IgA缺乏型过敏性输血反应及防治策略

IgA缺乏型过敏性输血反应(allergic transfusion reactions,ATRs)常发生于产生抗-IgA的IgA缺乏症患者,当这些患者输注含有IgA的血液产品时,可导致过敏性输血反应,严重者可致死。我们对IgA缺乏症(immunoglobulin A deficiency,IgAD)的临床表现及影响因素,以及IgA缺乏导致的过敏性输血反应发病机制、实验室检测和防治策略进行综述,从而提高医务工作者对IgA缺乏型过敏性输血反应的认识和防范意识。

南宁壮族人群17个STR基因座遗传多态性研究

目的探讨17个短串联重复序列（STR）基因座在南宁壮族人群中的等位基因频率分布及群体遗传学参数。方法应用PowerPlex 18D System和ABI3130遗传分析仪,对596名南宁壮族、无关个体的血DNA进行多态性研究。结果在南宁壮族人群中,17个基因座的基因型分布经χ^2检验符合Hardy-Weinberg平衡,个体识别概率0.781 0-0.977 7,三联非父排除率0.297 8-0.783 8,基因座偶合率0.022 3-0.219 0,多态性信息总量为0.540 1-0.879 1,17个基因座累积个体识别能力〉0.999999999999。结论 PowerPlex 18D System在南宁壮族人群的个体识别和亲权鉴定中具有较高的应用价值。

南宁地区人群血小板抗原HPA1—16bw基因分布频率的研究

目的研究南宁地区人类血小板抗原基因分布频率,为临床同种免疫血小板减少症患者提供诊断依据和HPA相容的成分血。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)对南宁地区1 500名无血缘关系的成年人做HPA1—16bw基因分型研究。在包含引物混合液的96孔反应板中,按照相同的循环条件扩增PCR产物。结果每份血液标本均可在4 h内获得分型结果。在16个HPA系统中,HPA-15基因型杂合频率最高,HPA15a/15a,HPA15a/15b和HPA15b/15b的频率分别为0.252 7,0.500 7和0.246 7。HPA-3的杂合程度仅次之,HPA3a/3a,HPA3a/3b和HPA3b/3b的频率分别为0.284 0,0.508 0和0.208 0。其余14个HPA系统均以a/a纯合子为主,其a基因频率范围为0.916 7—0.999 3。除了HPA-3b/3b和HPA-15b/15b的纯合子以外,还检测出了HPA-2b/2b5例和HPA-1b/1b1例。HPA-7bw至-14bw,-16bw的a/a等位基因纯合率为1.000 0。结论在临床工作中我们仍须警惕可能由HPA-1,-2,-3,-5,-6和-15同种抗体引起的疾病,HPA基因分型将有助于更好地诊断同种免疫血小板减少症和建立相容的HPA血小板供者库,提供更有效的血小板输注方法。

南宁地区疑难输血患者红细胞不规则抗体的分析

目的对南宁地区疑难输血患者中红细胞不规则抗体检出情况进行分析,以了解本地区患者红细胞不规则抗体的发生情况。方法对2008-2018年间南宁市各医院送检的疑难配血案例标本1 463例,应用盐水法、凝聚胺法、抗球蛋白法、微柱凝集法、酶法、吸收放散法检测红细胞不规则抗体。结果共鉴定确认红细胞不规则抗体335例,发生率为22.90%(335/1463)。主要涉及6个血型系统:Rh系统55.52%(186/335),Kidd系统2.69%(9/335),MNS系统18.21%(61/335),Lewis系统4.48%(15/335),P系统5.07%(17/335),Rh合并Lewis系统0.30%(1/335),Rh合并P系统0.60%(2/335),Rh合并MNS系统5.97%(20/335),Rh合并Kidd系统5.67%(19/335),Rh、MNS合并Kidd系统1.19%(4/335),Rh、Kidd合并Duffy系统0.30%(1/335)。结论从南宁地区疑难输血患者红细胞不规则抗体检出情况分布看,以Rh和MNS血型系统为主,以Rh合并MNS血型系统的不规则抗体比率最高,尤其是Rh系统和抗-Mur同时存在多见。

南宁地区献血人群ABO亚型的分子遗传学研究

目的调查研究南宁地区无偿献血人群ABO亚型的分布特点及分子遗传学特征。方法收集2017年3月至2018年12月南宁地区无偿献血者血液样本,采用试管法对微板法筛查出的正反定型不一致的样本进一步做血型血清学分析,并进行亚型确认。对亚型样本进行基因克隆测序,测序结果用软件比对分析后,确定其基因型。结果从2017年3月至2018年12月南宁地区无偿献血者225587例血液样本中检出ABO亚型41例,其中A亚型6例、B亚型25例、AB亚型10例。对41例ABO亚型样本进行克隆测序分析,共检测出3个常见O等位基因(O01、O04、O13);3个常见A等位基因(A101、A102、Ael08)以及一个新的A等位基因;4个常见B等位基因(B101、B108、B305、Bw11)以及一个新的B等位基因。结论ABO亚型分布存在不均衡性和地域性差异。南宁地区献血人群B亚型出现的频率高于A亚型,最常见的亚型是A102和Bw11。

南宁地区成人及儿童ITP患者体内血小板自身抗体特异性分布的研究

目的研究血小板膜糖蛋白特异性自身抗体在成人及儿童原发免疫性血小板减少症(ITP)患者中分布的异同。方法应用酶联免疫吸附试验(PAKAUTO试剂盒)检测ITP组(83例)及非ITP组(58例)患者血小板自身抗体,并分析成人组ITP(46例),儿童组ITP(37例)的抗GPⅡb/Ⅲa、抗GPⅠb/Ⅸ及抗GPⅠa/Ⅱa自身抗体特异性分布规律。结果 ITP组血小板自身抗体阳性率为66.27%,高于非ITP组的6.90%,差异有统计学意义差异有统计学意义(P<0.05)。成人组女性ITP患者占60.87%,儿童组女性ITP患儿占64.86%,差异无统计学意义(P>0.05),但两组女性发病率均高于男性,差异有统计学意义(P<0.05)。成人组ITP患者血小板自身抗体阳性率为63.04%,儿童组ITP患儿抗体阳性率为70.27%,差异无统计学意义(P>0.05);且成人组与儿童组ITP患者血小板自身抗体特异性分布差异无统计学意义(P>0.05),均以抗GPⅡb/Ⅲa和抗GPⅠb/Ⅸ抗体多见。结论血小板自身抗体检测对ITP诊断、鉴别诊断及治疗均有重要的参考价值,GPⅠa/Ⅱa抗体介导的ITP很值得深入研究。

分子免疫遗传学在输血医学中的应用

随着输血技术及相关领域突飞猛进的发展,输血医学已成为临床医学中不可或缺的重要组成部分,这一学科在现代医学中备受关注并得到了重新认识。基因革命时代的到来,使得输血医学中的配血方式在慢慢发生改变。本文就以DNA检测技术为基础的分子免疫遗传学在输血医学中的应用进行综述。

免疫血液学进展和在现代输血医学及血液学中的应用研讨会通知

各血液中心、中心血站、医院输血科及血库： 本次会议被列入2016年度国家级医学继续教育项目-“输血检测技术专题研讨班”【项目编号：2016-12-07-280（国）】；广西第三批自治区级继续医学教育项目“免疫血液学进展和在现代输血医学及血液学中的应用学习班”【项目编号：2016-03-10-823（广西）】。

CD36 c.C275T基因突变导致CD36缺失的研究

目的研究在广西CD36缺失个体中检测到的CD36基因突变c.C275T,是否可导致CD36缺失和在人群中的发生率。方法采用血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定试验(MAIPA)和流式细胞技术检测确定广西地区1位汉族男性个体(XXX)的CD36表型,应用CD36外显子测序、cDNA克隆测序对其CD36缺失的分子基础展开研究,构建真核表达细胞株及应用蛋白免疫印迹试验(Western blot)验证所检测到的CD36突变基因对CD36表达的影响。应用所建立的针对该突变基因的DNA PCR-SSP基因分型方法,在随机的无血缘关系的1026名广西地区人群中进行人群分布调查。结果经MAIPA和流式细胞技术检测鉴定XXX的CD36表型为Ⅱ型CD36缺失。CD36外显子测序发现其具有CD36 c.C275T(p.Thr92Met)突变,为突变杂合子,CD36 cDNA克隆测序发现该个体具有c.275C>T(p.Thr92Met)突变型和CD36野生型2种CD36 mRNA转录本。通过建立的真核表达细胞株及Western blot验证结果显示CD36 c.275C>T异常转录本可导致CD36表达缺失。该基因突变在人群的发生率研究显示,在随机的1026名广西人群中,CD36 c.275C>T突变的人群发生率为0。结论CD36基因突变c.275C>T(p.Thr92Met)可导致CD36缺失,并初步阐明了其导致CD36缺失的分子基础及在广西地区人群中的分布特征,为了解中国人群CD36缺失的分子基础和特征提供了实验和理论依据。

广西莪术水提取物对小鼠的急性毒性反应研究

目的:观察广西莪术水提取物对小鼠的急性毒性反应。方法:采用灌胃法给予小鼠1日内最大浓度及最大体积广西莪术水提取物,观察及检测小鼠给药后7d的情况。结果:实验小鼠最大耐受药量为原生药材224g生药/Kg,为成人临床用药最大量的794.3倍,未出现任何毒性反应。结论:广西莪术入水煎剂用药安全无毒性。

鳖甲的化学成分和药理作用研究概况

通过对中药鳖甲的化学成分和药理作用研究情况进行综述,期对鳖甲进行研究、开发和利用的学者提供参考。目前,国内对于鳖甲药理作用研究主要集中在免疫促进以及抗肝、肺纤维化方面。实验结果显示,鳖甲在提高机体免疫力以及抗肝纤维化和肺纤维化方面有确切可靠的疗效,但是这与传统中医药对鳖甲用于治疗阴虚发热、劳热骨蒸、虚风内动、经闭、瘕等症的认识以及其用法上有一定的区别。所以,对于鳖甲作用于阴虚发热、劳热骨蒸、虚风内动、经闭、瘕等症的药效学还需要深入研究,从现代药理学方面探讨其传统药用的机制,以便更好地发挥其治疗作用。

多重PCR—SSP技术应用于HPA-1-17bw基因分型研究和广西壮族人群HPA多态性的分布

目的建立应用于HPA-1—17bw基因分型的多重聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）技术，对广西壮族人群HPA名态性分布进行调查。方法设计多种HPA序列特异性引物的组合，在1个PCR反应体系中用时扩增多个HPA基因，根据扩增片断的有无和大小，指定相应的HPA基因型，并以17例国际合作研究项目提供的HPA对比DNA配组标本，以及100例已知HPA型的血小板供者的DNA标本作验证。使用验证后的技术对2659例无血缘关系的广西牡成人群展开HPA-1—17bw的基因分型和抗原多态性研究。结果建立了由16种PCR引物混合物，其中有6种多重PCR多重PER引物混合液组成的PCR—SSP反应体系，可用于HPA-1～17bw等位基因的检测。以HPA参比DNA配组标本，以及已知HPA型的供者的DNA标本的检测作验证，HPA分型结果完全一致；在2659名广西壮族人群中各HPA等位基因频率分布为：HPA—1α和-16为0．9915和0．0085，HPA．2a和．26为0．9569和0．0431，HPA-3α和-3b为0．5122和0．4878，HPA-5α和-56为0．9850和0．0150。HPA．6a和-66为0．9851和0．0149，HPA-15α和-15b为0．5256和0．4744；HPA-4、HPA-7-14bw、HPA-16—17bw只有a／a的纯合子；HPA-2—3、HPA，6船以及HPA．15均存在a／a和b／b纯合子基因型个体。结论多重PCR-SSP技术应用于HPA基因分型减少了PCR扩增反应数量，节省了人力、物力，HPA分型系统性强，可用于大量标本的HPA-1—17bw基因分型等研究和筛查工作；应用该方法研究证明广西壮族人群HPA多态性分布具有民族特征，有助于对壮族人群血小板免疫学特点的了解。

广西地区汉、壮和瑶族人群CD36缺失结构实验分析和特征研究

目的建立CD36缺失结构的试验鉴定方法,调查广西地区汉、壮、瑶族人群CD36缺失频率及分布特征。方法建立血小板流式细胞荧光免疫检测试验(PIFT-FC)对广西地区4 621名无血缘关系的汉、壮、瑶等民族献血者血小板CD36的表达作筛查,以血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定试验(MAIPA)对初筛CD36缺失者复检,以单核细胞流式细胞荧光免疫检测试验(MIFT-FC)检测CD36缺失者的单核细胞CD36的表达,对CD36缺失型个体作缺失型的亚型分型及CD36缺失结构的研究。结果 PIFT-FC和MAIPA筛查出广西汉、壮、瑶族个体CD36的总体缺失率是4.13%(191/4 621),其中汉族人群的缺失率为3.59%(109/3 036)、壮族为5.76%(80/1389)、瑶族为2.38%(2/84)。对其中117名CD36缺失个体分型检测:Ⅰ型CD36缺失的总体比例为41.03%(48/117),分别是汉族人群39.19%(29/74)、壮族43.90%(18/41)、瑶族50%(1/2);Ⅱ型CD36缺失的总体比例58.97%(69/117),分别是汉族人群60.81%(45/74)、壮族56.10%(23/41)、瑶族50%(1/2)。结论成功建立PIFT-FC、MAIPA和MIFT-FC试验;广西汉、壮、瑶民族人群间的CD36缺失结构有差异,壮族人群CD36缺失率较高,显示出其民族特征。

造血干细胞移植术后抗-CD36抗体介导的血小板输注无效症和相关病例的实验研究

目的:对造血干细胞移植术后由抗-CD36抗体介导血小板输注无效症和相关病例进行实验研究,对患者和造血干细胞供者的CD36表型和CD36基因,以及相关抗体的特征进行分析和鉴定,探讨患者的血小板输注治疗效果。方法:采用流式细胞术检测患者及造血干细胞供者CD36在血小板及单核细胞上的表达;采用本实验室建立的快速血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术(fast monoclonal antibody-specific immobilization of platelet antigen,F-MAIPA)鉴定患者血清中的血小板抗体;采用测序(polymerase chain reaction sequence-based typing,PCRSBT)方法分析患者及供者CD36基因序列及HPA序列;应用STR-PCR(short tandem repeat polymerase chain reaction,STR-PCR)技术监测患者植入的证据。从CD36缺失血小板库中挑选CD36表达缺失的供者血小板给予患者输注,并监测其血小板计数。结果:造血干细胞供者为CD36+,而患者为I型CD36缺失者。患者移植后血清中存在抗-CD36抗体并排除HLA及HPA相关抗体;患者CD36外显子测序提示为1个新的CD36突变基因,即CD36Exon 6-1G>C纯合子(突变位于剪切位点)突变基因所致的CD36缺失。移植后18 d患者的STR位点、HPA以及CD36型别已完全转化为供者型别(完全嵌合),移植后96 d患者血小板、单个核细胞上已有CD36表达。给该患者输注CD36缺失血小板后血小板计数明显提高。结论:对造血干细胞移植术后由抗-CD36抗体引起的输血小板无效症,须对CD36在移植中的同种免疫反应给予足够重视。为了确保血小板输注有效,对CD36缺失患者需给予CD36缺失血小板输注。

抗-CD36介导血小板输注无效的实验研究——附4例病例报告

目的对CD36(GPⅣ)同种抗体介导血小板输注无效(PTR)的4例中国广西病例作确诊试验。方法应用血小板流式细胞荧光免疫检测技术(PIFT-FC)和血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定试验(MAIPA)检测及鉴定4名临床PTR患者血清中的抗-HPA和抗-CD36;以PIFT-FC试验和单核细胞检测流式细胞荧光免疫检测技术(MIFT-FC)检测CD36抗原在患者血小板及单核细胞上的表达情况和作CD36缺失的表现型分型。对患者CD36作基因序列分析和以DNA为基础的PCR-SSP技术鉴定并确认CD36基因突变点,以证实患者CD36的缺失。结果 4名PTR患者体内都含抗-CD36且均为CD36Ⅰ型缺失者,患者CD36基因检测分别为1例380C>T、2例329-330 del AC和1例1156C>T基因突变。结论确诊4例PTR均为抗-CD36介导;提示在临床遇到PTR病例时,鉴于中国人群有较高的CD36缺失率特征,除考虑HPA及HLA等的免疫因素外,应对抗-CD36介导的同种免疫反应而产生的血小板免疫异常予以重视,并给予针对性的诊断和治疗。

南宁地区壮族人群ABO和Rh血型分布调查与分析

目的通过调查南宁地区壮族人群ABO和Rh血型的分布情况,指导本地区科学地进行无偿献血招募及合理储存血液。方法对2 052份南宁地区壮族人群的血样进行ABO和Rh血型鉴定,采用χ2检验是否符合Hardy-Weinberg平衡法则,并与其他地区、民族的分布特征相比较。结果南宁地区壮族人群ABO血型分布特征为O>B>A>AB,O型比例最高(46.78%),AB型比例最低(4.34%),A、B、O基因频率分别为0.131 9、0.181 5、0.686 6,血型分布符合Hardy-Weinberg平衡法则;RhD阳性比例为99.90%,阴性比例为0.10%,且低于汉族人群;未发现表型为ccdE、CcdE、CCdee、CCdE、CCDEE和ccDee。结论南宁地区壮族人群ABO和Rh血型分布保留着自身独有的特征,极低的RhD阴性比例将给长期反复输血的患者带来严重的输血困难。

广西壮族人群HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1高分辨等位基因多态性和单倍型的研究

目的:分析广西壮族人群人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1等位基因和单倍型的特点。方法:采用多聚酶链式反应-基于测序的分型技术(polymerase chain reaction-sequence based typing,PCR-SBT),对广西地区350名壮族非亲缘个体进行HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1测序分析,使用Arlequin软件(3.5.2.2)计算HLA等位基因频率、单倍型频率,使用MEGA v6.0软件构建系统发生树和用SPSS软件做主成分分析。结果:该人群5个位点,只有HLA-A和DRB1位点的等位基因分布偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.05)。总共检出19种HLA-A等位基因,42种HLA-B等位基因,22种HLA-C等位基因,25种HLA-DRB1等位基因和15种HLA-DQB1等位基因。等位基因频率最高的分别是A*11:01(28.57%)、B*46:01(14.00%)、C*01:02(18.43%)、DRB1*16:02(15.71%)和DQB1*05:02(35.00%),最常见的5位点单倍型是A*33:03-C*03:02-B*58:01-DRB1*03:01-DQB1*02:01(6.86%),系统发生树结果表明该人群与南方汉族人群亲缘关系较近。结论:广西壮族人群HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1等位基因和单倍型有较高的遗传多态性。

南宁市无偿献血人群Rh血型表型分布调查

目的通过调查南宁市无偿献血人群Rh血型分布情况,了解不同表型的比例,为建立Rh血型表型数据库提供依据。方法对南宁市无偿献血者28 013名进行Rh血型系统表型检测,计算出各血型的分布比例,并建立Rh血型表型数据库。结果CCDee比例最高,其后依次为CcDEe和CcDee;Rh(D)阴性73人,占0.26%。结论建立Rh血型表型数据库对保证合理计划用血及应急供血具有重要的临床意义。

南宁地区HLA、HPA已知基因型血小板供者资料库的设计及建立

目的设计和建立适合南宁地区人群的HLA、HPA已知基因型血小板供者资料库,为免疫性PTR和血小板减少症患者的治疗提供保障。方法以4 243名无血缘关系的南宁地区健康供者为对象,研究和分析南宁地区人群HPA基因多态性,以7 001名南宁地区骨髓库供者的HLA基因分型检测数据,分析这些供者的HLA-A,-B基因多态性,并以此为数据基础,预测所建立血小板供者资料库的库容。以预测的最佳库容为设计目标,建立南宁地区HLA、HPA已知型血小板供者资料库。供者的HPA-1—17w,HLA-A,-B基因分别使用PCR-SSP、PCR-SSO等基因分型方法。结果根据对南宁地区人群HPA-1—17w(n=4 243)和HLA-A,-B(n=7 001)基因多态性研究分析,计算推导得到当血小板供者资料库库容为283人时,约有95%的患者能在该库中找到≥1名HPA-1—17w基因型全匹配的供者;当血小板供者资料库库容为819人时,约有80%的患者能在该库中找到≥1名HLA-A,-B CREG全匹配的供者;当血小板供者资料库库容为1 781人时,约有90%的患者能在该库中找到≥1名HLA-A,-B CREG全匹配的供者,如果需要考虑ABO同型血小板输注时,则按人群的ABO血型分布频率将该库容量做相应测算和列出各自库容量的变化。目前所建立的南宁地区HLA、HPA已知基因型血小板供者资料库,包含1 072名献血者数据,按本研究设计的最佳库容量预测方案评估,在不考虑ABO同型的情况下,约98. 58%患者能在该资料库中找到≥1名HPA基因型全匹配的供者,约83. 49%患者能在该血小板供者资料库中找到≥1名HLA-A,-B CREG全匹配的供者。结论本研究为血小板抗原和/或抗原基因已知型血小板供者资料库的建立提供了设计思路,并已建立了适合南宁地区人群的含1 072名HLA和HPA献血者已知基因型的血小板供者资料库。