柑橘黄龙病菌RAA检测技术研究与应用

以柑橘黄龙病亚洲韧皮杆菌保守基因序列为靶基因设计特异性引物,经引物筛选和反应条件的优化,建立黄龙病菌的重组酶等温扩增的快速检测方法。该方法在39℃反应温度下20min即可实现靶标基因片段的有效扩增。特异性分析结果表明RAA方法检测柑橘黄龙病病菌与其他常见致病菌菌株间不存在交叉反应,结果表明,RAA方法操作简单、费用低廉、特异性强、灵敏度高、快速高效、操作简单、检测结果直观、对仪器设备要求低等特点,是一项具有广泛前景的方法,为检验黄龙病菌的检测提供新的发展方向。

柑橘黄龙病RAA-LFD检测方法的建立

本研究基于柑橘黄龙病菌50S核糖体亚基基因的保守片段设计并合成引物和探针,通过对反应条件的优化,建立了柑橘黄龙病菌RAA-LFD检测方法。该方法可快速高效地完成柑橘黄龙病菌检测,灵敏度可达到10 copies/μL;特异性试验结果显示,除柑橘黄龙病菌基因组呈阳性外,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、胸膜肺炎放线杆菌、单核细胞增生李斯特菌、支气管败血波氏杆菌、沙门氏菌均为阴性,特异性良好。利用该方法检测102份柑橘叶样本,结果显示,56份样本核酸为阳性,46份样本核酸为阴性;与荧光定量PCR法、RAA荧光法比较,RAA-LFD检测法弱阳的检出率偏低,但是RAA-LFD检测法摆脱了仪器依赖,操作更简便快速,无需电泳检测,避免了核酸扩增产物开盖污染的风险,适用于柑橘黄龙病菌的快速检测,适合在基层使用。

柑橘黄龙病菌含量全年动态变化研究

目的:对柑橘黄龙病菌在广西沃柑植株体内含量动态变化进行研究,比较效果。方法:通过选取广西沃柑种植果园,该果园面积为0.13万hm^(2),树龄大概在15年左右。选取柑橘树共计100棵。根据2010年袁亦文柑橘黄龙病情分级标准,将果园分为5个病级,进行DNA的提取。取100 mg沃柑叶片中脉,在切碎后装入置管,并加入缓冲液,随后做好比较。结果:通过对本地区进行果园气候统计,其中在月平均气温、雨天时间统计中,大概存在2个高峰期、2个低谷期。I级病树中南面Las含量相比北面较高,另6个月差异不大。II级、III级、IV级、V级柑橘树中Las值南面高于北面月数分别为4个月、2个月、3个月、3个月,而北面高于南面的柑橘树Las值月数分别为2个月、5个月、3个月、4个月。通过比较气候对于果园Las含量影响,经表明,Las平均含量和下雨天数、温度相关性不大,经比较,r=-0.061、-0.015,P均>0.05。结论:在对柑橘黄龙病菌动态变化规律进行研究的过程中,主要包含2个高峰、2个低谷,同时气候变化直接影响柑橘黄龙病菌的变化,在做好相关研究的同时能够对黄龙病果园做好检测,并减少损伤。