山西产柴胡中皂苷类成分HPLC指纹图谱初步研究

目的:建立不同来源山西产柴胡中皂苷类成分HPLC指纹图谱分析方法,为科学评价与有效控制柴胡质量提供参考。方法:采用反相高效液相色谱法测定了10个不同来源山西产柴胡样品。结果:建立了HPLC指纹图谱共有模式,并对其进行了相似度比较。结论:山西产柴胡中皂苷类成分均得到很好分离,分析方法可靠,为全面控制柴胡药材的质量提供了依据。

脂质代谢异常与胆固醇结石相关性研究进展

胆结石是一种常见病、多发病。流行病学调查显示,随着人口的老龄化,肥胖、糖尿病和高血脂发病率的升高,胆固醇结石的发病率也有逐年升高的趋势。研究发现,胆固醇结石的发生与全身脂质代谢异常尤其是胆固醇酯代谢异常有着密切的关系。本文就胆固醇结石和脂质代谢紊乱的关系做一综述。

miR-21靶向调控Bcl-2对肠道上皮HT29细胞凋亡的影响及机制研究

目的:探究微小型RNA-21(microRNA-21,miR-21)对肠道上皮HT29细胞凋亡的影响及作用机制。方法:利用RT-PCR检测B细胞淋巴瘤/白血病基因-2(Bcl-2)与miR-21在结肠组织和HT29细胞系中的mRNA水平。利用生物信息预测Bcl-2与miR-21的结合位点,通过荧光素酶报告进一步验证。将细胞分为HT29组、miR-21 inhibitor组、Bcl-2 siRNA(si-Bcl-2)组和si-Bcl-2+miR-21 inhibitor组,miR-21 inhibitor组和si-Bcl-2组分别或同时转染经TNF-α预处理的HT29细胞后,用MTT检测细胞存活情况,流式检测细胞凋亡情况,免疫印迹检测Bcl-2、增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki67、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达情况,ELISA检测炎症细胞因子IL-6、IL-1β和IL-8的表达水平。结果:溃疡性结肠炎组织和TNF-α处理后的HT29细胞中miR-21 mRNA水平显著升高,Bcl-2 mRNA水平显著降低。miR-21 inhibitor可显著降低miR-21 mRNA水平,升高Bcl-2 mRNA水平。miR-21mimic可显著降低野生型Bcl-2质粒(Bcl-2 wt)的荧光素酶活性。与HT29组比较,miR-21 inhibitor组中Bcl-2表达显著增加,si-Bcl-2组中Bcl-2表达显著减少。同时,与HT29组比较,miR-21 inhibitor组细胞存活率及PCNA、Ki67的表达水平显著上升,细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9的表达水平显著降低,si-Bcl-2组细胞存活率及PCNA、Ki67的表达水平显著下降,细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9的表达水平显著上升。与miR-21 inhibitor组比较,si-Bcl-2+miR-21 inhibitor组细胞存活率及PCNA、Ki67的表达水平显著下降,细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9的表达水平显著上升。此外,与HT29组比较,miR-21 inhibitor组中IL-6、IL-1β和IL-8的浓度显著降低,si-Bcl-2组中IL-6、IL-1β和IL-8的浓度显著升高。与miR-21 inhibitor组比较,si-Bcl-2+miR-21 inhibitor组中IL-6、IL-1β和IL-8的浓度显著升高。结论:miR-21通过靶向下调Bcl-2促进肠道上皮HT29细胞的凋亡。

清热解毒方和凉血活血方防治大鼠术后腹腔粘连的组织形态学研究

目的:观察清热解毒方和凉血活血方对大鼠术后腹腔粘连的防治效果并探索其机制。方法:健康雄性Wistar大鼠120只随机分为6组,采用十二指肠钳夹法制作大鼠腹腔粘连模型,分别治疗7d并记录生存情况。术后14天时处死剖验并对粘连情况评分,取粘连组织进行HE染色和苦味酸-天狼星红染色,镜下观察并摄片,对粘连组织纤维化、炎症、血管增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量进行评价。结果:4个治疗组的生存情况与模型组无明显差异(P>0.05)。清热解毒方组术后腹腔粘连范围、强度评分,纤维化评分,血管增殖评分,Ⅰ、Ⅲ型胶原含量均低于其他治疗组(P<0.05)。炎症评分无统计学差异(P>0.05),结论:清热解毒方、凉血活血方均有良好的抗粘连效果,以清热解毒方为优;抗粘连机理可能与中药的抗炎作用,促进术后肠蠕动恢复,减轻炎症渗出及纤维蛋白基质沉积有关。

急性胰腺炎治疗的实验研究

严重急性胰腺炎(SAP)由于全身炎性反应综合征导致多器官衰竭而引起较高的病死率。至今,除了支持性重症监护疗法之外还没有治疗SAP的有效方法。为降低病死率,一些新的药物应用于实验性胰腺炎。最常用于实验研究的急性胰腺炎(AP)动物模型有三种,即蛙皮素、牛磺酸钠和无胆碱而乙硫氨酸充足的饮食(CDE)引起的水肿性或出血性胰腺炎。本文依据不同模型复制方法,对近年来实验治疗或取得的结果进行综述。许多方法包括蛋白酶抑制剂,抗炎性因子治疗,超氧化物治疗,核因子κB抑制剂治疗,血管加压素治疗,高压氧治疗等,已经显示出抗胰腺炎的保护作用。

马鞭草苷通过激活GPR18受体对脓毒症诱导的急性肺损伤的保护作用及机制探究

目的 探讨马鞭草苷(Verbenalin)是否对脓毒症诱导的急性肺损伤具有保护作用及潜在机制。方法 实验动物采用C57BL/6小鼠,应用体内盲肠结扎穿孔(CLP)手术建立脓毒症急性肺损伤模型,将30只小鼠随机分为三组,分别为:对照组(Cont组)、模型组(CLP组)和马鞭草苷治疗组(CLP+Verbenalin组);体外采用脂多糖(LPS)刺激小鼠单核细胞RAW264.7细胞构建巨噬细胞M1极化模型;采用HE染色法检测肺组织的病理变化;采用流式细胞仪检测肺组织中巨噬细胞的M1极化;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)细胞上清及外周血中IL-1β、TNF-α和IL-6的含量;采用蛋白印迹法(Western blotting)法检测目的蛋白的表达。结果 在体内,与对照组比较,模型组出现肺泡壁增厚、炎症细胞浸润数目明显增加的改变;同时肺组织中M1型巨噬细胞的比例增加;与模型组相比,马鞭草苷可以显著改善肺组织病理损伤和外周血中IL-1β、TNF-α和IL-6的分泌及抑制巨噬细胞的M1极化。在体外,LPS刺激诱导IL-1β、TNF-α和IL-6的分泌增加,以及促进NF-κB信号通路活化;马鞭草苷干预后,炎症因子的分泌和P-NF-κB的磷酸化水平均显著降低;同时,给予O1918预处理抑制G蛋白偶联受体18(GRP18)后,马鞭草苷的抑制M1极化的作用减弱。结论 马鞭草苷可以通过激活GPR18受体抑制NF-κB信号通路的活化,进而降低巨噬细胞M1极化和减轻脓毒症诱导的肺损伤。

磷脂酶A_2对大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞NF-κB表达的影响

目的:研究磷脂酶A(2PLA2)及含有PLA2的急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)大鼠血清对原代大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞的损伤作用及对NF-κB表达的影响。方法:对大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞进行分离纯化和原代培养,分别加入PLA2及含有PLA2的AHNP大鼠血清,并设PLA2抑制剂对照组,各组均孵育4h,离心收集细胞,破碎细胞核提取核蛋白,ELISA法测定NF-κB活性;测定培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,对培养细胞进行透射电镜检查。结果:PLA2及AHNP大鼠血清可使Ⅱ型肺泡上皮细胞培养上清液中LDH活性及Ⅱ型肺泡上皮细胞NF-κB活性显著增高,透射电镜检查显示Ⅱ型肺泡上皮细胞受损严重。盐酸阿的平可显著抑制PLA2对Ⅱ型肺泡上皮细胞的损伤作用,降低LDH活性,抑制NF-κB的表达。结论:PLA2对Ⅱ型肺泡上皮细胞的损伤作用是造成胰腺炎肺损伤的重要因素,还与其激活NF-κB的表达有关。

厌氧灵体外抑制某些细胞因子的分泌及对小肠血流量的影响

本实验采用组织血流量计法，对正常和感染的ＳＤ大鼠末端回肠，进行了肠粘膜下血流量的测定，以观察厌氧灵对小肠血流量的影响。为了明确厌氧灵对内毒素体外诱生的单核／巨噬细胞分泌细胞因子ＴＮＦ、ＩＬ—１、ＩＬ—６的影响，采用细胞培养技术，分别观察了厌氧灵、氢化可的松对人外周血单核细胞及小鼠腹腔内巨噬细胞培养上清液由内毒素刺激的ＴＮＦ、ＩＬ—１、ＩＬ—６的诱生作用。实验结果表明，腹膜炎大鼠的肠血流量（５６．１５±７．６６ｍｌ／ｍｉｎ／１００ｇ）较正常大鼠（７１．１６±６．１９ｍｌ／ｍｉｎ／１００ｇ）明显降低（Ｐ＜０．０１）；对于正常大鼠，投予厌氧灵后６０、９０分钟的肠血流量（９４．２６±１３．０２ｍｌ／ｍｉｎ／１００ｇ，８５．７４±５．５８ｍｌ／ｍｉｎ／１００ｇ）与投药前生理盐水、先锋Ⅳ、灭滴灵比较均显著升高（ｐ＜０．０５）；对于腹膜炎大鼠，投予厌氧灵后，６０、９０、１２０分钟的肠血流量（７４．８５±１７．５３ｍｌ／ｍｉｎ／１００ｇ，８２．ｌｌ±１２．５３ｍｌ／ｍｉｎ／１００ｇ，６４．８９±６．７７ｍｌ／ｍｉｎ／１００ｇ）明显高于投药前（５５．２９±７．０６ｍｌ／ｍｉｎ／１００ｇ），６０、９０分钟肠血流量亦显著高于生理?

中药及组方对常见厌氧菌的体外抑菌作用

为了探讨中药对厌氧菌的作用，我们采用具有清热解毒、活血化瘀、通里攻下功用的五十种常用中草药及１２株临床常见厌氧菌，进行了体外抗菌实验。在体外中药抑菌作用的初步筛选实验基础之上，我们选用了有较强抗厌氧菌作用的黄连、黄岑、木通、大黄、加上活血化瘀药物丹参，组成方剂，并暂定名为“厌氧灵”。本实验研究采用琼脂稀释法，对厌氧灵及组成的五种单味药物分别进行了抑菌实验，并测定了最小抑菌浓度。实验结果表明，五十种中草药中，黄连、黄岑、大黄、五味子、木通对六种以上的脆弱类杆菌的抑菌环直径分别为１８ｍｍ、２２ｍｍ。厌氧灵对包括脆弱类杆菌在内的六种厌氧菌有良好的抑菌作用，对金黄色葡萄球菌在内的三种需氧菌亦有较好的抑菌作用。黄连、黄芩、木通、大黄、丹参和厌氧灵对脆弱类杆菌的最小抑菌浓度分别为０．０６２ｇ／ｍｌ、０．５００ｇ／ｍｌ、０．０３１ｇ／ｍｌ、０．１２５ｇ／ｍｌ、０．５００ｇ／ｍｌ、０．０３１ｇ／ｍｌ。说明厌氧灵在体外可同时抑制某些厌氧菌和需氧菌的生长。

基于肺与大肠相表里的“肠病及肺”动物模型制备

目的:制备适用于研究"肺与大肠相表里"理论的"肠病及肺"大鼠模型。方法:20只SPF级雄性Wistar大鼠,随机分为模型组和假手术组,模型组采用腹腔注射人工胃液后2 h再注射大肠杆菌的方法制备的"肠病及肺"大鼠模型,造模后6 h测定大鼠肛温,取全段结肠中的粪便用于结肠粪便含水量测定,取末端回肠和肺组织用于髓过氧化物酶(MPO)活性和病理学检测。结果:与假手术组相比,模型组大鼠体温升高,结肠粪便含水量减少,回肠和肺组织MPO活性增加(1.39±0.21 vs 0.72±0.16和1.51±0.26 vs 0.86±0.20,P<0.05);同时模型组大鼠显微镜下可见回肠绒毛排列紊乱、萎缩或脱落,肺间质水肿、出血,部分肺泡塌陷、融合;透射电镜下可见肠上皮细胞间紧密连接破坏,线粒体嵴断裂,肺泡Ⅱ型上皮细胞胞浆浓缩,细胞核固缩,伴空泡化。结论:采用腹腔注射人工胃液后注射大肠杆菌的方法制备的"肠病及肺"大鼠模型,原发病在腹腔,同时具备肠和肺损伤,是研究"肺与大肠相表里"脏腑相关理论的一种合适的实验动物模型。

脂肪肝超声图像的定量分析

脂肪肝定量分析是对脂肪肝诊断的一种客观方法 ,可减少定性分析中人为因素所带来的偏差 .对多例 B超图像提取特征参数 ,并进行肝肾对比 ,从而在统计意义上分析正常肝与脂肪肝的参数差异性 .

胆固醇结石患者固醇携带蛋白2基因单核苷酸多态性的检测

目的 :检测胆固醇结石患者和非胆石患者固醇携带蛋白 2 (SCP2 )基因单核苷酸多态性 (SNP) ,并探讨SNP与胆固醇结石的关系。 方法 :应用聚合酶链式反应 -单链构象多态性 (PCR -SSCP)银染技术并结合DNA直接测序 ,检测了 5 8例散发胆固醇结石病人和 5 0例非胆石病人SCP2 基因的部分启动子区、全部编码区及部分 3,未翻译区序列。 结果 :SCP2 基因第 14外显子检出变异DNA单链泳动条带。 5 8例散发胆固醇结石病人中共有 31例检测出变异DNA单链泳动带 ,突变率为5 3 4 5 % ;而 5 0例非胆石病人仅有 7例检测到变异泳动带 ,突变率为 14 0 0 % ;两组突变率差异有显著性 (χ2 =2 0 12 3,P <0 0 0 1)。部分病例PCR产物直接测序发现G2 84→A碱基颠换 ,为同义突变。 结论 :SCP2 基因 +2 84位点突变不影响SCP2 蛋白的结构和功能 ,但G2 84→A的基因型频率在胆固醇结石患者较非胆固醇结石病人为高 。

厌氧灵对腹部厌氧菌感染的作用：90例临床观察

在本研究中，我们选择了９０例外科腹腔内感染病人，随机分为二组，一组为厌氧灵治疗组，一组为氨苄十灭滴灵治疗组。所有病例于术中取材，进行细菌学调查。二组病人分别于术前一日用药至术后四日，观察体温、白细胞变化，排气时间，切口感染率。结果表明，本组病例中，厌氧菌的检出率为５６．７％，需氧菌的检出率为５４．４％。术后第三日，二组病例的体温恢复正常；白细胞计数氨苄十灭滴灵组（１０．１４±２．８４×１０９／Ｌ）较厌氧灵组（８．９４±２．３１×１０９／Ｌ）轻度升高，（Ｐ＜０．０５）；厌氧灵组的排气时间（２．３１±０．５３天），早于氨苄十灭滴灵组（３．０７±０．５２天）（Ｐ＜０．０１）；厌氧灵组的切口感染率虽低于氨苄十灭滴灵组，但无统计学意义。提示厌氧灵在临床应用中对防治腹内感染有较好的效果。

家族性胆固醇结石患者肝组织HMGCR和SCP_2mRNA的表达

目的:研究家族遗传性胆囊胆固醇结石患者、非家族遗传性胆囊胆固醇结石患者和非胆固醇结石患者肝组织HMGCoA还原酶(HMGCR)、固醇携带蛋白2(SCP2)基因mRNA的表达情况,进而明确二者在胆石形成中的作用.方法:选取2003-08/2004-08天津市南开医院外科住院病例90例,均取得患者及家属知情同意,其中家族遗传性胆囊胆固醇结石患者28例,非家族遗传性胆囊胆固醇结石患者30例,非胆固醇结石患者32例,术中肝活检,行肝组织总RNA提取,逆转录反应合成cDNA,设计引物,进行聚合酶链反应(PCR)扩增HMGCR和SCP2基因的目的片段,检测肝组织mRNA的表达水平的不同.结果:家族遗传性和非家族遗传性胆固醇结石组HMGCR,SCP2mRNA表达水平较非胆固醇结石组升高;其中HMG(:RmRNA表达在家族遗侉}生胆固醇结石组为1.9269±0.2134,非家族遗传性组为1.9791±0.2524,二者均高于非胆固醇结石组0.7730±0.1530,差异有显著性(P<0.05);SCP2mRNA表达在家族遗传性胆固醇结石组为0.8908±0.1649,非家族遗传性组为0.7503±0.1004,二者均高于非胆固醇结石组0.5205±0.1900,差异有显著性(P<0.05);家族遗传性胆固醇结石SCP2mRNA表达水平较非家族遗传性胆固醇结石组升高,差异有显著性(P<0.05),而HMGCRmRNA在家族遗传性和非家族遗传性胆固醇结石组两组间无统计学差别.结论:胆囊胆固醇结石患者肝组织HMGCR,SCP2mRNA表达水平升高是胆囊胆固醇结石形成的重要原因.

复方丹参合剂与大承气汤合用对小肠梗阻肠黏膜屏障的协同保护作用

目的:观察大承气汤和复方丹参合剂对小肠黏膜屏障的保护作用及二者合用的效果。方法:制备不完全性肠梗阻的动物模型,观察大承气汤和复方丹参合剂及其合用时对血浆及小肠组织二胺氧化酶(DAO)浓度的影响,同时观察小肠组织形态学改变。结果:①模型组大鼠血浆中DAO浓度显著高于正常组(P<0.01),大承气汤组和合用组均可降低小肠不完全性梗阻后血浆DAO浓度(P<0.01),且合用组效果增强(P<0.01)。②模型组大鼠小肠组织DAO浓度显著低于正常组(P<0.01),大承气汤组、复方丹参合剂组和合用组均可升高小肠不完全性梗阻后小肠组织DAO浓度(P<0.01),且合用组效果增强(P<0.01)。③模型组大鼠小肠组织形态学损伤严重,各给药组的损伤不同程度地减轻。结论:复方丹参合剂与大承气汤对小肠黏膜屏障有协同保护作用。

尿N-乙酰β-D氨基葡萄糖苷酶对妊高征早期肾损害的监测意义

N-乙酰β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG酶),系细胞溶酶体中酸性水解酶的一种,该酶在肾近曲小管上皮细胞中含量甚高,故尿NAG酶活性的升高是肾实质损伤早期发现的一项灵敏指标,它的改变较尿蛋白及肾功能异常出现早,具有一定的特异性和敏感性。肾功能的改变可反映妊高征的严重程度和围产期的预后。本文通过监测妊高征患者及正常孕妇尿NAG酶活性,就其临床意义进行探讨。

胰腺星状细胞在胰腺纤维化进程中的作用

本文介绍胰腺星状细胞在慢性胰腺炎胰腺纤维化中的重要作用。通过对胰腺星状细胞的生物特性、激活机制、调节PSCs活性的细胞内信号通路等研究,更好地介绍PSCs与慢性胰腺炎的关联,为临床治疗慢性胰腺炎提供新的途径。胰腺星状细胞逐渐成为抗胰腺纤维化及治疗慢性胰腺炎的重要靶点。

清胰颗粒对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜上皮紧密连接的保护作用

目的:探讨清胰颗粒对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜上皮紧密连接的保护作用。方法:24只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、SAP组和清胰颗粒组。采用3.5%牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射制备SAP大鼠模型,清胰颗粒组于造模前2 h、造模后6 h和18 h分别给予清胰颗粒灌胃,SAP组以同样的方法给予安慰剂。各组分别于造模后24 h取末端回肠,HE染色,光镜下观察病理组织学改变,采用Chiu’小肠组织损伤评价标准对肠黏膜损伤进行评价,应用Western blot和实时荧光定量PCR法检测回肠黏膜上皮紧密连接蛋白(Occludin)表达。结果:与假手术组相比,SAP组大鼠Chiu’小肠组织损伤评分(4.6±0.6)vs(0.0±0.0)明显升高,与SAP组相比,清胰颗粒组Chiu’小肠组织损伤评分(2.0±0.4)vs(4.6±0.6)明显降低;Western blot和实时荧光定量PCR结果显示,与假手术组相比SAP组大鼠Occludin蛋白表达(1.2±0.4)vs(3.2±0.4)和m RNA表达(1.3±0.3)vs(2.9±0.5)明显降低(P<0.05);与SAP组相比,清胰颗粒组Occludin蛋白表达(4.1±0.4)vs(1.2±0.4)和m RNA表达(4.2±0.3)vs(1.3±0.3)明显升高(P<0.05)。结论:清胰颗粒能减轻SAP大鼠肠黏膜损伤程度,这一作用可能与增强肠黏膜紧密连接蛋白Occludin表达有关。

中药辅助治疗中重度子宫内膜异位症术后疗效观察

目的观察复方莪术散、达菲林单用或联用在中重度子宫内膜异位症（EM）腹腔镜术后药物巩固治疗中的作用。方法回顾性分析2007年6月至2009年6月天津市南开医院妇科住院行腹腔镜手术治疗的115例EM患者临床资料，按术后治疗方案分为莪术散组（53例）、达菲林组（36例）、达菲林＋莪术散组（26例）。莪术散组于术后1周开始给予复方莪术散（药物组成：莪术15g，三棱15g，淫羊藿15g，黄芪15g，元胡10g），每日2次，连服3～6个月。达菲林组于术后7d肌肉注射达菲林3．75mg，每4周1次，连续3次。达菲林＋莪术散组给药方案同两单用药组。于术后3、6、12、≥18个月观察各组患者的临床疗效（包括缓解、改善、复发）、疼痛评分、不良反应发生率。结果莪术散组复发率为1．89％，达菲林组为2．78％，达菲林＋莪术散组无复发病例；3种治疗方案的临床疗效和疼痛评分比较差异均无统计学意义（均P〉0．05）。莪术散组不良反应发生率（11．32％）较达菲林组（86．11％）和达菲林＋莪术散组（88．46％）明显降低（均P〈0．01）。结论复方莪术散在中重度EM腹腔镜术后药物巩固治疗中能降低复发率，且不良反应小，具有临床应用价值。

实验动物福利及IVC系统对实验动物福利的优势体现

随着生命科学和医学研究工作的快速发展,实验动物的地位越来越受到重视。本文旨在探讨实验动物福利及其国内外的现状,并对普通层流架、屏障系统和IVC(独立通气笼盒)系统进行比较,综合体现IVC系统在实验动物设施建设及饲养过程中对于保障动物福利有其独特的优势。