芦荟大黄素对Jurkat T细胞增殖和凋亡的作用及机制

目的研究芦荟大黄素对Jurkat T细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨可能的机制。方法应用细胞计数测定增殖,Hoechst/PI双染法及DNA片断化分析细胞凋亡特征,流式细胞术检测细胞周期分布。进一步应用二氢乙锭荧光染色测量活性氧产物,Western blotting检测胞浆细胞色素C(Cyt-c)的量,比色法检测caspase-3和caspase-9活性。结果芦荟大黄素剂量和时间依赖性地抑制JurkatT细胞增殖。芦荟大黄素诱发细胞核皱缩,核DNA片断化,细胞周期出现亚G1期凋亡峰,且停滞于G2/M期。芦荟大黄素介导细胞内活性氧水平显著提高,线粒体释放Cyt-c量显著增加,caspase-3和caspase-9活性显著增强。结论芦荟大黄素剂量依赖性地抑制Jurkat T细胞增殖并诱导其凋亡。诱导凋亡的机制中,包括增加活性氧产物和线粒体损伤途径。

芦荟大黄素对白细胞介素-2引起大鼠T细胞增殖和细胞内Ca^(2+)浓度变化的影响

目的研究芦荟大黄素对白细胞介素-2(IL-2)引起的T淋巴细胞增殖和细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)变化的影响,探讨芦荟大黄素对淋巴细胞增殖的作用和机制。方法采用MTT法检测细胞增殖,用单细胞钙成像系统记录细胞胞浆[Ca2+]i。结果芦荟大黄素对IL-2引起的T细胞增殖有显著抑制作用,且抑制效果与剂量有关;IL-2引起[Ca2+]i升高,并持续维持高[Ca2+]i水平,引起[Ca2+]i升高的机制包括胞内Ca2+释放和胞外Ca2+内流;芦荟大黄素显著抑制IL-2引起的[Ca2+]i升高,作用途径包括抑制胞内Ca2+释放和胞外Ca2+内流。结论芦荟大黄素对IL-2诱发的T细胞增殖有显著的抑制作用,其作用机制可能与抑制细胞内[Ca2+]i升高相关。

钙通道Cav3.1的S4区域在其电压依赖性失活过程中的作用

电压依赖性失活在钙通道的生理功能中起重要作用,参与通道失活的分子结构域目前还不清楚.为研究T型钙通道Cav3.1分子中第4跨膜区(S4)在电压依赖性失活中的作用,用Cav1.2通道(无电压依赖性失活)的S4区替换Cav3.1(快速电压依赖性失活)的相应S4区域,构建嵌合通道(chimera),并在卵母细胞中表达,用双电极电压钳记录其通道电流.结果显示,替换结构域Ⅰ中的S4使Cav3.1的稳态失活曲线左移,V0.5失活和k失活值显著改变;替换其余结构域(Ⅱ～Ⅳ)的S4对失活的电压依赖性无显著影响.结果表明,结构域Ⅰ的S4参与通道的失活过程,不同结构域的S4在Cav3.1失活中的作用不同,提示结构域Ⅰ的S4可能起偶联膜电位变化与通道失活的作用,膜电位变化引起S4移动可能是通道失活区分子结构变化的触发因素.