高温解烃菌NG80-2黄素还原酶基因的克隆、表达及其酶学性质研究

对1株高温解烃菌NG80-2黄素还原酶基因nfr进行了克隆,并在E.coli BL21中实现高效表达。对纯化的Nfr酶学性质进行研究,发现Nfr可以利用NADH、NADPH、FMN、FAD分别作为供氢体和氢受体,其中NADPH和FMN为最适底物.Nfr的最适反应温度为60～70℃,最适反应pH为5.0.在耐受性试验中,此酶在65℃高温中保温30 min后可保持47.3%的相对酶活。在受试的金属离子中,Fe^(2+)对酶活性的抑制作用最大。

利用PCR-DGGE技术指导高温油藏中功能微生物的分离

采用PCR-DGGE技术对高温油藏的微生物群落进行了多样性分析,并将得到的信息用于指导油藏微生物的分离.本研究通过PCR-DGGE技术对油藏水样中DNA的16S rDNA V3、V8、V9 3个高可变区的扩增产物进行了比较,确定采用可得到更多微生物多样性信息的V9区引物进行PCR扩增,优势条带序列分析表明,在高温油藏中存在的微生物与GenBank数据库中α,β,γ-变形杆菌和芽孢杆菌的序列相似性最高.利用多元细菌培养技术,以序列信息为指导,采用富集培养、直接培养和特殊培养的方法,从水样中分离出5株高温菌(而传统分离方法只能获得3株),其中3株高温解烃菌分别属于Bacillus属、Geobacillus属和Petrobacter属,它们能够在55℃以上兼性厌氧条件良好生长,对原油的降解率分别为56.5%7、0.01%和31.87%,对原油的降粘率分别为40%、54.55%和29.09%,使原油的凝固点分别降低3.7、5.2和3.1℃.因此,序列指导和改变培养条件是分离更多有效采油微生物的改进方法,这3株高温菌的对原油的作用效果证明其具备提高石油采收率的潜力.

一种新型絮凝剂产生菌的筛选方法及其应用

利用新型选择因子筛选方法,从实验样品中筛选出了多株絮凝剂高效产生菌。其中以酵母悬液为选择因子筛选出了菌株A1,以废水为选择因子筛选出了菌株A2,两株菌均表现出优良的絮凝特性。A2的絮凝活性是由菌体细胞产生的,将A2菌体和A1所产絮凝剂配合使用可以取得最佳的絮凝效果。此外,用A1、A2复合菌制剂处理高浓度有机废水,在工艺停留时间为48h的情况下,COD去除率可高达78%以上,SS的去除率可高达96%以上。上述结果表明:在絮凝剂产生菌的筛选过程中,利用新型筛选因子替代传统方法中的高岭土,可避免原有分离方法的盲目性,提高分离效率,从而建立一种全新的快速、高效获得目标菌株的方法。