基于正交实验优化创伤弧菌金属蛋白酶融合蛋白的表达

目的:对创伤弧菌金属蛋白酶融合蛋白表达条件进行优化,从而获得高效稳定的金属蛋白酶原核表达系统。方法:质粒pET-32a-vvp转化E.coliBL21/DE3后,针对诱导过程中对工程菌表达蛋白产生影响的4个因素诱导时间、诱导温度、诱导剂浓度以及诱导时摇菌的转数,运用统计学软件进行正交实验设计,对结果进行直观分析及方差分析,并对实验得出的最佳搭配诱导条件进行验证。结果:直观分析表明摇菌转数的R值最大,其次为诱导时间和诱导温度,诱导剂IPTG浓度的R值最小;方差分析表明摇菌转数的P值小于0.05,而时间因素、温度及IPTG浓度的P值均大于0.05。结论:摇菌转数为主要因素(其为250r/m时,表达水平最高),其次为诱导时间,而诱导温度和诱导剂IPTG浓度对实验结果影响不明显。本实验的最佳搭配诱导条件为摇菌转数250r/m、诱导时间4h、诱导温度37℃、诱导剂IPTG浓度1mmol/L。在此诱导条件下,金属蛋白酶的表达量高达40.67%。