十拷贝串联重复laGLP-1基因植物表达载体的构建及对黄瓜遗传转化的研究

天然胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)是含有30个氨基酸的短肽激素,对2型糖尿病具有特殊疗效.以本实验室克隆的长效GLP-1(long acting GLP-1,la-GLP-1)基因为基础,构建了十拷贝串联重复laGLP-1的无抗生素选择标记的植物表达载体pX6-laGLP-1,采用农杆菌介导法对黄瓜自交系2 M1进行转化,通过PCR及Southern杂交检测分析,最后获得了4株稳定整合十拷贝串联重复laGLP-1的转基因植株.该遗传体系的建立为研发糖尿病食疗型转基因植物或用其生产治疗糖尿病的口服药物奠定了基础.

实验性2型糖尿病小鼠肝脏组蛋白H3表观修饰的变化及其意义

目的:研究肝脏组蛋白H3表观修饰的变化在2型糖尿病小鼠发病过程中的作用,探讨其临床意义。方法:30只C57BL/6J小鼠分为正常组、高脂高糖组和糖尿病组,正常组和高脂高糖组小鼠分别给予正常饲料和高脂高糖饲料,糖尿病模型采用高脂高糖饲料联合注射链脲佐菌素(STZ)方法构建。采用HE染色、免疫印迹法、实时定量PCR和ChIP技术分别检测小鼠肝脏病理学变化、肝脏中总组蛋白H3的修饰状况及与糖代谢相关基因丙酮酸激酶(Pklr)、葡萄糖转运蛋白2(Glut2)、葡糖糖激酶(Gck)、过氧化物酶体增生物激活受体γ辅助活化因子1(Ppargc1a)和胰岛素受体(Insr)的表达水平和基因启动子区组蛋白的修饰变化。结果:糖尿病组小鼠肝脏病理学(HE染色)和组蛋白修饰模式均发生了明显变化。与正常组比较,高脂高糖组小鼠H3K23的乙酰化下降(P<0.01),H3K9Ac和H3K9Me2修饰水平上调(P<0.01),H3K4Me保持不变(P>0.05),糖代谢相关基因Pklr、Glut2和Gck的表达水平升高(P<0.01);糖尿病组小鼠H3K23Ac和H3K9Ac修饰水平下降(P<0.05或P<0.01),H3K9Me2和H3K4Me的修饰水平升高(P<0.01),糖代谢相关基因Pklr、Glut2、Gck、Ppargc1a和Insr表达水平明显下调(P<0.05或P<0.01)。Pklr、Glut2启动子区H3K23Ac、H3K9Ac、H3K9Me2和H3K4Me修饰水平变化与基因的表达水平变化相吻合。结论:肝脏组蛋白表观修饰变化可能参与了2型糖尿病的发生发展。

急剧弯曲DNA柔韧性的研究进展

基因调控,核小体和病毒的包装行为都会涉及DNA的急剧弯曲成环。DNA分子的环化是研究其本身柔韧性的主要方法。目前已经发展出很多研究DNA环化的模型,其中WLC(worm-likechain)模型较为成熟。近年来,在DNA环化的重要参数、影响因素以及DNA急剧弯曲成环的理论研究等诸多方面都有了新进展。

双功能促胰岛素水蛭素(5rolGLP-HV)的构建及功能分析

采用分子克隆方法获得5拷贝口服长效促胰岛素多肽(rolGLP-1)和水蛭素(rHV)融合基因促胰岛素水蛭素(5rolGLP-HV),并将该基因克隆至pET22b(+)表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),实现了高效表达.表达产物经SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定后用Ni-NTA亲和层析柱纯化,得到高纯度的5rolGLP-HV.用STZ诱导Ⅱ型糖尿病小鼠和血栓模型鼠进行药物功能分析,结果表明,5rolGLP-HV有较好的降糖和抗血栓效果.

罗格列酮氧钒对糖尿病模型小鼠的药效学研究

采用有机化学和配位化学方法合成了1种有机钒配合物—罗格列酮氧钒,并且通过红外光谱方法分析了其结构.利用合成的罗格列酮氧钒以及硫酸氧钒,对糖尿病模型小鼠进行口服灌胃治疗.结果表明,罗格列酮氧钒比硫酸氧钒更能有效降低糖尿病小鼠的血糖水平,改善其"3多1少"症状,未发现其有明显的毒副作用.证明罗格列酮氧钒是一种很有潜力的治疗2型糖尿病的新型口服药物.