晚期氧化蛋白产物导致血管内皮细胞氧化应激损伤

目的 研究慢性肾功能衰竭病人循环晚期氧化蛋白产物 (AOPP)对人血管内皮细胞活性的影响及机制。方法 用次氯酸(HOCl)氧化牛血清白蛋白 (BSA)体外制备AOPP BSA ,将人血管内皮细胞株ECV30 4与不同浓度、不同氧化修饰程度的AOPP BSA共同培养 ,用MTT法测定细胞活性 ,用VICTORWallac 14 2 0多标记分析系统动态检测细胞内活性氧的产生量。结果 AOPP BSA使血管内皮细胞活性降低 ,其对内皮细胞活性的影响与BSA氧化程度及AOPP BSA的浓度有关 ;AOPP BSA刺激内皮细胞生成活性氧 ,细胞内活性氧的生成量随BSA氧化程度和AOPP BSA浓度增加而升高。用硒谷胱甘肽过氧化物酶小分子模拟物ebselen预处理细胞 ,可使AOPP BSA诱导产生的活性氧减少 5 3% ,并可保护细胞免受AOPP BSA造成的细胞损伤。结论 晚期氧化蛋白产物能通过氧化应激引起血管内皮细胞损伤。

晚期糖基化终产物诱导单核细胞产生细胞因子的细胞内信号传导机制

目的 探讨晚期糖基化终产物 (AGE)诱导单核细胞产生白细胞介素 1β(IL 1β)和肿瘤坏死因子 浕(TNF 浕)的细胞内信号传导机制。方法 采用密度梯度离心法分离健康成人外周血单核细胞 ,经AGE修饰的人血清白蛋白 (AGE HSA)刺激后 ,用ELISA法检测培养上清中IL 1β、TNF 浕水平 ,用化学发光法测定活性氧的生成 ;免疫细胞化学染色及凝胶迁移电泳 (EMSA)法观察核因子 κB(NF κB/p6 5 )的激活。分别用抗AGE受体 (RAGE)抗体、NADPH氧化酶特异性抑制剂apocynin和p38通路抑制剂SB 2 0 35 80预处理单核细胞 ,观察对AGE HSA诱导细胞因子和活性氧产生的影响。结果 AGE HSA与单核细胞在体外共同培养后 ,细胞内NF κB激活 ,培养上清中IL 1β、TNF 浕水平明显增高 ,活性氧生成增加 ;用抗RAGE抗血清或apocynin预处理细胞可阻断AGE HSA诱导的活性氧生成 (P <0 0 1) ,抑制NF κB的活化并使培养上清IL 1β、TNF 浕显著降低 (P <0 0 1)。用SB 2 0 35 80预处理细胞也可抑制AGE HSA诱导的NF κB激活及IL 1β、TNF 浕的产生 ,但对活性氧的产生无明显影响 (P >0 0 5 )。结论 AGE通过RAGE介导的途径刺激单核细胞生成IL 1β、TNF 浕和活性氧 ,NADPH氧化酶途径可能是RAGE细胞内信号途径的上游 。

维生素E对血液透析病人氧化应激的干预效果

目的 研究抗氧化剂维生素E对血液透析病人氧化应激状态的干预效果。方法 处于稳定状态的血液透析病人 5 6例 (不服用任何抗氧化药)采用自身对照的方法 ,观察 1个月后 ,随机均分为两个实验组 ,A组口服维生素E 2 0 0mg/d ,B组口服维生素E 4 0 0mg/d,服药 1个月 ;两组分别在观察期和服用维生素E干预期前后检测循环晚期氧化蛋白产物(AOPP)、丙二醛 (MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)水平以及血清维生素E浓度。另选 5 6例健康者作为正常对照组。结果 实验组血清AOPP、MDA水平明显高于同龄正常对照组(n =5 6 ,P <0 0 1) ,GSHPx、维生素E浓度明显低于正常人(P <0 0 1) ;透析病人在未服抗氧化药的 1个月观察期前后AOPP、MDA、GSHPx及维生素E浓度无明显变化 (P均 >0 0 5 ) ;A组治疗后 ,血清维生素E水平较治疗前明显增高 (P <0 0 1) ,但AOPP、MDA和GSHPx水平与治疗前相比无明显差异 ;B组治疗后血清维生素E、GSHPx水平较治疗前增高 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ,AOPP较治疗前明显降低 (P <0 0 1) ,但MDA水平无明显变化。结论 口服大剂量维生素E(4 0 0mg/d)可以改善血透病人的氧化应激状态 ;血透病人短期服用大剂量维生素E未见明显副作用。

晚期糖基化终产物增加动脉粥样硬化病变部位的炎症反应

目的通过整体模型探讨晚期糖基化终产物(AGEs)负荷对动脉粥样硬化斑块炎症反应程度的影响。方法50只新西兰白兔随机分为5组。A组:喂饲高胆固醇饲料,同时注射AGEs修饰的兔血清白蛋白(AGEs—RSA);B组:喂饲高胆固醇饲料,同时注射未加修饰的兔血清白蛋白(RSA);C组:单纯喂饲高胆固醇饲料;D组:喂饲普通饲料;E组:喂饲普通饲料,同时注射AGEs—RSA。10周后分离主动脉全段,油红O染色测定主动脉粥样斑块内脂质含量;免疫组化法计数斑块内浸润的巨噬细胞、T淋巴细胞以及平滑肌细胞的迁移增生。结果喂饲高胆固醇饲料各组动物主动脉均可见粥样硬化斑块形成,斑块病变部位可见不同程度的脂质沉积、巨噬细胞、T淋巴细胞浸润及平滑肌细胞迁移增生。A组粥样斑块中脂质含量[(71.86±8.30)%]显著多于B组[(53.76±3.72)%]和C组[(56.67±9.20)%](P<0.05);粥样硬化斑块病变部位浸润的巨噬细胞[(23.1±8.5)个/0.01 mm2]、T淋巴细胞[(15.1±3.8)个/0.01 mm2]和平滑肌细胞[(19.2±5.7)个/0.01.mm2]较B组[巨噬细胞(14.4±5.9)个/0.01 mm2、T淋巴细胞(9.1±2.6)个/0.01 mm2、平滑肌细胞(12.9±3.8)个/0.01mm2]和C组[巨噬细胞(15.4±4.4)个/0.01mm2、T淋巴细胞(10.5±2.2) 个/0.01 mm2、平滑肌细胞(13.8±3.9)个/0.01