PCR三轨教学模式在流行病学教学中的探索与实践

传统流行病学教学模式普遍存在重理论、轻应用的困境,严重阻碍新医科高水平公共卫生和医防融合型人才的培养。为探索新教学模式,提升流行病学教学效果,文章以南方某医科大学为现场,选择2018级临床医学专业本科生为研究对象,其中第一临床医学院3个临床医学班采用三轨教学模式进行教学,第二临床医学院3个临床医学班采用传统教学模式教学。结果显示,三轨教学模式组学生的期末成绩、过程性评价成绩、课堂满意度和学习积极性高于传统教学模式组(P<0.001)。

深圳急性肠胃炎住院患儿中人副肠孤病毒临床和流行病学特征分析

目的研究深圳地区急性肠胃炎住院患儿中人副肠孤病毒(HPeV)的临床和流行病学特征。方法收集2017年1月到2018年12月深圳地区5岁以下急性肠胃炎住院患儿粪便标本(常规细菌鉴定为阴性)497份,实时荧光RT⁃PCR方法检测HPeV,通过巢式PCR扩增VP3/VP1连接区片段进行分型,同时对患儿的流行病学和临床资料进行统计分析。结果497例患儿中,HPeV的阳性率为8.2%;男性HPeV阳性率为7.6%,女性HPeV阳性率为9.4%(χ2=0.491,P=0.501);0~6月龄患儿HPeV阳性率最高,且92.7%的HPeV阳性患儿月龄<24个月;深圳夏季(7~9月)HPeV的阳性率最高。HPeV阳性患儿主要临床表现为中热(38.1~39℃),腹泻频率平均>6次/d,以黏液便为主,常伴有呕吐,呕吐频率平均每天5次,呕吐物以胃内容物为主。HPeV阳性患儿较阴性患儿在有无呕吐和呕吐物性状差异具有统计学意义。本研究中共检测到HPeV⁃1(HPeV⁃1A和HPeV⁃1B亚型)、3、4、5、6和14在内的6种基因型,其中HPeV⁃1B(56.1%)为优势流行株,其次是HPeV⁃1A(17.1%)、HPeV⁃3(7.3%)、HPeV⁃4(7.3%)、HPeV⁃5(4.9%)、HPeV⁃6(4.9%)和HPeV⁃14(2.4%)。系统进化分析结果显示,大部分深圳分离株与兰州和广州来源的参考株核苷酸序列一致性高。结论本研究首次在深圳地区5岁以下急性肠胃炎住院患儿粪便中检测到HPeV,且在2017年和2018年有稳定的感染率,检测到6种HPeV基因型别可能与急性肠胃炎相关,HPeV夏季检出率最高,好发于0~6个月患儿,可能是引起急性肠胃炎住院患儿呕吐胃内容物的病因。开展HPeV监测以更充分地掌握其在深圳地区的流行和临床特征,有助于进一步明确深圳地区住院患儿病毒性急性肠胃炎病原谱构成。

阿尔茨海默病患者外周血和海马组织共表达差异基因的生物信息学分析

目的:基于生物信息学筛选阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)患者外周血和海马组织中有共同表达趋势的差异基因,为AD的诊断、治疗靶点的筛选提供新的思路。方法:从基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)下载关于AD的数据集GSE97760(9例AD、10例健康对照)、GSE5281(10例AD、13例健康对照)进行生物信息学分析。分别筛选AD患者外周血和海马组织的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并确定2个数据集中有共同表达趋势的DEGs。对共表达DEGs进行基因本体论(Gene Ontology,GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析,构建蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)网络进一步筛选关键基因,并对关键基因进行验证。结果:基于对2个GEO数据集的综合分析,共筛选出669个共表达DEGs,包括64个上调DEGs、605个下调DEGs,GO和KEGG分析分别揭示了174个关键条目、40个关键通路,主要在RNA聚合酶的转录调控、神经胶质瘤通路等方面显著富集。通过PPI网络进一步筛选出10个与AD相关的关键基因TP53、PTEN、HNRNPC、EIF4G1、SF3B1、SRSF11、PIK3R1、RBM39、LUC7L3、RBM25,其中PTEN、HNRNPC、SF3B1、PIK3R1、LUC7L3在数据集GSE48350中得到了验证。结论:本研究筛选得出的5个值得进一步研究的关键基因(PTEN、HNRNPC、SF3B1、PIK3R1、LUC7L3),可作为AD诊断的潜在生物标志物。

临床医学不同学位类型的硕士研究生毕业去向比较分析--以广东某医科院校2017-2019届毕业生为例

目的:了解临床医学不同学位类型的硕士研究生毕业去向现状并提出建议.方法:选取某医科院校1710名临床医学硕士为研究对象,收集其入学基本信息、毕业去向及就业单位等信息,对数据进行描述性统计及logistic回归分析.结果:调整其他因素后,专业型硕士选择就业可能性是学术型硕士的1.56倍(OR=1.56,95%CI:1.16~2.10),且学位类型与入学方式对毕业去向的影响有交互作用(P<0.05),推免生中专业型硕士选择就业可能性是学术型硕士的4.31倍(OR=4.31,95%CI:1.65~11.33).在选择就业的1478名硕士中,86.4%就业单位为三甲医院,不同学位类型对硕士去往三甲医院就业的影响差异无统计学意义(P>0.05).结论:专业型和学术型硕士毕业去向符合培养预期,医科院校应根据临床医学不同学位类型的培养特点提供有针对性的就业指导.

应用噬菌体展示随机12肽库筛选诺如病毒抗原模拟表位

目的:利用Ph.D.-12噬菌体展示肽库筛选诺如病毒(NoV)的抗原模拟表位。方法:包被与GⅡ.4、GⅡ.6、GⅡ.17型NoV具有高特异性及中和能力较强的单链可变片段抗体(scFv),用Ph.D.-12噬菌体展示肽库进行3轮生物淘选。ELISA鉴定淘选所得噬菌体与scFv的结合活性及其与NoV P蛋白的竞争作用;阳性克隆测序后进行生物信息学分析,合成多肽鉴定其抗原性。结果:发现1段与GⅡ.6 VP1区同源性较高的氨基酸序列“MG-D-W”,综合分析提示其可能为GⅡ.6 NoV的抗原模拟表位,且合成的包含“MG-D-W”的多肽可竞争抑制P蛋白与人类组织血型抗原(HBGAs)受体的结合。结论:“MG-DW”是与NoV单链抗体高亲和力的肽段,可能模拟了GⅡ.6 NoV与scFv结合的抗原表位。

MDM2基因SNP309多态性与白血病发病风险相关性的Meta分析

目的:探讨MDM2基因第309位单核苷酸多态性(SNP309)与白血病发病风险之间的相关性。方法:通过检索英文和中文数据库获取文献。根据纳入和排除标准筛选,提取数据,采用Stata 12.0软件进行Meta分析,使用优势比OR及其95%可信区间(CI)来评估五种遗传模型的关联;使用假阳性报告概率(FPRP)、贝叶斯错误发现概率(BFDP)和Venice标准来评估具有统计学意义关联的可信度。结果:本研究共纳入16项病例对照研究,其中病例组2 900人,对照组6 876人。Meta分析结果显示,MDM2 SNP309多态性增加了亚洲人群白血病的发病风险(GG vs TT:OR=2.57;GT vs TT:OR=1.57;GG+GT vs TT:OR=1.78;GG vs GT+TT:OR=1.98;G vs T:OR=1.59),亚组分析结果显示,成人组、儿童与成人混合组、健康对照、匹配研究、非匹配研究以及急性髓系白血病(AML)中观察到MDM2突变增加白血病发病风险。排除低质量和HWD研究后进行敏感性分析,发现MDM2多态性与白血病发病显著相关。但此次Meta分析显示为“低可信度”。结论:MDM2 SNP309多态性与白血病发病风险显著相关,但其可信度分析显示为低可信度,其多态性与白血病发病的关联可能是由于假阳性结果所致。

健康医疗大数据驱动下的流行病学研究:机遇与挑战

本文回顾健康医疗大数据国家战略的形成与发展,结合流行病学研究的视角,探讨健康医疗大数据的时代机遇和现实挑战,为未来健康医疗大数据驱动下的流行病学研究提出新思路。

小核糖核酸病毒感染与人兽共患病的关系

小核糖核酸病毒作为重要的感染性病原体,其在基因突变和重组的驱动下表现出高度的遗传变异性,可感染从低等脊椎动物到哺乳动物等多种宿主,包括人类、非人灵长类动物、啮齿动物、蝙蝠、鸟类等。近年来,由新发病毒引起的人兽共患病受到公共卫生领域的广泛关注。鉴于小核糖核酸病毒种类的高度多样性,许多新发现的病毒属于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)的家族成员。目前,与人类疾病相关的小核糖核酸病毒在人群中的流行情况及其遗传多样性特征已有一定的研究基础。本文围绕小核糖核酸病毒的分子生物学特征、分类学以及可能引起人兽共患病的病毒属等进行综述,为进一步开展小核糖核酸病毒感染的预防控制和科学研究提供借鉴。

华南部分地区家猪流行性乙型脑炎病毒感染流行病学调查

目的了解华南部分地区家猪流行性乙型脑炎(简称乙脑)的感染现状,为乙脑的防制提供科学信息。方法2013年1-8月,从华南部分地区的广东、海南和江西部分地区共采集到465份当地6~8月龄、表观健康、未行乙脑疫苗免疫的家猪血清样本。进行家猪乙脑病毒(JEV)感染的流行病学调查,分别采用实时荧光定量PCR(TaqMan real-time RT-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)抗原和抗体检测方法,检测猪血清JEV核酸、抗原和抗体携带情况。结果合计共检测437份猪血清样本JEV携带情况,未发现JEV-RNA阳性样本。ELISA检测所有465份样本,43份JEV抗原(Ag)阳性,抗原阳性率为9.2%(43/465),445份JEV IgG抗体阳性,抗体阳性率为95.7%(445/465)。结论广东、海南和江西成年家猪存在一定程度的JEV感染情况,应引起重视,做好乙脑防控工作。

1990-2019年中国人群癌症归因于超重肥胖的疾病负担分析与模型预测

目的:分析1990-2019年中国癌症归因于超重肥胖的疾病负担变化趋势并对其未来10年的变化进行预测,为我国癌症防控提供参考依据。方法:基于2019年全球疾病负担(global burden of disease,GBD)平台,采用伤残调整寿命年(disability adjusted life years,DALYs)描述疾病负担,利用Joinpoint回归模型分析中国人群癌症归因于超重肥胖的疾病负担的时间变化趋势;通过自回归滑动平均混合(autoregressive integrated moving average,ARIMA)模型预测未来10年的疾病负担情况。结果:1990-2019年中国癌症归因于超重肥胖的DALYs负担呈上升趋势,平均年度变化百分比(average annual percentage of change,AAPC)为3.87%。亚组分析,肝癌、食管癌及女性子宫癌的标化DALYs率在2016年以来均呈上升趋势;其余种类癌症均呈持续上升趋势。预测结果显示,不同种类癌症归因于超重肥胖的标化DALYs率均持续增加,其中男性DALYs负担顺位前5分别为食管癌、肝癌、结直肠癌、胰腺癌、肾癌,女性DALYs负担顺位前5分别为乳腺癌、食管癌、子宫癌、肝癌、结直肠癌。1990年和2019年,男性DALYs率峰值均在70~<75岁,女性DALYs率峰值则由65~<70岁后移至70~<75岁。结论:1990-2019年以及未来10年中国癌症归因于超重肥胖的疾病负担总体呈上升趋势,其中男性食管癌、肝癌、结直肠癌、胰腺癌、肾癌,以及女性乳腺癌、食管癌、子宫癌、肝癌、结直肠癌的疾病负担最重。中老年和男性是重点关注人群,建议采取综合干预措施以降低肥胖导致的癌症疾病负担。

RT-PCR/CRISPR-Cas12a快速检测和区分SARS-CoV-2 Omicron BA.4/5变异株

目的建立一种基于CRISPPR-Cas12a基因编辑技术对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)奥密克戎BA.4/5变异株快速检测与鉴别的方法。方法结合逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)与CRISPR基因编辑技术,基于次优原间隔区相邻基序(suboptimal-PAM)设计奥密克戎BA.4/5变异株特异性的CRISPRRNA(crRNA),从而建立RT-PCR/CRISPR-Cas12a快速检测新冠病毒BA.4/5变异株的方法。本研究检测了43例新冠病毒阳性的临床样本(包括新冠病毒野生株以及变异株Alpha、Beta、Delta、奥密克戎BA.1和BA.4/5)以及20例新冠病毒阴性的临床样本(包括11种常见呼吸道病原体),并以测序结果为金标准计算PCR/CRISPR-Cas12a检测方法的ROC曲线下面积(AUC)以及灵敏度(SEN)、特异性(SPE)、一致性(Kappa)评价检测方法的性能。结果本研究筛选到两条特异性crRNA-1和crRNA-2,所建立的方法可在30min内快速特异地检测出SARS-CoV-2奥密克戎BA.4/5变异株,最低检测限为10copies/μL。此外,在检测感染11种常见呼吸道病原体的临床样本时均未观察到非特异性交叉反应。基于crRNA-1和crRNA-2的检测结果的灵敏度分别为97.83%、100%;特异性均为100%;ROC曲线下面积分别为0.9989和1.0;与Sanger测序方法的一致性分别为92.83%、96.41%。结论本研究采用CRISPPR-Cas12a基因编辑技术与逆转录聚合酶链式反应相结合,成功建立了一种快速检测与鉴别SARS-CoV-2奥密克戎BA.4/5变异株的新方法。其特异性强、灵敏度高、稳定性好,可用于新冠病毒奥密克戎BA.4/5变异株的批量检测与分型,可用于常规监测和跟踪SARS-CoV-2变异的传播。

我国流行病学学科发展70年的历程与成就

流行病学是在人类预防疾病和促进健康的实践中发展起来的一门学科,是公共卫生与预防医学的骨干学科。新中国成立70年来,随着人类疾病谱的变化和医学模式的转变,流行病学的应用范围由传染性疾病扩展到慢性非传染性疾病、伤害和其他健康相关领域。流行病学在疾病防控、科研教学、学会建设和期刊发展等方面取得了显著成就。本文拟梳理和概括我国流行病学学科发展历程,展示我国流行病学领域70年来的成就和贡献,探讨未来流行病学的学科发展方向,为我国流行病学学科发展留下历史印迹。

广东地区蝙蝠携带登革热病毒、寨卡病毒以及狂犬病病毒的流行病学调查

目的了解广东地区蝙蝠携带狂犬病病毒、寨卡病毒以及登革热病毒情况。方法 2014-2016年分别在广州市和湛江市部分地区采集蝙蝠,取其血清和脑组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)、巢式聚合酶链反应(nested polymerase chain reaction,Nested PCR),酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和细胞培养分离检测所采标本中的狂犬病病毒、登革热病毒和寨卡病毒的感染情况。结果采集蝙蝠共174只,分属2科3个种:果蝠科的犬蝠属(Cynopterus sphinx)33只、蝙蝠科的普通伏翼属(Pipistrellusabramus)9只及高头蝠属(Scotophiluskuhlii)132只。分别取得血清、脑组织各174份。在犬蝠脑标本中检出登革热病毒阳性1份,阳性率0.06%(1/174),寨卡病毒、狂犬病病毒均未检出。结论广东两个地区的3种蝙蝠作为寨卡病毒、登革热病毒和狂犬病病毒宿主的可能性较小。

HIV传播簇的风险测量及公共卫生应对研究进展

开展HIV传播簇探测,及时、精准实施公共卫生应对和干预,是结束艾滋病流行的重要途径和方法。传播簇风险测量指标可分为基于传播簇既往增长的指标、基于传播簇成员特征分析的指标以及基于传播簇系统进化分析的指标三类。依据传播簇风险测量指标识别风险传播簇,将卫生服务拓展至与传播簇关联的尚未感染HIV者、既往确诊和尚未确诊的HIV感染者,可实现精准干预。本文对现有的HIV分子传播簇风险测量指标及其公共卫生应对措施进行综述,为我国艾滋病精准防控提供参考。

创伤弧菌快速检测试纸条的研制

目的研制一种敏感、特异、快速的免疫试纸条,用于创伤弧菌检测。方法用创伤弧菌（ATCC27562）菌体抗原免疫家兔,制备兔抗创伤弧菌多克隆抗体;采用柠檬酸盐还原法制备胶体金颗粒并标记多克隆抗体,纯化后滴加在玻璃纤维素膜上;在硝酸纤维素膜上包被兔抗创伤弧菌多克隆抗体和羊抗兔IgG,分别作为检测线和质控线;将处理后的硝酸纤维膜、玻璃纤维素膜与样品垫、吸水纸组装成试纸条,4℃保存并定期检测;设阳性及阴性对照,对本试纸条检测的灵敏度、特异性进行检测。结果将试纸条插入样品溶液中,20~30min内即可显示结果,其检测灵敏度为2×106CFU/ml;特异性检测显示本试纸条与溶血性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌等12种菌株均无交叉反应;稳定性检测表明该试纸条可4℃保存4个月。结论本研究构建出创伤弧菌多克隆检测试纸条,具有较高的灵敏度和较好的特异性,简便,20~30min即可获得检测结果,可用于创伤弧菌的快速检测。

超声造影与彩色多普勒超声评价产后胎盘植入的血流灌注

目的探讨并比较超声造影与彩色多普勒超声评价产后植入性胎盘血流灌注的价值。方法对34例在我院住院疑诊胎盘植入的患者,进行灰阶、彩色多普勒超声检查和超声造影检查,观察宫腔内病灶、子宫肌层、浆膜层的血流灌注情况及增强特征,记录造影剂到达时间和增强持续时间。并用手动法描记异常回声团的灰阶面积、彩色血流面积、超声造影增强面积。比较灰阶面积与造影增强面积以及彩色血流面积与造影增强面积的差异性。结果 34例患者宫内异常回声团呈快进慢出,高增强模式。异常回声团造影剂到达时间早于正常子宫肌层(11.3±1.2)s vs(12.8±3.0)s,(P=0.009),异常回声团增强持续时间长于正常子宫肌层(262.0±18.3)s vs(174.0±15.9)s;(P=0.00)。宫腔内部分病灶始终未见增强,经刮宫术和病理证实为坏死的胎盘组织和凝血块。灰阶面积大于超声造影增强面积,Z=2.67,P=0.007,差异有统计学意义;彩色血流面积小于造影增强面积,Z=5.176,P=0.000,差异有统计学意义。34例超声造影诊断胎盘植入,与病理或临床诊断标准符合。结论超声造影较彩色多普勒超声更准确地显示植入性胎盘周边及内部的血流灌注特征、面积及部位,为临床提供更精确的诊断信息,指导临床治疗。

逆向解剖法游离股骨/胫骨快捷制备小鼠骨髓细胞

背景:如何快速洁净地游离小鼠股骨和胫骨直接影响骨髓细胞缺血时间,虽文献报道可用手术刀片刮除、纱布和纸巾等器物协助去除肌肉组织。但对其具体操作技巧并无详细报道,也无统一简捷的方法。目的:寻找制备小鼠骨髓细胞快捷实用的方法,最大限度减少骨髓细胞缺血时间。方法:采用逆向肌肉剥离法由踝关节向髋关节逆行解剖,以镊子配合剪刀行"剪合-滑动-折转"3个动作,彻底去除附着于小鼠后肢股骨的肌肉组织,快捷制备骨髓细胞悬液。记录解剖骨骼和制备骨髓细胞的时间,所得骨髓细胞培养72h后光学显微镜观察,评价该制备方法的效果。结果与结论:骨骼解剖时间为(1.9±0.4)min,骨髓细胞悬液制备时间为(14.7±1.8)min;游离过程骨折断或髓腔破损率为0%;制备的骨髓细胞培养72h,细胞数量[(8.1±2.0)×107个]较培养前[(4.7±0.7)×107]明显增加(P<0.01),而活细胞比率在培养前(97.5±1.1)%和培养后(95.4±1.0)%无明显差异(P>0.05);镜下微生物污染率为0%,未见肌肉细胞等污染。结果显示该方法快捷实用、不易污染、操作容易程序化,具有很好的参考价值。

不同肥胖判定指标及其组合对预测高血压患病风险的效率评价

目的探讨和评价单项肥胖判定指标和各项肥胖判定指标联合使用对高血压患病风险的预测价值。方法对调查地区3 216名成年居民的体质指数(BMI)、腰围(WC)、腰臀比(WHR)、腰高比(WHtR)等结果进行横断面分析;通过建立Logistic回归模型,确立预测高血压的最优肥胖指标;分析各肥胖判定指标和各肥胖判定指标联合使用对预测高血压的ROC曲线,比较各ROC曲线下面积(AUC),探索预测高血压患病风险能力的最佳组合。结果 BMI、腰围、腰臀比和腰高比均为检出高血压的危险因素,男性OR值分别为1.46(95%CI:0.98~1.89)、1.72(95%CI:1.10~2.52)、1.81(95%CI:1.18~2.62)、2.05(95%CI:1.40~3.05);女性OR值分别为1.84(95%CI:1.34~2.52)、1.57(95%CI:1.08~2.43)、2.02(95%CI:1.24~3.10)、1.86(95%CI:1.21~2.78)。单项指标不同性别间AUC最大的指标均为腰高比,分别达到0.685和0.718,其AUC与BMI、腰围和腰臀比差异均有统计学意义,除女性腰高比的AUC> 0.7,其余均在0.5~0.7之间,诊断准确度较低。对各指标组合后,AUC随指标组合增多而增大,准确度较高,BMI&腰围&腰高比与腰围&腰高比、腰围&腰臀比&腰高比差异无统计学意义,其余差异均有统计学意义,且男性和女性的AUC均在BMI&腰围&腰高比组合达到最高值,分别达到0.703和0.740。结论单项指标中,腰高比为预测高血压患病风险的最佳指标,但预测准确性不高;BMI&腰围&腰高比组合可能是预测高血压患病风险的最佳组合;以腰高比为必选项的组合指标有助于提高高血压预测能力,同时应在健康教育和健康促进工作中引起重视。

寻常型天疱疮患者外周血T细胞受体β链可变区CDR3基因克隆谱型分析

目的:探讨寻常型天疱疮(PV)患者外周血T细胞受体(TCR)互补决定区(CDR3)基因谱型变化,了解克隆扩增的T细胞与自身免疫性疾病的相互关系。方法:采用免疫扫描谱型分析技术,分析6例正常人外周血单个核细胞TCRβ链可变区(BV)CDR3谱型分布特征以及6例PV患者CDR3谱型变化情况。结果:6例正常人TCRBVCDR3谱型均符合正态分布,6例PV患者TCRBVCDR3谱型均出现多态性降低,BV亚家族单/寡克隆增生。结论:PV患者外周血TCR可变区β链CDR3谱型异常可能与PV发病有关。

肿瘤及多种疾病患者血清P53蛋白和抗体检测

目的检测不同疾病患者血清P53蛋白和抗体的阳性率。方法采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清P53抗体,夹心ELISA法检测P53蛋白。结果血清P53蛋白总阳性率为3.73%,抗体总阳性率为12.98%。恶性肿瘤、良性肿瘤、非肿瘤性疾病患者的P53蛋白阳性率分别为4.20%、0%及3.74%;P53抗体阳性率分别为14.23%、4.41%及13.02%。卵巢癌阳性率最高(41.67%),其次为鼻咽癌(33.33%)、白血病(24.24%)。肝硬化、慢性乙型肝炎、慢性胆囊炎、结肠息肉、慢性阑尾炎等患者中也发现有血清P53蛋白和抗体阳性。结论血清P53蛋白和抗体作为一种无创性检测指标可用于肿瘤的辅助诊断及早期发现,但其实际应用价值尚需进一步评价。