肠道病毒71型VP1～VP4基因克隆及其表达产物的免疫原性

目的克隆并表达肠道病毒71型VP1~VP4蛋白基因,初步鉴定其免疫原性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1~VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物用8 mol/L尿素洗涤及Ni柱亲和层析纯化后,用肠道病毒71型免疫兔血清和柯萨奇病毒A16型免疫兔血清对重组蛋白进行Western blotting及ELISA鉴定。结果构建的重组质粒pQE30a/VP1~VP4经IPTG诱导,重组蛋白VP1~VP4高效表达并纯化成功,经Western blotting及ELISA证实重组蛋白VP1~VP4可以被免疫兔血清特异识别。结论肠道病毒71型VP1~VP4蛋白表达载体在大肠杆菌M15中高效表达。纯化产物具有较强的免疫原性,为今后EV71亚单位疫苗的研究和检测试剂盒提供了参考。

血浆Lp-PLA2水平与脉搏波传导速度相关性研究

目的探讨血浆脂蛋白相关性磷脂酶A2(Lp-PLA2)水平与脉搏波传导速度(PWV)的相关性。方法采用横断面研究方法,收集136例排除既往存在心脑血管事件社区人群,检查所有入选者空腹血浆Lp-PLA2水平及PWV,同时收集其他人口学资料和实验室数据。依据血浆Lp-PLA2界值(175 ng/m L),将所有入选者分为正常组(76例)和升高组(60例),比较两组人群基线资料、以及采用多重线性回归分析Lp-PLA2水平与PWV相关性。结果与正常组相比,升高组人群糖尿病和高血压百分率、血浆CRP及PWV值均较高,差别具有统计学意义(P<0.05),其余各指标两组间无明显差别。多重线性回归分析提示年龄、吸烟、糖尿病、高血压及血浆Lp-PLA2水平均与PWV具有明显相关性(P<0.05),是PWV独立危险因素,而其他传统危险因素如空腹血糖、胆固醇和甘油三酯、血浆CRP水平等与PWV无明显相关性。结论血浆Lp-PLA2水平升高与PWV具有明显相关性,降低血浆Lp-PLA2水平是否能够改善大动脉弹性、降低PWV值应予以探讨。

加尾引物多重PCR技术检测Y染色体微缺失

目的设计加尾引物多重PCR策略,并采用此技术建立一种快速检测Y染色体15个STS位点微缺失的多重PCR方法。方法以Y染色体无精子因子(azoospermia factor,AZF)区域15个特异性序列标签位点(sequence-tagged site,STS)为扩增子,根据加尾引物多重PCR策略设计5'端加尾引物,建立一种Y染色体微缺失多重PCR体系;并检测18例已知样本和112例临床样本观察其灵敏度与准确性。结果基于此策略的多重PCR体系优化过程简单快速,建立的多重PCR检测体系稳定可靠,各目的条带的电泳分析亮度基本一致;18例已知样本的检测结果与靶值相符;112例临床样本的检测结果也与对照方法一致。结论本研究设计的加尾引物策略可提高多重PCR扩增效率,简化优化过程,为其他多重PCR检测体系的设计与建立提供参考和借鉴;建立的Y染色体AZF15个STS位点微缺失多重PCR检测方法结果稳定,可供临床样本的快速检测。