不同手术取精方式在辅助生殖技术中的临床应用

随着社会经济发展及人们生活压力不断增大,不孕症的发病率也不断增多,这不仅是一种疾病也是目前复杂的社会问题。目前对此主要的治疗方式是体外受精-胚胎移植,临床可以通过外科手术获取精子而进行体外受精,用于后续的辅助生殖技术,提高不孕症夫妻成功受孕的机会,不同的取精方式是否会影响临床效果,对此,本文是介绍不同手术取精方式临床效果、安全性及适应证,以期能为临床快速选择适当取精方式提供有利理论证据。

精子DNA完整性检测及其对人类辅助生殖的意义

精子DNA完整性对临床结局的影响,是辅助生殖领域研究的热点之一。DNA损伤的原因主要包括染色质重组异常、氧自由基损伤和凋亡异常,成熟的精子依靠卵母细胞修复DNA。通常采用精子染色体扩散实验或精子染色质结构分析法检测DNA碎片,作为精液常规检测的重要补充,以评估男性生育力和辅助生殖的临床结局。

精子透明带结合与辅助生殖技术中的精子优选问题

卵胞质内单精子注射技术(ICSI)使严重少弱精子症及梗阻性无精子症患者获得生育其遗传学子代成为可能。但ICSI后受精胚胎的质量和植入率仍不理想且人为选择的精子不能确保其子代的安全。选择何种精子进行ICSI,能否改善胚胎质量,降低子代风险等已成为现今研究的热点。各国学者分别从受精的关键、影响受精的因素以及ICSI治疗不育症的潜在风险等多方面进行研究。

卵巢慢反应患者添加不同剂量HMG的临床结局

观察卵巢功能正常的患者使用黄体期长方案后发生慢反应时添加不同剂量的HMG的临床结局,旨在为慢反应患者添加HMG(human memopausal gonadotropin)剂量的方案提供参考。方法 本次研究在2018.12开始,结束于2021.11,病例采集在广西壮族自治区生殖医院进行,纳入为行体外受精-胚胎移植治疗的334例不孕患者(在促排卵过程中均出现卵巢慢反应),将按照治疗过程中添加HMG剂量不同将全部对象分为两组,其中一组(合计265例)添加HMG≤75单位,将其命名为A组,另外一组(合计69例)添加HMG>75单位且≤150单位,将其命名为B组,调查、汇总两组患者基本资料、实验室指标、妊娠结局。结果 两组患者超促排卵过程比较,两组启动日性激素水平均已达到降调标准,两组启动日的双侧窦卵泡个数,对比无差异(P>0. 05)。Gn 总量比较,A组比B组低(P < 0. 05)。A组HCG日LH水平(1.38±0.79)U/mL比B组高(1.06±0.54)U/mL,P < 0. 05;HCG日E2、孕酮水平、内膜的厚度及类型相比,A组和B组对比无差异(P>0.05);两组患者的受精方式对比,对比无差异(P>0.05)。获卵数、正常受精数、正常卵裂胚胎数和可利用囊胚形成率,A组均高于B组(P < 0. 05);MII卵率、D3优胚率、中重度卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生率、胚胎种植率、临床妊娠率调查结果显示,A组和B组对比无差异(P>0. 05)。结论 在黄体期长方案中,卵巢功能正常的患者在发生慢反应时,添加较低剂量HMG(≤75IU),可获得较好妊娠结局。

大鼠生精细胞分离方法的研究

目的:建立一种简单、有效的哺乳动物睾丸生精细胞分离方法。方法:采用研磨-Percoll法、单一酶-研磨-Percoll法、组合酶法制备成熟期前大鼠睾丸生精细胞,分析比较其细胞总数、分离所需时间和细胞纯度,以及检测细胞培养前后的存活率。结果:组合酶法得到的睾丸生精细胞总数最多、分离所需时间最短;获得的细胞含杂质最少、细胞存活率最高;细胞培养48h后的存活率高,与其他两种分离方法比较有显著性差异(P<0.05)。结论:用组合酶法能在较短时间内获得数量较多的、比较纯化和存活率较高的生精细胞。

两种促排卵方案对多囊卵巢综合征体外受精-胚胎移植治疗结局的对比研究

目的比较体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中促性腺激素释放激素(GnRH)拮抗剂方案、与GnRH激动剂长方案治疗多囊卵巢综合征(PCOS)患者的助孕结局。方法行IVF-ET的PCOS不孕患者118例,其中研究组48例采用GnRH拮抗剂方案,对照组70例采用GnRH激动剂长方案,比较分析两组的助孕结局。结果两组的平均获卵数、卵母细胞成熟率、受精率、卵裂率、优质胚胎率、胚胎种植率、临床妊娠率、卵泡液的IL-1β浓度比较差异均无统计学意义(P>0.05);研究组的促性腺激素(Gn)使用时间和Gn用量明显少于对照组(P<0.05),卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生率和周期取消率低于对照组(P<0.05)。结论 GnRH拮抗剂方案治疗PCOS不孕症能降低OHSS发生风险、减少周期取消率及减少Gn使用时间及其用量,而平均获卵数、受精率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率、种植率均不受影响。

冻融卵裂期胚胎移植中过夜培养对临床妊娠结局的影响

目的探讨冻融卵裂期胚胎移植中过夜培养对临床妊娠结局的影响。方法 2011年12月至2012年12月在我院生殖医疗中心接受玻璃化冷冻的卵裂期胚胎移植患者共237个周期,其中胚胎解冻时间为移植当日128个周期(A组),过夜培养109个周期(B组),比较两组的胚胎种植率、临床妊娠率、流产率。结果 A组胚胎种植率低于B组(P<0.05),而临床妊娠率和流产率与B组,差异无统计学意义(P>0.05)。结论将胚胎提前解冻培养过夜,观察解冻后胚胎的进一步发育情况,可提高胚胎种植率,为临床选择移植胚胎提供有意义的参考。

卵泡黄素化周期与自然排卵周期行冻融胚胎移植的临床结局比较

目的分析比较在卵泡不破裂黄素化(LUF)周期和自然排卵周期中行冻融胚胎移植(FET)的临床结局。方法回顾性分析2013年7月-2015年6月广西壮族自治区南宁市第二人民医院生殖医疗中心1 380个自然周期下FET的临床结局。按卵裂期胚胎和囊胚期胚胎分组,比较174个LUF周期和1 206个自然排卵周期在同样的黄体支持方案下行FET的患者LUF或排卵前1天雌二醇(E2)和促黄体生成激素(LH)、LUF日或排卵日内膜厚度、胚胎生化妊娠率、胚胎种植率、临床妊娠率和早期流产率。结果卵裂期胚胎LUF组的LH([33.78±16.20)mIU/ml]与自然排卵组([39.69±17.18)mIU/ml]比较,差异有统计学意义(P<0.05),卵裂期胚胎LUF组的LH比自然排卵组低。囊胚期胚胎LUF组的LH([32.84±17.91)mIU/ml]与自然排卵组的([40.27±17.28)mIU/ml]比较,差异有统计学意义(P<0.05),囊胚期胚胎LUF组的LH比自然排卵组低。而两组胚胎的LUF组与自然排卵组的内膜厚度、排卵前1天的E2、胚胎生化妊娠率、胚胎种植率、临床妊娠率及早期流产率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 FET周期中,LUF周期在适当黄体支持下可取得和自然排卵周期相似的妊娠结局。

子宫腺肌病合并不孕症行体外授精-胚胎移植前应用GnRH-a的疗效分析

目的探讨子宫腺肌病并不孕患者施行IVF-ET(体外授精-胚胎移植)助孕的合理、有效的治疗方案。方法治疗组32例为子宫腺肌病并不孕患者,IVF助孕前使用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)治疗3～4个月;对照组100例为输卵管因素不孕患者。观察治疗组GnRH-a治疗前后子宫体积的变化,比较两组IVF治疗Gn(促卵泡激素)使用总量、Gn使用天数、获卵数、临床妊娠率、流产率。结果治疗组使用GnRH-a治疗3～4个月后子宫体积较治疗前明显缩小,差异有统计学意义(P<0.01);治疗组Gn使用总量多于对照组,获卵数明显低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01),两组临床妊娠率、流产率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论子宫腺肌病并不孕患者在IVF助孕前使用GnRH-a治疗,其妊娠率与因输卵管因素行IVF助孕的患者相同。GnRH-a能提高子宫腺肌病合并不孕患者行IVF助孕的成功率。

自然排卵周期与促排卵周期宫腔内供精人工授精的妊娠情况比较

目的研究比较在自然排卵周期与促排卵周期中施行宫腔内供精人工授精的妊娠情况。方法对施行宫腔内供精人工授精的1014个自然排卵周期和213个促排卵周期进行回顾分析,比较两组的临床妊娠率和流产率。结果自然排卵组年龄为(30.4±11.4)岁,不孕年限为(5.6±4.5)年;促排卵组年龄为(30.6±12.1)岁,不孕年限为(5.3±4.8)年。两组年龄、不孕年限差异无统计学意义(P>0.05)。自然排卵组临床妊娠率为21.89%,流产率为19.82%;促排卵组临床妊娠率为16.43%,流产率为20%。两组临床妊娠率和流产率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论促排卵治疗下施行供精人工授精,不能提高临床妊娠率,但可以获得与自然排卵周期相同的临床妊娠率,若女方有自然排卵,不必进行促排卵治疗。

受精时机与人工授精妊娠的关系

目的探讨受精时机与人工授精妊娠率、出生婴儿性别的关系。方法回顾性分析行供精人工授精1227周期656例及单胎分娩的200例婴儿的临床资料,比较不同受精时间行人工授精的妊娠率、流产率、出生婴性别的比例,比较左侧卵巢排卵与右侧卵巢排卵婴儿性别比例。结果人工授精在排卵前后24 h内的周期妊娠率最高,在排卵前48 h以上施行者,妊娠率明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),左侧卵巢排卵与右卵巢排卵及排卵前与排卵后行人工授精的婴儿性别比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论排卵前后24 h是人工授精最佳时机,排卵前或排卵后行人工授精及左或右卵巢排卵对出生的婴儿性别无预测意义。

短时受精失败早补救的临床应用

目的了解短时受精早补救性卵胞质内单精子显微受精(ICSI)与晚补救性ICSI对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响。方法回顾性分析自2010年6月至2012年6月在南宁市第二人民医院生殖中心实施体外受精-胚胎移植发生完全性受精失败的97例患者共97个周期,分析受精后20 h进行补救(晚补救)的30个周期共30例患者(A组),受精后6 h进行补救(早补救)的67个周期共67例患者(B组),统计两组的平均获卵数、正常受精率、多精受精率、优质胚胎率、冷冻胚胎率及临床妊娠率。结果早期补救性(B组)与晚补救(A组)的ICSI平均获卵数(12.10 vs 10.10,P>0.05)、正常受精率(84.73%vs 79.92%)、冷冻胚胎率(24.90%vs 24.10%)相比,差异均无统计学意义(χ2=1.754,0.923,0.173,P>0.05);但多精受精率(2.53%vs 0.00%)、优质胚胎率(40.72%vs 5.64%)、临床妊娠率(40.30%vs 10.00%),早期补救性(B组)显著高于晚补救组(A组),差异均有统计学意义(χ2=2.434,4.560,8.905,P<0.05)。结论短时受精早补救可以获得与常规IVF相似的临床结局,可以作为受精失败补救措施的最佳选择。

少弱精子症、无精子症助孕治疗前遗传学检查的临床意义

目的探讨辅助生殖技术(ART)治疗前遗传学检查的适应证。方法将420例患者分为少弱精子症、极少弱精子症、梗阻性无精子症、非梗阻性无精子症4组进行外周血淋巴细胞培养及G显带染色体核型分析。结果少弱精子症、无精子症患者的染色体异常率为13.6%(57/420),其中性染色体异常占68.4%(39/57),常染色体异常占33.3%(19/57)。而极度少弱精子症及非梗阻性无精子症患者染色体异常率分别为10.8%和21.7%。结论少弱精子症、无精子症患者,尤其是极度少弱精子症及非梗阻性无精子症患者染色体异常率较高,在ART治疗前进行染色体核型分析是必要的。

BrdU标记在大鼠生精细胞体外培养中的应用

目的探讨应用5-溴-2-脱氧尿苷(5-bromo-2-deoxy-uridine,BrdU)标记检测大鼠生精细胞体外的分化、发育情况。方法采用BrdU体内标记生精细胞的DNA,免疫细胞化学法跟踪观察大鼠生精细胞在体外培养中的分化、发育情况。结果培养前在体内标记BrdU的细胞为初级精母细胞,经培养后在BrdU标记的细胞中出现早期精子细胞。结论大鼠生精细胞体外培养过程中,应用BrdU标记能检测生精细胞的分化、发育情况。

卵丘细胞线粒体移植对年老小鼠早期胚胎发育的影响

目的探讨线粒体对早期胚胎发育的影响。方法采用昆明小鼠为动物模型,以其卵丘颗粒细胞、卵母细胞、受精卵为试验材料,提取年老小鼠卵丘细胞线粒体,将其注入年老小鼠卵母细胞和体内冲出的受精卵中。结果与结论通过卵丘细胞线粒体移植,给卵子补充了一定量的线粒体,可以部分弥补卵母细胞因变异引起的功能不足。为第2次减数分裂、受精卵和胚胎发育提供足够的能量,明显改善了胚胎的质量。

18个周期体外受精-胚胎移植治疗不孕症效果报告

目的 :回顾性总结我院 18个周期体外受精 -胚胎移植 (In Vitro fertilization and embryo transfer,IVF- ET)的临床应用经验。方法 :对 18对 (18个周期 )不孕夫妇 ,采用 Gn RH- α/ FSH/ HCG超排卵方案治疗。结果 :18个周期移植胚胎 6 9个 ,平均每周期移植 3.83个 ,获 4例临床妊娠 ,临床妊娠率 2 2 .2 % ,其中 2例已中期妊娠 ,2例早期妊娠。结论 :IVF- ET是治疗不孕症的一种有效手段 ,并根据患者年龄、体重、卵巢功能情况、子宫内膜等因素 ,选择长方案或短方案和应用不同药物剂量 ,以及随着技术中各个环节的进一步提高和完善 。

单细胞转录组测序分析人类胚胎发育阻滞的潜在机制

目的探讨胚胎发育阻滞的分子机制,为提高辅助生殖成功率提供新思路。方法单细胞转录组测序技术研究发育阻滞胚胎(包括体外受精和胞质内单精子注射过程)及对照组的转录组情况,利用加权基因共表达网络分析(WGCNA)等生物信息学手段分析与胚胎阻滞相关的信号通路和关键基因。结果阻滞胚胎中与细胞分裂、细胞周期等相关的信号通路表达异常。与ICSI组相比,IVF组阻滞胚胎的细胞骨架、氧化磷酸化等通路表达异常。结论通过单细胞转录组测序技术分析阻滞胚胎转录组的结果说明细胞分裂、周期、代谢等通路可能影响胚胎正常发育,ICSI过程影响了线粒体功能、结构的变化。

冻融后2-细胞胚胎发育至囊胚建立人胚胎干细胞系

目的用解冻后废弃胚胎及部分患者捐献的冷冻胚胎建立胚胎干细胞系。方法用程序解冻法解冻2001-2007年来我生殖中心就诊的患者剩余冷冻胚胎,培养至囊胚,Pronase酶去除透明带后,全囊胚置于小鼠饲养层(MEF)中培养获得原代细胞,机械法结合Ⅳ型胶原酶消化法传代,并利用细胞形态观察、免疫荧光染色、核型分析、畸胎瘤切片胚层分析方法对所建胚胎干细胞系进行鉴定。结果序贯培养23枚废弃胚胎,有4枚培养到囊胚阶段;去除透明带后有2枚在MEF上贴壁生长,但只有1株成功扩增稳定传代至第80代;细胞集落呈典型的鸟巢状,有稳定的46XY核型;细胞系表达SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60和TRA-1-81抗原,RT-PCR检测有Nanog、Oct-4、Sox2等基因表达;同时在体外能分化为内、中、外3个胚层。结论解冻后2～3细胞Ⅲ～Ⅳ级的废弃胚胎仍具有发育形成囊胚的潜能,并利用所得囊胚采用酶去透明带全胚培养法能建立稳定增殖的hESC细胞系。