本中的葡萄糖的结果并记录;之后在样本中加入不同浓度葡萄糖溶液、维生素C,检测样本中葡萄糖、维生素C的结果,并与之前的结果进行比较,探讨其对血液葡萄糖检验中干扰的严重程度。结果维生素C的浓度不同对受检人员的血糖干扰率不同,维生素C的浓度越高,对血糖检测的干扰率越高。结论维生素C会对血糖检测结果造成干扰,维生素C与葡萄糖同时检测可以消除维生素C对血液葡萄糖检验中的干扰,对临床上救治危及的患者具有重要的临床指导意义。

衡阳地区鲍曼不动杆菌基因分型及医院感染分布情况

目的研究鲍曼不动杆菌医院感染分子流行病学的情况,为控制医院感染提供直接、可靠的参考依据。方法对衡阳地区2011年1月～12月临床送检18 000份标本中分离出的480例鲍曼不动杆菌的药敏试验结果等进行回顾性分析,了解鲍曼不动杆菌医院感染现状;建立随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法对其中140株多重耐药鲍曼不动杆菌进行基因分型。结果 480例鲍曼不动杆菌标本主要来自ICU、呼吸内科、烧伤科等;标本分布以痰标本最高占65.0%,其次为伤口分泌物标本占20.0%,中段尿10.0%,其它类型标本占5.0%;480株鲍曼不动杆菌的多重耐药情况非常严重,对亚胺培南/美罗培南耐药率分别为36.0%和38.0%,对其它大多数抗菌药物的耐药率为80%以上;140株多重耐药鲍曼不动杆菌用RAPD分型方法分为8种类型:A～H,其中A、B、C 3型共占70.0%。结论鲍曼不动杆菌耐药性呈上升趋势,且具有多重耐药性;衡阳地区医院感染多重耐药鲍曼不动杆菌可能存在院内的克隆传播。

2010年～2011年衡阳地区泌尿系感染病原菌调查和药敏谱分析

目的探讨衡阳地区泌尿系感染病原菌的分布及其对抗菌药物的耐药性,以指导临床合理用药。方法对2010年1月～2011年12月两年间泌尿系感染的中段尿进行细菌培养、分离鉴定,并进行药敏试验。结果共有尿培养5 013例,检出1 505株病原菌,检出率为30.0%。尿路感染中最常见的病原菌是大肠埃希氏菌,占52.1%,其次是肠球菌属,占11.5%,真菌占10.3%;泌尿系感染病原菌革兰阴性杆菌对亚胺培南、美罗培南较为敏感,葡萄球菌和肠球菌属对万古霉素、呋喃妥因较为敏感,其它菌株对常用抗菌药物均产生了一定的耐药性。结论泌尿系感染病原菌的耐药严重,临床应尽早进行细菌培养和药敏试验,合理选择抗菌药物。

梅毒苍白密螺旋体多表位抗原基因的构建、表达及免疫反应性的鉴定

目的为梅毒检测试剂提供特异性强、灵敏度高的新型多表位重组抗原。方法PCR扩增Tp17和Tp0453基因的优势抗原表位,连接后插入pQE32质粒中构建多表位嵌合重组体pQE32/Tp0453-17,IPTG诱导表达,免疫印迹法检测表达产物的免疫反应性。结果成功构建了多表位嵌合重组质粒pQE32/Tp0453-17,经酶切、测序分析表明,插入的基因片段为Tp0453和Tp17基因,片段长约1180 bp,其测序结果与GenBank上登录序列完全一致;SDS-PAGE分析表达产物发现,融合基因表达的重组蛋白Mr约为52×103,表达产物占全菌总蛋白的19.3%,并且在细胞内主要以包涵体形式存在;用Western印迹法检测显示,该重组蛋白能与梅毒患者的阳性血清反应,具有良好的抗原性。结论成功表达了具有良好免疫反应性的多表位嵌合重组抗原,为新型梅毒快速诊断试剂盒的研究奠定了良好的实验基础。

esp基因存在与粪肠球菌耐药的相关性分析

目的研究粪肠球菌临床株表面蛋白基因(esp)的流行情况及esp基因存在状况与粪肠球菌耐药的相关性。方法用PCR法扩增粪肠球菌esp基因并克隆、测序;用琼脂稀释法检测5种常用抗菌药物对粪肠球菌临床株的最低抑菌浓度(MIC)。结果61株粪肠球菌中,esp基因阳性率为42.6%;氨苄西林、环丙沙星、高浓度庆大霉素MIC>500 mg/L,红霉素耐药粪肠球菌中,esp阳性率分别为33.3%、54.8%、70.6%、51.0%;敏感株中esp阳性率分别为43.6%、30.0%、7.4%、8.3%。结论esp基因的存在状况与粪肠球菌对氨苄西林耐药无明显相关性,而与环丙沙星、红霉素、高浓度庆大霉素耐药有显著相关性;esp基因有可能成为粪肠球菌耐药株的分子表面标志物。

调控肿瘤EMT的转录因子及其相关信号通路

上皮细胞-间充质细胞转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指通过某种因素刺激,使上皮细胞表型发生改变,表现出间质表型的特定生物学变化,具体表现为上皮细胞标志蛋白减少,如E-钙黏素等,而间充质细胞标志蛋白上调,如N-钙黏素,波形蛋白等。研究表明,EMT在肿瘤的侵袭转移过程中发挥着关键调控作用,EMT是肿瘤细胞侵袭转移的第一步和最重要的影响因素,大约90%的肿瘤患者死亡都源于肿瘤的转移,因此对EMT机制的研究仍是肿瘤研究的热点,了解调控肿瘤EMT的具体分子机制对于肿瘤的防治意义重大。

3种免核酸提取PCR试剂盒检测乙型肝炎患者血清中HBV DNA的比较

目的比较3种免核酸提取PCR试剂盒检测乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA的灵敏度和特异度,初步探讨其用于HBV DNA检测的临床价值。方法用3种免核酸提取PCR试剂盒分别检测30例慢性乙型肝炎患者及30例阴性参比血清标本中的HBV DNA,以荧光定量PCR结果为标准,比较3种试剂检测灵敏度和特异度。结果 3种试剂盒的HBV DNA阳性检出率分别为93.3%(28/30)、96.7%(29/30)、100%(30/30);3种试剂检测HBV阴性的特异度均为100%;3种试剂检测灵敏度A公司为103 IU/mL,B、C公司均为102 IU/mL。结论使用免核酸提取PCR试剂检测HBV快速、简便、高效,可用于临床HBV DNA快速检测。

肺源性心脏病急性发作期免疫功能的改变

目的:观察肺源性心脏病(简称肺心病)急性发作期患者免疫功能的变化。方法:选择南华大学附属第一医院2004-11/2006-01收治慢性肺心病急性发作期患者60例为肺心病组,于急性加重期入院第2天7:00,空腹抽取静脉血,采用流式细胞仪检测T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及自然杀伤细胞活性,免疫浊度法检测体液免疫指标(IgG,IgM,IgA及补体C3)。以同期60例健康体检者为对照。结果:120例是否受试者均进入结果分析。①T细胞亚群:肺心病组CD3+,CD4+水平低于对照组(0.52±0.06,0.62±0.04;0.32±0.06,0.41±0.06;P均<0.05),CD4+/CD8+高于对照组(1.96±0.26,1.84±0.78,P<0.05)。②免疫血清指标:肺心病组IgA、补体C3及自然杀伤细胞活性低于对照组[(1.26±0.74),(2.45±0.85)g/L;(6200±217),(9960±302)mg/L;0.34±0.08,0.57±0.07;P均<0.05]。结论:肺源性心脏病急性发作期患者的细胞免疫和体液免疫功能均受损,尤以细胞免疫功能受损更突出,且与病情呈平行关系。

衡阳地区人群微量元素检测结果回顾性分析

目的了解衡阳地区人群微量元素缺乏情况。方法将2017年8月至2018年7月南华大学附属第一医院9 140例体检者按年龄分为婴儿组、幼儿组、学龄前组、学龄儿童组、少年组及成人组,分别检测其钙(Ca)、铜(Cu)、铁(Fe)、镁(Mg)、锌(Zn)水平。结果各组人群Ca、Cu、Fe、Mg、Zn平均水平均在参考范围内;各年龄组人群中Fe和Zn缺乏率相似,婴幼儿组最高,少年组最低;少年组Ca缺乏率最高,成人组最低;成人组Mg缺乏率最高,学龄前儿童组最低;学龄儿童组Cu缺乏率最高,婴幼儿组最低,组间差异均有统计学意义(P<0.05)。该地区人群对Ca的缺乏率最高。结论该地区婴幼儿容易出现Zn、Ca及Fe缺乏,而学龄儿童与少年也易缺乏Ca,该地区人群较高的Ca缺乏率也不容忽视,应该根据其特点,加强健康教育,优化膳食结构,合理饮食,补给微量元素,提高全民身体素质。

肿瘤标志物CA724、CA199、CA242、CEA联合检测在老年胃癌诊断中的应用

目的观察肿瘤标志物CA724、CA199、CA242、CEA单项及联合检测在老年胃癌诊断中的价值。方法选取老年胃癌患者50例作为观察组,同时选取慢性萎缩性胃炎伴重度不典型增生的患者50例为对照1组,选取浅表性胃炎或正常胃黏膜者50例作为对照2组。检测三组观察对象的血清,上午取空腹静脉血10 ml,用离心机分离,然后将分离血清存贮在-90℃的冷冻冰箱进行保存,最后进行肿瘤标志物CA724、CA199、CA242、CEA检测。且通过CA724、CA199、CA242、CEA单项及联合检测分析不同分化程度和不同分级的检测情况。结果观察组患者血清肿瘤标志物各项指标明显高于对照1组和对照2组(P<0.05和P<0.01);且对照1组各项指标均明显高于对照2组(P<0.05)。高、中分化组胃癌患者CA724、CA199、CA242阳性率均优于低分化组(P<0.05)。各组CEA阳性率差异不明显(P>0.05)。Ⅰ和Ⅱ期胃癌患者4种肿瘤标志物阳性水平明显低于Ⅳ期(P<0.05)。Ⅰ和Ⅱ期胃癌患者肿瘤标志物阳性率明显高于Ⅳ期(P<0.05)。结论肿瘤标志物CA724、CA199、CA242、CEA的水平异常升高或可提示有癌前病变或胃癌的发生,它可作为胃癌早期诊断的重要辅助指标。

肺炎嗜衣原体Cpn0425重组蛋白的克隆与表达及抗原性研究

目的构建重组质粒pGEX6p-2/Cpn0425,在E.coli BL21中进行诱导表达,纯化获得重组融合蛋白Cpn0425,并评价其抗原性。方法 PCR扩增肺炎嗜衣原体Cpn0425蛋白编码基因,构建pGEX6p-2/Cpn0425重组质粒,测序正确后在E.coli BL21中诱导表达,用SDS-PAGE和Western-Blot进行分析和鉴定。结果构建了重组质粒pGEX6p-2/Cpn0425,并在E.coli BL21菌中高效表达出Mr约为50kDa的GST-Cpn0425目的蛋白,超声裂解后SDS-PAGE分析目的蛋白在菌体细胞内以可溶性形式表达,经采用默克Novagen的GST纯化树脂纯化获得纯度在95%以上的重组蛋白。结论获得了Cpn0425基因片段,并在E.coli BL21中成功表达,GST-Cpn0425具有良好的抗原性。

抗梅毒螺旋体重组蛋白Tp0453单克隆抗体的制备及应用研究

目的利用基因重组抗原免疫BALB/c小鼠,制备抗梅毒螺旋体(Tp)重组蛋白Tp0453的单克隆抗体(mAb),评价其在早期梅毒Tp抗原诊断中的应用。方法以重组蛋白Tp0453免疫BALB/c小鼠,将免疫后的小鼠脾脏与SP2/0细胞融合,用间接ELISA和Western Blot检测杂交瘤细胞分泌的抗体,并对阳性细胞经亚克隆建株;体内诱生腹水法制备抗体,用硫酸铵沉淀法对mAb进行纯化并测定其亚类和效价;以自制的mAb建立间接免疫荧光法(IIF)检测梅毒患者分泌物标本,并与镀银染色的检测结果进行比较。结果获得4株稳定分泌抗重组蛋白Tp0453的杂交瘤细胞株,分别命名为15B2、8B9、9C6和2F8,其mAb效价分别为1∶25000、1∶8000、1∶50000、1∶10000;2F8杂交瘤细胞分泌的mAb为IgG2b,其他3株交瘤细胞分泌的mAb均为IgG1;4株mAb腹水经SDS-PAGE均显示出一条分子量约为50kDa的重链条带和一条分子量为26kDa的轻链条带;4株杂交瘤细胞染色体数在90～108范围内变化。IIF显示自制的mAb能与天然的Tp抗原结合,检测86例分泌物标本,IIF与镀银染色的符合率为95.3%。结论本实验成功获得了抗Tp0453重组蛋白的mAb,该mAb能识别天然的Tp0453抗原,有望应用于早期梅毒感染的抗原检测。

粪肠球菌Ace重组蛋白的表达、纯化及黏附活性研究

构建含粪肠球菌表面蛋白Ace保守序列A的重组载体,在大肠埃希菌M15中进行诱导表达、纯化表达产物,研究其黏附活性。以粪肠球菌标准株JH2-2为模板进行PCR扩增ace基因保守序列A,构建重组质粒pQE30/Ace,转化至表达宿主菌M15中进行诱导表达,利用SDS-PAGE和Western blot进行分析和鉴定表达结果,Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,同时用纯化的Ace重组蛋白免疫新西兰兔,用所得相应的抗血清分别进行黏附和黏附抑制实验。结果可见,构建的重组质粒经酶切鉴定和测序鉴定证明其中插入片段为ace基因保守序列A,测序结果与Genbank上登录序列完全一致;SDS-PAGE分析显示,重组工程菌表达了一相对分子质量(Mr)约为37 ku的目的蛋白条带,Western blot检测其能与6×His单克隆抗体发生特异性反应。粪肠球菌JH2-2能够黏附于胶原蛋白Ⅰ表面;抗Ace多克隆抗体可抑制46℃培养的JH2-2对胶原蛋白Ⅰ的黏附,这种抑制作用与其稀释度呈负相关。构建的原核表达载体PQE30/Ace在E.coli M15中成功地表达,纯化的重组Ace蛋白具有胶原黏附活性。

梅毒螺旋体Tp0319重组蛋白的表达、纯化及其在临床诊断中的初步应用

目的克隆、表达及纯化梅毒螺旋体(Tp)外膜蛋白Tp 0319,并建立间接ELISA方法,探讨其在梅毒血清学诊断中的价值。方法构建重组质粒PQE32/Tp 0319,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和western blot鉴定表达结果;Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白,间接ELISA检测梅毒患者血清中特异性IgG抗体。结果成功构建了PQE32/Tp 0319重组质粒;经SDS-PAGE检测,诱导产物显示有一条相对分子质量约为30 000的特异蛋白质条带,western blot分析证明其只与人抗Tp IgG发生特异性反应;将Tp 0139用于间接ELISA检测抗Tp抗体阴、阳性参比血清,特异性和敏感性均为100%;检测梅毒患者和健康献血者血清各150份,结果与TPPA法符合率为95.3%。结论制备的Tp 0319重组蛋白有较好的免疫反应性,可望用于临床梅毒血清学诊断。

过表达miR-145抑制结肠癌细胞HCT-116增殖

目的:体外实验研究过表达miR-145对结肠癌细胞系HCT-116生物学功能的影响。方法 :PCR扩增miR-145基因片段,将其构建入真核表达载体pCMV-myc中,通过酶切及DNA测序证实后,将重组质粒转染入结肠癌细胞HCT-116。运用流式细胞术、CCK8实验和细胞划痕试验检测过表达miR-145对HCT-116细胞增殖速度、细胞周期进程和细胞迁移能力的影响。结果:miR-145转染组HCT-116细胞G1期百分比增高、细胞增殖速度变慢和划痕中心区细胞数减少。结论:过表达miR-145可导致HCT-116结肠癌细胞发生G1期阻滞、增殖速度变慢和细胞迁移能力降低。