γ-亚麻酸生产菌深黄被孢霉原生质作的形成和再生

采用2％的溶壁酶加4％的蜗牛酶，从深黄被孢霉的菌丝中获得了大量的原生质体。同时对菌丝的培养时间、渗透压稳定剂、酶解系统和酶解温度等因素进行了系统的观察，从而获得了制备深黄被孢霉原生质体的最适条件。并对该原生质体在高渗培养基上进行了再生实验，其再生率为32％。

一种快速、有效提取丝状真菌总RNA的方法

从细胞中提取RNA的纯度和完整性对于许多分子生物学实验是至关重要的,如Northern杂交、寡聚纤维素选择分离mRNA、cDNA合成等实验的成败,很大程度上取决于RNA的质量.RNA极易降解,为了获得高质量的RNA,必须避免RNA酶的污染.RNA酶是一类生物活性非常稳定的酶类,耐酸、耐碱、耐热,因此,在提取RNA的过程中应创造一个无RNA酶的环境.尽量减少外源和内源RNase的污染,外源性RNase主要是操作者的手及各种实验器皿、试剂等.可通过戴手套、高温干烤及DEPC处理除去;内源性RNase来自于样品的组织细胞.可通过强烈的RNase抑制剂如异硫氰酸胍等抑制.对于丝状真菌的RNA提取方法国内报道较少,尤其是针对丝状真菌深黄被孢霉菌丝细胞,既含有丰富的RNasc又含有大量的多糖的RNA提取,国内外未见报道.我们在采用Piot-er chomczynski—步热酚法未获得满意结果的基础上,进行了较大的改进:用6mol/L.异硫氰胍等高浓度的变性剂代替通常的4mol/L变性剂;舍弃将第1次RNA沉淀复溶于变性液及异丙醇再次沉淀这两步,改用水溶解富含多糖的RNA粗品;用NaAc沉淀,以除去高含量的多糖;改变原来的酚:氯仿:异戊醇抽提的浓度和比例,使蛋白清除干净,去除了DNA污染.总之.改进后的方法是一种适合于富含RNase和多糖的丝状真菌的RNA提取方法,该方法可获得完?

富硒酵母的筛选

微量元素硒是一种人体必需的营养元素,是生物体多种生物大分子的活性成分,如谷胱甘肽过氧化物酶、甲基脱氢酶、甘氨酸还原酶、黄嘌呤脱氢酶等.这些化合物有保护机体免受氧化损伤,清除自由基,保持生物膜系的完整性,从而具有提高肌体的免疫力,保护心脏和抗衰老作用.近年来许多流行病学和动物学实验表明:硒具有增强巨噬细胞的抗肿瘤活性,对多种癌细胞有明显的抑制作用.人体缺硒将影响体内血红素的利用,另外国内许多研究证实,克山病、大骨节病与病区环境和居民体内缺硒有着密切的关系.本文通过逐渐加硒驯化,采用分光光度法和原子荧光分析法测定硒含量.从5属30种酵母菌中筛选出2株具有耐硒且富硒特性的优良酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),对这2株菌进行了不同的加硒诱导浓度、不同的加硒时间、不同菌体生长时间、通气量及改变培养基配方等条件实验,当加硒浓度10^(-4)mol/L、加硒时间为生长20h、摇瓶装液量60mL(500mL 三角瓶),收获时间为48h时,干酵母硒含量达到800μg/g以上,最高批次可达1400μg/g干菌体.

酿酒酵母类金属硫蛋白的研究

金属硫蛋白(Metallothionein,简称MT)是一类低分子量,富含半胱氨酸残基,能被金属诱导的金属结合蛋白.它广泛存在于生物体内,具有重要的生物学功能,主要参与微量元素的储存、运输和代谢;拮抗电离辐射;清除羟基自由基,其活性是SOD的1000倍以上.国内从事金属硫蛋白的研究工作较晚,从90年代以来才陆续发表有关文章.主要是从哺乳动物肝、肾中分离纯化MT,并对其功能和结构进行研究.国际上对微生物产生MT研究起步较晚.1975年首次由Prinz.K等人从酿酒酵母中分离到了Cu-MT,由于从微生物分离的金属硫蛋白其基本结构、特性和功能与哺乳动物MT类似,故也称为类金属硫蛋白.国内类似的报道较少.本文是从诱导野生型酵母菌产生金属抗性入手.筛选出了1株富含类MT的酿酒酵母,并对其所产的类MT通过SephadexG-50和DEAE-cellulose柱层析进行了分离纯化,同时对该蛋白的理化性质进行了鉴定.结果为:每分子蛋白含20个巯基,结合11个铜原子.分子量约为18894kD.等电点为5.13,含丰富的半胱氨酸,碱性和酸性氨基酸.无酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸和蛋氨酸.选择酵母菌作为提取材料,主要是因为酵母菌是国际公认的人类可以食用的微生物,另一方面酵母菌容易通过发酵获得大量菌体.优于从动物脏器提取。

中华卤虫无节幼体蛋白质组的双向凝胶电泳分析

应用双向凝胶电泳和图像分析手段,对比了卤虫(Artemia)初孵无节幼体和孵化24 h无节幼体中蛋白表达的变化情况。结果显示,随着卤虫幼体的发育,蛋白表达的种类和个数均明显增多,仅有个别蛋白的表达量下调。这些差异表达的蛋白可能跟卤虫幼体的发育过程密切相关或起重要的调节作用。

DNA甲基转移酶1和DNA甲基转移酶3B基因单核苷酸多态性与结直肠癌易感性的关系

最近研究结果显示DNA甲基转移酶（DNMTs）异常激活与人类恶性肿瘤的发生发展密切相关[1],我们将DNMT在结肠癌发生过程中的调控作用作为切入点,采用病例-对照的分子流行病学方法,应用Sequenom MassArray质谱分析技术对DNMT1和DNMT3B的10个单核苷酸多态性位点（SNP）与结直肠癌易感性进行研究,探讨其与结直肠癌易感性的关系及表遗传学的调控机制.