真菌疏水蛋白HGFI在酿酒酵母中的表达、纯化和性质测定

真菌疏水蛋白是丝状真菌分泌的小分子量蛋白质,由于其独特的两亲性和自组装特性,近年来成为研究热点.利用pSP-G1作为表达载体,成功的在酿酒酵母中表达出疏水蛋白HGFI,并利用超滤结合HPLC的方法对该蛋白进行了纯化.此外,还对纯化的HGFI通过接触角,圆二色谱,X射线光电子能谱和原子力显微镜进行了性质测定,证实其性质与毕赤酵母表达系统表达的HGFI一致.该酿酒酵母表达系统与毕赤酵母表达系统相比,由于其不存在甲醇诱导和过度糖基化,从而具有更高的生物安全性,因而能拓展其在食品及药物传输系统方面的应用.

二硫键氧化还原异构酶(DsbM)与转录调控因子(PA0056)的相互作用

二硫键氧化还原异构酶(disulfide oxidoreductase,DsbM)分布于原核细胞中,主要参与周质空间中膜蛋白的折叠.转录调控因子(lysR type transcriptional regulator,PA0056)是一类包含4个半胱氨酸的蛋白,当以氧化态形式存在时,可调控下游基因的转录,参与调节抗氧化或者抗药性.本实验室前期研究证明DsbM参与氨基糖苷类耐药性的调节.关注铜绿假单胞菌中DsbM和PA0056之间的相互作用,分别构建了酵母双杂交(yeast two-hybrid test)和双分子荧光互补系统(bi-molecular fluorescence complementation, BiFC)的载体.通过酵母双杂交实验,发现DsbM和PA0056之间存在较强的蛋白质相互作用.通过BiFC实验,发现共同转化表达DsbM和PA0056载体的酵母中可观察到强烈的黄色荧光,表明DsbM和PA0056可以发生相互作用.本研究为深入研究DsbM在铜绿假单胞菌耐氨基糖苷类抗生素耐药机制奠定基础.

寡聚核糖核苷酸降解酶影响铜绿假单胞菌的能量代谢

铜绿假单胞菌是一种自然界中广泛存在的革兰氏阴性条件致病菌.在该菌的RNA代谢过程中,存在一种以NanoRNA(2-5nt的寡聚核糖核苷酸)为底物的寡聚核糖核苷酸降解酶(Oligoribonuclease, Orn).在本研究中,发现铜绿假单胞菌orn突变菌株的生长速度变慢,因此使用ATP,NADH检测试剂盒,利用酶标检测法和流式细胞分析研究Orn对细菌生理状态的影响.研究结果表明,铜绿假单胞菌orn基因的缺陷可以导致细菌胞内NADH和细菌细胞膜电位差的降低.这进一步导致细菌胞内ATP合成的降低,从而影响细菌的能量代谢.