气郁质与失眠相关性的病例对照研究(英文)

目的:通过对睡眠质量以及中医体质的调查探索失眠与气郁质之间的关系。方法:对168名16～80岁的志愿者用中医体质量表、匹兹堡睡眠质量量表(Pittsburgh SleepQuality Index,PSQI)、爱波沃斯嗜睡量表(Epworth Sleepiness Scale,ESS)以及深睡眠量表(Deep Sleep Scale,DSS)进行问卷调查。采用病例对照的方法分析气郁质和其他体质的睡眠质量和主要失眠症状。结果:分析结果显示气郁质患者睡眠障碍的症状主要表现为入睡困难(PSQI:OR=3.012,95%CI=1.310～6.923;DSS:OR=3.016,95%CI=1.358～6.709)以及早醒(PSQI:OR=3.545,95%CI=1.229～10.232;DSS:OR=2.742,95%CI=1.072～7.014);而其他体质的人群主要表现为多梦(PSQI:OR=2.419,95%CI=1.154～5.072;DSS:OR=2.561,95%CI=1.116～5.880)。失眠症状与气郁质的程度之间存在相关关系,分析结果显示气郁质越严重,其发生入睡困难、早醒的危险系数越高。结论:本研究结果显示气郁质与失眠之间存在显著的相关性,对失眠的治疗与康复可以从调节中医体质的角度做进一步的研究。

预防接种从业人员培训评价及成绩影响因素分类树分析

[目的]应用分类树模型分析广州市预防接种门诊从业人员培训考核成绩的影响因素。[方法]2003～2005年对广州市预防接种门诊从业人员进行培训考核,用分类树模型分析1 824名学员考核成绩的影响因素。[结果]23期培训班考试成绩为61.0±12.1分,影响因素分析的分类树图中共有23个中间结,24个终结点。10分以上的预测因子依次是年龄(100分)、专业工作年限(45.84分)、是否中级职称(20.72分)、是否本科及以上(16.93分)、是否大专(13.99分)、是否初级(11.93分)。[结论]培训成绩维持在一个相对稳定的水平,培训的重点对象应该是年龄大于42.5岁而专业工作年限低者,可因材施教,专门为这部分人群安排相应内容及形式的培训。

HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者肝脏病理改变及相关因素分析

目的：探讨HBeAg阴性的慢性乙型肝炎（CHB）患者的肝脏病理特点及其相关因素。方法：选择134例符合抗病毒治疗条件的HBeAg阴性的CHB患者，行肝穿刺活检，常规苏木素一伊红染色及嗜银染色后．采用改良的Knodell HAI评分系统进行病理分析，并检测患者血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、HBVDNA、乙型肝炎血清标志物以及乙型肝炎病毒基因型。均数比较采用t检验和方差分析，非参统计采用Kruskal—Wallis检验．用多元线性回归方法分析与肝脏炎症活动和纤维化相关的因素。结果：134例HBeAg阴性CHB患者炎症活动指数（HAI）按轻度（4～8分）、中度（9～12）和重度（13～18）炎症分组，3组中病例数分别为36例（26．9％）、35例（26．1％）、63例（47．0％）。纤维化评分〈3分和≥3分的病例数分别为25例（18．7％）和109例（81．3％）。患者血清ALT水平和肝脏纤维化是肝脏炎症活动度的相关因素（t=6．687，P〈0．01；t=3．478，P〈0．01）；而患者年龄和肝脏炎症活动度是肝脏纤维化的相关因素（t=3．587，P〈0．01：t=7．136．P〈0．01）。患者性别、乙型肝炎病毒载量、乙型肝炎病毒基因型和HBeAb状态与肝脏病理改变无明显相关。结论：本研究HBeAg阴性的CHB患者中，肝脏病理改变以中、重度肝炎居多，患者血清ALT水平越高．肝脏炎症活动越重，患者年龄越大，肝脏纤维化程度越重。

外来传染病信息采集系统的构建

目的 建立外来传染病信息采集系统,为外来传染病防控提供参考。方法 从外来传染病的相关文献、权威网站以及相关著作中收集并整理信息,采用MySQL作为后台数据库、 JAVA语言作为底层设计开发外来传染病信息采集系统。结果 收集整理了25种外来传染病信息,成功构建信息采集系统,涵盖传染病病原、传播途径、传入时间和地点、诊断依据、临床特征、特异性治疗方法、防控方法等信息。结论 外来传染病信息采集系统的构建能为外来传染病疫情防控提供知识保障,提升防疫人员疫情处置能力。

寨卡病毒感染HUVECs和SH-SY5Ys激活炎症因子表达及诱导细胞凋亡和焦亡的研究

目的观察寨卡病毒感染HUVECs和SH-SY5Ys后引起炎症因子的变化,以及诱导细胞死亡的方式。方法用寨卡病毒感染HUVECs和SH-SY5Ys,在不同时间点收集细胞培养上清并提取细胞总RNA和细胞总蛋白。采用Luminex xMAP技术检测上清中GM-CSF、IL-6、IL-8、TNFα、CCL-2、MDC、CCL-5、INFα、MDC、IL-12p70细胞因子含量;采用荧光定量PCR检测目的基因在mRNA水平的相对表达量;采用Western blot检测目的基因在蛋白水平的相对表达量;采用CCK-8检测细胞活力;采用LDH释放试验检测细胞膜损伤程度;采用流式细胞术检测细胞Annexin V-FITC/PI双标染色细胞分群。结果寨卡病毒感染HUVECs和SH-SY5Ys后引起GM-CSF、IL-6、IL-8、TNFα、CCL-2、CCL-5分泌增加,荧光定量PCR结果与Luminex xMAP检测结果一致;寨卡病毒感染HUVECs和SH-SY5Ys 72h后焦亡相关基因在mRNA水平表达增加,焦亡相关蛋白被激活,细胞活力下降50%,细胞膜完整性丧失,转染siRNA-NLRP3或加入NLRP3抑制剂MCC950、Caspase-1抑制剂VX-765后再感染寨卡病毒焦亡相关蛋白活性降低;寨卡病毒感染HUVECs后凋亡相关蛋白表达增加,流式检测凋亡细胞群占比增加。结论寨卡病毒感染HUVECs和SH-SY5Ys后引起GM-CSF、IL-6、IL-8、TNFα、CCL-2、CCL-5表达增加,可能与寨卡病毒引起的炎症因子风暴相关;寨卡病毒感染两种细胞后激活Caspase-1引起的细胞焦亡部分依赖于NLRP3炎症小体途径;寨卡病毒感染HUVECs同时引起依赖于Caspase-3的细胞凋亡。

VX-11e对寨卡病毒吸附与复制影响的研究

目的研究ERK2抑制剂VX-11e对寨卡病毒的吸附、复制的影响,检测相关基因的表达以确定其作用机制。方法采用MTT法检测VX-11e对细胞的毒性。对HBMEC和Vero细胞进行不同浓度以及在不同孵育病毒时间段VX-11e处理,在不同的时间点收样并提取细胞RNA与总蛋白,应用实时荧光定量PCR检测病毒E基因、ERK、RSK、TYRO3、AXL mRNA的表达量,应用免疫荧光印迹试验检测病毒NS1蛋白、ERK与RSK总蛋白及其磷酸化蛋白的表达量,分析VX-11e对寨卡病毒复制的影响。结果 HBMEC和Vero细胞在0~15μmol/L VX-11e作用下存活率均大于90%。寨卡病毒感染HBMEC和Vero细胞后加入VX-11e,细胞内的病毒mRNA与蛋白表达水平均显著下降,随着药物浓度的增加病毒表达量也随之减少。同时VX-11e会引起ERK与RSK的mRNA、总蛋白与磷酸化蛋白表达水平不同程度下降,具有浓度依赖性。但对AXL与TYRO3的mRNA表达水平无显著影响。只在孵育病毒前与孵育过程中加入VX-11e,病毒表达量不受影响,孵育病毒后加入药物组病毒mRNA表达水平大幅减少。结论 VX-11e对HBMEC和Vero细胞在一定的浓度范围内无明显毒性,在此浓度范围内药物对寨卡病毒具有明显的复制抑制作用,并且具有浓度依赖性。VX-11e不影响病毒对细胞的粘附,主要是通过抑制病毒在细胞内的复制起抑制病毒增殖的作用,在mRNA和蛋白质水平上抑制细胞ERK和RSK的表达。

中东呼吸综合征冠状病毒ORF5及其突变型基因真核表达载体的构建与表达

目的对中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)ORF5及其突变型基因进行真核表达载体的构建与表达,为进一步研究ORF5作用机制奠定基础。方法将MERS-CoV野生ORF5基因序列(KT036372),截短ORF5(ORF5△)基因序列(KT036373)以及融合ORF5(ORF5+)基因序列(KT036374)克隆至真核表达载体质粒pEGFP-N1中,构建目的基因与EGFP融合表达质粒。采用定点突变技术在ORF5与EGFP之间添加终止密码或移码突变,并将ORF5、ORF5△、ORF5+蛋白126位、136位起始密码子突变为终止密码子。将测序正确的质粒转染HEK-293T细胞,Western blot检测相应蛋白的表达情况。结果成功构建ORF5、ORF5△、ORF5+真核表达载体。ORF5与EGFP融合蛋白在荧光显微镜下可见强荧光,但Western blot仅能检出EGFP蛋白,未能检出完整的融合蛋白;当ORF5与EGFP之间加入终止密码或移码突变后,仍能够检出EGFP蛋白。ORF5△、ORF5+与EGFP融合蛋白成功表达,以EGFP为抗原,ORF5△、ORF5+可检出多种不同分子质量蛋白,126位终止后仍可检出多种不同分子质量蛋白,136位终止后ORF5△缺少1种目的蛋白。结论成功构建MERS-CoV野生、截短以及融合ORF5的真核表达质粒。野生ORF5蛋白表达机制复杂,该蛋白可能存在类似内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)的特殊功能。变异体ORF5的表达存在多个翻译起始位点,其作用机制及功能需进一步研究。

真核表达ZIKA病毒全基因组感染性克隆的建立

目的构建含有ZIKA病毒全基因组的载体,在真核细胞中产生具有复制能力的ZIKA病毒。方法将ZIKA病毒全长基因组序列、CMV启动子、内含子、HDV核酶、SV40终止子序列利用PCR的方法进行拼接,应用重组技术将ZIKA全基因组序列克隆至细菌人工染色体载体pBAC11中,产生重组子pBAC-ZIKAi。将pBAC-ZIKA转染293T细胞中进行ZIKA病毒拯救,7 d将上清用0.45μm滤膜滤过后(ZIKA病毒P0代)感染Vero细胞(产生ZIKA病毒P1代),依此进行传代培养。应用荧光定量PCR、TCID50、噬斑实验等技术检测ZIKA拯救病毒的复制能力、致病力与野生病毒的差别。结果含有内含子的ZIKA全基因组序列的感染性克隆转染293T细胞后产生具有复制能力的病毒,并且在第5代病毒仍稳定存在引入的G3128A鉴定标记。分别用拯救病毒与野生病毒感染Vero细胞,用荧光定量PCR检测细胞内病毒RNA,显示拯救病毒的复制能力与野生病毒无明显差别。TCID50检测上清中的病毒滴度也相似。噬斑试验中比对两种病毒形成的噬斑均为大小一致、均匀的圆形,提示两者致病性一致。结论通过真核表达系统构建的全长ZIKA病毒基因组感染克隆具有复制能力,为ZIKA病毒的反向遗传学研究提供了理论基础。