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鲜广地龙纯化蛋白的制备及其体外抗肺纤维化活性评价 被引量:13
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作者 李舒雨 杨启鑫 +5 位作者 左安娜 田林华 霍金海 蒙艳丽 汤庆发 王伟明 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期618-624,F0003,共8页
目的 寻找一种方便快捷的鲜广地龙蛋白纯化方法,并探究其是否具有抗肺纤维化作用。方法 采用冷冻干燥法对鲜广地龙进行粗提取,再用分子排阻色谱分离纯化得到纯化蛋白(P2),并质谱分析P2蛋白组成。细胞实验分组:C57BL/6小鼠24只,随机分3... 目的 寻找一种方便快捷的鲜广地龙蛋白纯化方法,并探究其是否具有抗肺纤维化作用。方法 采用冷冻干燥法对鲜广地龙进行粗提取,再用分子排阻色谱分离纯化得到纯化蛋白(P2),并质谱分析P2蛋白组成。细胞实验分组:C57BL/6小鼠24只,随机分3组(8只/组)。对照组、模型组(5 ng/mL TGF-β1处理)、SB431542组(2μmol/L)和鲜广地龙纯化蛋白P2组(13.125μg/mL)。动物实验分组:对照组(不处理)、模型组(博来霉素处理)、博来霉素+鲜广地龙纯化蛋白P2(5 mg/mL)。造模后给药21 d,在第22天进行取材。采用CCK8-法检测P2对MRC-5细胞的细胞毒性和肌成纤维细胞异常增殖的抑制;流式细胞术检验其对肌成纤维细胞的凋亡;HE和Massson染色观察其对肺组织的病理学变化;RT-PCR、Western blot检测其对α-SMA、Vimentin、E-cadherin和Collagen Ⅰ的调节;机制方面通过检验P2对Smad2/3及P-Smad2/3的调节作用,进而证明其可通过TGF-β/Smad通路起到抗肺纤维化作用。结果 通过分子排阻色谱法可方便、稳定得到鲜广地龙纯化蛋白P2。体外实验显示P2具有抑制肌成纤维细胞的作用(P<0.01),降低纤维化模型中α-SMA、Vimentin和Collagen Ⅰ的表达(P<0.001或P<0.01),升高E-cadherin的表达(P<0.01),可抑制Smad2/3和P-Smad2/3的表达(P<0.001或P<0.01)。体内实验显示,P2可降低HE染色中炎症细胞的数量以及Masson染色中蓝色的胶原纤维区域。结论 运用分子排阻色谱可较为理想的获得鲜广地龙纯化蛋白P2,且其可通过调节TGF-β/Smad通路抑制肺纤维化进程。 展开更多
关键词 鲜广地龙 蛋白纯化 质谱分析 TGF-Β/SMAD 肌成纤维细胞
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