MiRNAs在苯丙胺类兴奋剂成瘾中作用的研究进展

苯丙胺类兴奋剂(amphetamine-type stimulants,ATS)是一组以精神依赖为主的新型合成毒品,近年来流行,滥用趋势愈发严峻。MicroRNAs(MiRNAs)作为一类非编码小分子RNAs,通过与靶基因mRNA的互补配对,在转录后水平上对基因的表达进行负调控,从而导致靶基因mRNA的降解或翻译抑制。ATS能诱导miRNAs表达水平的变化,而成瘾相关脑区miRNAs表达的改变直接参与了对ATS成瘾行为的调节。因此,研究miRNAs在ATS成瘾中的调控作用,对进一步揭示新型毒品的成瘾机制及发现新的药物作用靶点具有重要意义。

四氯化碳致大鼠肝纤维化模型的建立

目的探讨适当改进经典四氯化碳模型复制方法。方法采用适当改进的40%(体积比)四氯化碳腹腔注射造模,造模结束后检测谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性、HPC3、C4、LN、HA含量;通过Mallory染色观察大鼠肝组织病理学变化。结果模型组肝湿重、肝指数、HPC3、C4、LN、HA含量以及肝纤维化程度均较正常组明显升高(P<0.01)。结论本法能够成功建立大鼠肝纤维化模型,死亡率极低,从而提高了模型质量以及实验效率。

复方红景天片质量标准的研究

目的建立复方红景天片的质量标准。方法采用薄层色谱法对处方中枸杞子、葛根、淫羊藿进行了定性鉴别,用HPLC法测定红景天苷含量。色谱柱为C18(HYPERSILBDS4.6mm×250mm),流动相为甲醇-水(15∶85),检测波长为275nm。结果定性鉴别专属性强,含量测定红景天苷在1.00-5.76μg范围内线性关系良好,r=0.9999(n=5),平均回收率为98.87%(RSD=1.2%)。结论该方法准确可靠,可有效地控制复方红景天片的质量。

不同配伍配比对麻黄甘草药对有效成分含量及抗炎活性的影响

目的:研究麻黄甘草不同比例配伍前后水煎液中有效成分含量及其抗炎作用的变化,探讨两药的配伍规律。方法:采用GC-MS测定各水煎液中盐酸去甲基伪麻黄碱、盐酸去甲基麻黄碱、盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、盐酸甲基麻黄碱的煎出量;采用HPLC测定各水煎液中甘草苷和甘草酸的煎出量。通过对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响,来观察麻黄、甘草药对不同配伍配比水煎液的抗炎作用。结果:与单煎液相比,麻黄与甘草配伍后,随着配伍药材比例增大,水煎液中有效成分的含量均有不同程度的降低。与空白组比较,各给药组对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高均有不同程度地抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05);与单味麻黄或甘草组比较,麻黄甘草(12:3)组和阳性对照组对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高均有抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05),其余各配伍组均无统计学意义。结论:麻黄甘草配伍后,对彼此有效成分的溶出有一定的抑制作用。推断二药配伍后,甘草中有机酸和麻黄中生物碱之间可能发生了化学反应,生成难溶于水的生物碱有机酸复盐,导致配伍后水煎液中有效成分含量降低。麻黄甘草配伍组对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高有显著的抑制作用,随着甘草配伍比例的增加,抑制作用降低,推断是水煎液中有效成分含量降低所致。

凉膈散抗登革2型病毒的作用

目的通过体外实验和动物实验探讨凉膈散(LGS)抗登革2型病毒(DENV-2)的作用。方法体外实验以肝素为阳性药,通过预给药、与病毒联合给药和病毒感染后在给药的方式处理BHK-21细胞,以CCK-8检测细胞活性,Q-PCR和Western印迹法检测E和NS1基因和蛋白的表达,噬斑检测子代病毒释放量评价凉膈散体外抗DENV-2的作用;动物实验以颅内注射加腹腔注射病毒的方法,于ICR乳小鼠上造模,HE染色评价脑和各脏器的病理变化,Q-PCR检测脑、血清、各脏器中E和NS1基因的变化,Western印迹法检测脑E和NS1蛋白的变化。结果体外实验显示,与病毒联合给药时凉膈散具有抗DENV2作用,且高剂量优于阳性药;凉膈散可抑制体内DENV-2,且可以延长感染病毒小鼠的生存时间以及改善临床症状。结论凉膈散具有抗DENV-2作用。

痰热清注射液抗登革2型病毒的作用机制研究

目的探讨痰热清注射液抗登革2型病毒(DENV-2)的作用。方法不同稀释浓度的痰热清注射液作用感染DENV-2的huh-7,HepG2和MHCC97H肝癌细胞,实时荧光定量QPCR法检测huh-7细胞内病毒拷贝数;Western印迹实验检测huh-7细胞内病毒相关蛋白的表达量;病毒蚀斑实验检测子代病毒的释放量,RNA-seq比较宿主细胞内先天免疫通路相关基因的表达变化。结果不同稀释浓度的痰热清注射液均能抑制细胞内DENV-2的RNA和蛋白的复制,并减能少子代病毒的释放;RNA-seq结果显示细胞内多个先天免疫信号通路受DENV-2影响,且痰热清注射液能调控相关基因的表达。结论痰热清注射液具有抗DENV-2的作用。

钩藤碱对甲基苯丙胺依赖斑马鱼大脑神经递质含量以及TH、NR2B和GluR2/3表达的影响

目的探讨钩藤碱对甲基苯丙胺诱导的斑马鱼条件性位置偏爱（CPP）的影响.方法天然偏爱测定（d1～3）合格的斑马鱼腹腔注射甲基苯丙胺（40mg·kg^-1,d4、6、8）或等体积鱼用生理盐水（d5、7）后,立即进行CPP训练;治疗组在每次给予甲基苯丙胺12h后,给予钩藤碱（50、100mg·kg^-1）和MK801治疗;于d9测试斑马鱼的CPP效应,测量斑马鱼脑中多巴胺、5-羟色胺、谷氨酸和γ-氨基丁酸含量以及酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）、N甲基D天冬氨酸受体亚型2B（N-methyl-D-aspartate receptor2B,NR2B）和α氨基羟甲基异恶唑丙酸受体亚型（glutamate receptor2/3,GluR2/3）蛋白表达.结果钩藤碱（100mg·kg^-1）治疗显著减少甲基苯丙胺依赖斑马鱼在伴药箱中的活动时间和运动距离（P 〈0.01）,下调大脑多巴胺、5-羟色胺、谷氨酸含量以及TH、NR2B和GluR2/3蛋白表达（P〈0.01）.结论钩藤碱抗斑马鱼甲基苯丙胺依赖的形成与抑制神经递质释放以及下调TH、NR2B和GluR2/3蛋白表达密切相关.

miRNAs在抑郁症中作用的研究进展

抑郁症是一种潜在的危及全球约3亿人口生命健康的慢性精神障碍性疾病.MicroRNAs（miRNAs）作为一类非编码小分子RNA,在转录后水平调控靶基因mRNA.抑郁症患者中出现miRNAs表达失调,而抗抑郁药物能扭转miRNAs异常表达,miRNAs与抑郁症的发生、发展有着密切的联系.因此,研究miRNAs在抑郁症中的调控作用对进一步揭示抑郁症发病机制及发现新的药物作用靶点具有重要意义.

姜黄素对鼻咽癌抗拒株的放射增敏作用及其机制研究

目的探讨姜黄素对放射诱导产生的鼻咽癌抗拒株CNE-2R的放射增敏作用及其机制。方法通过MTT实验筛选姜黄素的最佳浓度;对克隆生存实验结果进行L-Q拟合和单机多靶拟合,计算相关放射生物学参数;再通过流式细胞术检测细胞周期的改变;最后通过RT-qPCR实验检测细胞周期及DNA损伤修复相关基因的表达情况。结果浓度在10μmol·L^(-1)的姜黄素对CNE-2R细胞无明显抑制作用。给药后抗拒株CNE-2R的α/β值从6.56增加到1 596;SF2从1.93 Gy减少到0.361 Gy;N值从1.60减少到1.06;D0值从3.27减少到2.12;Dq值从1.53减少到0.12。细胞周期G2期明显增多,G1期稍微减少,S期明显减少。CDK4基因的表达明显上调,GADD45 g、BRCA1基因的表达明显下调。结论姜黄素通过调控GADD45 g、CDK4、BRCA1基因的表达,改变CNE-2R的细胞周期和影响DNA损伤修复,发生G2期阻滞,从而增加了抗拒株的放射敏感性。

外泌体对上皮-间质转化调控作用的研究进展

外泌体是一种具有生物活性的膜性囊泡,既可在细胞间传递活性物质,还可通过调控细胞间的信息传递参与细胞活动。上皮-间质转化(EMT)是上皮细胞获得间充质细胞特性的过程,在众多疾病中发挥了重要作用。研究表明,外泌体在EMT的发生发展过程中具有双向作用。一方面,外泌体可促进细胞发生EMT,赋予肿瘤细胞侵袭和转移能力,促进血管新生和加快肿瘤生长;另一方面,外泌体亦可抑制EMT,发挥减弱肿瘤细胞侵袭能力,抑制心、肝、肾纤维化,改善心肌梗死等作用。外泌体可能是通过携带EMT相关蛋白或miRNA,调控EMT相关信号通路发挥双向调节作用。

苦豆碱对小鼠的急性毒性研究

本文拟探讨苦豆碱对小鼠的急性毒性,并明确其半数致死量(LD_(50))以及毒性靶器官。采用腹腔注射给药方式,给予600.00、480.00、384.00、307.20、245.76 mg/kg的苦豆碱,实验后观察7 d,记录体重变化及自主活动情况,检测苦豆碱对小鼠的急性毒性作用,用加权回归几率法(Bliss)计算LD_(50),并对死亡小鼠进行主要脏器的病理学检查。结果显示,苦豆碱的小鼠LD_(50)为395.62 mg/kg,95%可信限为305.23~535.04 mg/kg,LD_5为143.00 mg/kg,LD95为1094.47 mg/kg。7 d内小鼠体重有增长趋势。病理结果显示,苦豆碱对小鼠的主要毒性靶器官为肝脏。

甘草正丁醇提取物抑制登革2型病毒的作用

目的对甘草正丁醇提取物抑制登革病毒(DENV-2)的活性进行了评价,并对其作用机制进行初步探讨。方法体外实验采用BHK-21细胞测定甘草正丁醇提取物对细胞的半数有毒浓度(CC50)以及对DENV-2的半数抑制浓度(IC50);通过CCK-8法在DENV-2感染后不同时间点以及不同的感染阶段加入药物检测细胞存活率;通过噬斑实验检测子代病毒释放水平;通过qRT-PCR、Western印迹法和免疫荧光实验检测病毒E和NS1的表达。体内实验采用7日龄ICR乳小鼠,颅内加ip给予DENV-2建立全身性感染乳小鼠模型,分别于造模后的第1,3和5天ig给药进行治疗,每天观察并记录乳小鼠临床评分及生存率;采用qRT-PCR、Western印迹法和免疫荧光实验检测各组织病毒载量;通过ELISA检测脑、肝、脾炎症因子的表达;通过HE染色观察各组织病变。结果体外研究表明,甘草正丁醇提取物的CC50为(202.61±2.31)mg·L^(-1),IC50为(6.24±1.16)mg·L^(-1);细胞感染DENV-2的同时给予甘草正丁醇提取物可显著改善细胞死亡,减少子代病毒释放量并抑制病毒E和NS1蛋白表达。体内研究表明,甘草正丁醇提取物对感染DENV-2的ICR乳小鼠具有治疗作用,具体表现为临床评分改善,生存时间延长;同时乳小鼠组织病毒载量明显降低,有效调节病毒感染导致的炎症细胞因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α和IL^(-1)β的变化,进而减轻组织病变。结论甘草正丁醇提取物在体内体外均能显著抑制DENV-2感染,其通过靶向DENV-2上的包膜蛋白抑制病毒复制周期的吸附过程进而发挥抗病毒作用。提示甘草正丁醇提取物可能是一种有前景的治疗登革病毒的候选药物。

感冒清热颗粒对风寒表证小鼠的保护作用

目的感冒清热颗粒具有疏风散热、清热解表的功效,临床上常用于治疗风寒感冒。本研究观察感冒清热颗粒对风寒表证小鼠模型的影响,阐明其抗风寒感冒的作用机制,为临床应用提供实验依据。方法BALB/c小鼠70只,随机分为正常对照组、风寒模型组、感冒清热颗粒3.6,7.2和14.4 g·kg^(-1)·d^(-1)组和阳性药物组(风寒感冒颗粒3.6 g·kg^(-1)·d^(-1)组和感康0.15片·kg^(-1)·d^(-1)组),每组10只。除正常对照组,其余组根据《中医实验动物学》采用风扇加寒冷体表降温吹风方法造模7 d,复制风寒犯表的太阳病动物模型。正常组不做任何处理饲养7 d。从开始造模第4天,药物组ig给药3 d,正常组和模型组ig给予等量生理盐水。期间记录各组动物的体重,第8天各组小鼠取血,处死后取肺、脾和胸腺,称重,计算肺、脾和胸腺的脏器系数,小鼠左肺固定后用于做病理切片HE染色,右侧肺组织匀浆检测其中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL^(-1)β的水平,抗凝血用于血常规检测。结果经风寒刺激7 d,模型组小鼠体重下降(P<0.01),感冒清热颗粒14.4 g·kg^(-1)·d^(-1)使其增加(P<0.05)。模型组小鼠肺指数升高(P<0.01),脾指数下降(P<0.01),胸腺指数无差异,感冒清热颗粒各剂量均抑制肺指数升高(P<0.01),对脾指数无影响。病理组织学检查显示,模型组肺间质增生,血管壁增厚,局部有出血,中性粒细胞浸润,部分区域出现代偿性空泡,感冒清热颗粒不同剂量组药物干预后缓解。模型组小鼠肺组织炎症因子TNF-α,IL^(-1)β和IL-6表达增多(P<0.05,P<0.01,P<0.01),感冒清热颗粒7.2和14.4 g·kg^(-1)·d^(-1)干预后炎症因子表达降低(P<0.01)。模型组小鼠外周血中红细胞、血小板与血红蛋白数量无显著性变化,白细胞水平下降(P<0.01),感冒清热颗粒干预后白细胞水平有所回升,但无显著性差异。在白细胞各个细胞群比例中,模型组淋巴细胞比例下降(P<0.01),单核细胞与中性粒细胞比例升高(P<0.01,P<0.05),高剂量感冒清热颗粒给药后淋巴细胞、单核细胞比例向正常组回归(P<0.05,P<0.01)。结论感冒清热颗粒对风寒表证小鼠有保护作用,表现为增加风寒表证小鼠的体重,抑制肺指数升高,减轻肺部炎症细胞浸润与出血,其机制与降低肺组织TNF-α,IL-6和IL^(-1)β有关。

丹酚酸类药物SAA004和SAA008通过抑制NF-κB和STAT3信号通路发挥抗炎作用

目的研究丹酚酸类化合物SAA004和SAA008的抗炎活性并探讨其潜在机制。方法采用卵黄囊显微注射内毒素(LPS)的炎症模型,通过生存分析观察SAA004和SAA008对注射LPS的斑马鱼的保护作用;通过H&E染色和荧光显微镜观察炎症细胞在卵黄囊的募集情况;通过q-PCR测量斑马鱼关键炎症细胞因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的转录水平;采用LPS诱导RAW264.7巨噬细胞建立炎症模型,通过ELISA检测RAW264.7巨噬细胞上清炎症因子IL-6和TNF-α的表达;通过Western印迹法检测RAW264.7巨噬细胞炎症相关信号通路(NF-κB和STAT3)中IκBα、STAT3的磷酸化及NF-κB-p65的表达;通过免疫荧光法检测RAW264.7巨噬细胞NF-κB-p65和p-STAT3的表达及分布。结果丹酚酸类药物SAA004和SAA008提高LPS刺激的斑马鱼生存率,减少LPS诱导的炎症细胞在卵黄囊部位的募集,降低炎症因子IL-6和TNF-α的转录水平;同时降低RAW264.7巨噬细胞中IL-6和TNF-α的表达水平,抑制IκBα和STAT3蛋白的磷酸化,抑制NF-κB-p65和p-STAT3蛋白的分布。结论丹酚酸类药物SAA004和SAA008通过抑制NF-κB和STAT3信号通路发挥抗炎作用。

白花蛇舌草抗肝癌作用

目的通过斑马鱼异体肝癌细胞移植模型和Hep3B细胞体外实验研究白花蛇舌草不同极性部位的抗肝癌作用。方法采用浸泡给药的方式确定白花蛇舌草的水、正丁醇、乙酸乙酯和石油醚提取部位对斑马鱼的体内毒性;建立斑马鱼异体荧光标记肝癌细胞移植模型,拍照记录斑马鱼卵黄囊内细胞荧光强度的变化,HE染色观察肝癌细胞的数目,评价白花蛇舌草不同极性部位提取物的体内抗肝癌作用;通过Hoechst染色观察斑马鱼卵黄囊内肝癌细胞的凋亡;通过MTT、Annexin V-FITC/PI双染实验和细胞周期分析检测白花蛇舌草乙酸乙酯部位对Hep3B细胞的细胞毒性、凋亡以及周期的影响;通过Western印迹法检测Hep3B细胞给药后PARP,Nur77,p-Nur77,JNK和p-JNK的表达。结果白花蛇舌草乙酸乙酯部位能显著抑制斑马鱼异体移植肝癌细胞的生长,时间、剂量依赖性地抑制Hep3B细胞增殖,促进其凋亡,并阻滞其细胞周期于G2/M期。此外,该提取物能降低Hep3B细胞中Nur77,p-Nur77,JNK和p-JNK的表达。结论白花蛇舌草乙酸乙酯部位可能通过抑制Nur77/JNK信号通路发挥抗肝癌作用。

穿心莲内酯磺化物的抗炎活性评价

目的利用斑马鱼炎症模型评价穿心莲内脂磺化物的抗炎活性。方法采用斑马鱼硫酸铜急性炎症模型,尾鳍横切局部炎症模型,LPS卵黄囊显微注射全身炎症模型评价穿心莲内酯磺化物的抗炎效果。结果FL-2,FL-3,FL-5,FL^(-1)0,FL-24和FL-33可显著抑制硫酸铜、尾鳍横切和内毒素诱导的斑马鱼中性粒细胞的迁移。结论FL-2,FL-3,FL-5,FL^(-1)0,FL-24和FL-33具有抗炎作用,提示其可以作为抗炎药物的候选药物。

消炎利胆软胶囊大鼠长期毒性研究

目的:观察连续灌胃消炎利胆软胶囊对大鼠所产生的毒性反应。方法:分别灌胃消炎利胆软胶囊2.5、1.0、0.25g/kg及等体积橄榄油90d后,随机取2/3动物进行血液学、血液生化学、脏器系数和病理组织学检查。剩余动物停药观察14d,再检测上述各项指标。结果:给药期,消炎利胆软胶囊组动物体重增长缓慢,WBC、NEU、PLT、ALT、TP、G、CHOL、肝、肾重量和系数、睾丸系数高于溶媒组,CR、TG、卵巢、子宫湿重低于溶媒组,病理切片肝脏有不同程度病理性损害;恢复期,大部分指标均在正常范围内波动,CR低于溶媒组,CHOL高于溶媒组。结论:消炎利胆软胶囊对大鼠有可逆性肝脏毒性,安全剂量为0.25g/kg。

苦豆碱激活胆碱能通路发挥抗结肠炎作用

目的利用小鼠结肠炎模型与Caco-2细胞屏障损伤模型评价苦豆碱的抗结肠炎作用及其机制。方法采用3%葡聚糖硫酸诱导小鼠结肠炎模型,采用脂多糖诱导Caco-2细胞屏障损伤模型;记录小鼠症状并进行疾病活动度指数(DAI)评分;通过HE染色检测结肠组织形态学变化并进行组织病理学评分;通过免疫组化,免疫荧光及Western印迹法检测结肠组织与Caco-2细胞occludin,ZO-1,claudin-1和E-cadherin的表达和分布;通过ELISA检测结肠组织与Caco-2细胞炎症因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达;通过Western印迹法检测结肠组织与Caco-2细胞中α烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)的表达。结果苦豆碱能减缓结肠炎小鼠的体重下降,改善其腹泻、便血、结肠缩短和上皮损伤等症状,提高DAI和组织病理学评分;恢复结肠组织及Caco-2细胞中连接蛋白occludin,ZO-1,claudin-1和E-cadherin的表达及分布;同时降低结肠组织及Caco-2细胞TNF-α和IL-6的表达水平;此外,苦豆碱剂量依赖性促进结肠组织与Caco-2细胞中α7nAChR的活化。结论苦豆碱可能通过激活胆碱能通路发挥抗结肠炎作用。

青藤碱对吗啡依赖斑马鱼的干预作用及机制研究

目的探讨青藤碱对吗啡诱导的斑马鱼条件性位置偏爱（CPP）及脑内μ阿片受体（zfmor）和δ阿片受体（zfdor1和zfdor2）mRNA表达的影响.方法将天然偏爱测定合格的50条斑马鱼分为空白对照组、吗啡模型组、吗啡＋美沙酮（40μg·g^-1）组、吗啡＋青藤碱低剂量（40μg·g^-1）组和吗啡＋青藤碱高剂量（80μg·g^-1）组,进行CPP训练.记录各组斑马鱼在伴药箱中的活动时间及运动总路程,real-timePCR检测斑马鱼脑内zfmor、zfdor1、zfdor2mRNA表达.结果与吗啡模型组比较,高剂量青藤碱和美沙酮干预后,斑马鱼训练前后在伴药箱中的活动时间及运动总路程的差值明显减少（P〈0.01）,斑马鱼脑内zfmor、zfdor1和zfdor2mRNA表达明显上调（P〈0.01）.结论青藤碱抑制斑马鱼吗啡依赖的形成可能与上调zfmor、zfdor1、zfdor2表达密切相关.