逆转录重组酶介导的新型冠状病毒可视化快速检测方法的建立

目的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)传播迅速,对经济造成威胁。研究快速检测方法,为其检测建立新的方法储备。方法根据严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(N)基因、刺突蛋白(S)基因及开放阅读区(ORF1ab)基因保守区序列结合逆转录重组酶介导的等温扩增(RT-RAA)和荧光定量、胶体金侧向流免疫层析试纸条(LFD)建立逆转录重组酶介导的等温扩增荧光法(荧光RT-RAA法)和试纸条法(RT-RAA-LFD法)并进行优化,分别以构建的N、S、ORF1ab基因质粒为模板评估这两种方法的灵敏性和重复性;对其他冠状病毒质粒[如HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)、SARS]模板进行检测,验证这两种方法的特异性。结果两种检测方法均可在39℃恒温条件下12 min内完成检测。荧光RT-RAA法中,ORF1ab基因可检测至10^(0)拷贝数,N、S基因可检测至10^(1)拷贝数。RT-RAA-LFD法中,3种基因均可检测至10^(3)拷贝数。两种方法与其他类型的冠状病毒无交叉反应,具有良好的特异性。结论RT-RAA法和LFD法检测时间短并具有较好的特异性、灵敏性和重复性,可用于SARS-CoV-2的快速筛查、诊断和监测。