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沉默SOCS1联合rAAV/PSA基因修饰的树突状细胞疫苗治疗前列腺癌的实验研究
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作者 宋浩杰 宋琴 +4 位作者 施为建 吕成伟 蒋凤莲 王丽 李全泳 《河北医药》 CAS 2023年第20期3056-3060,共5页
目的研究沉默细胞因子信号抑制因子1(suppressor of cytokine signaling 1,SOCS1)基因联合rAAV/PSA基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)对前列腺癌LNCaP细胞的体外杀伤效应。方法应用重组腺相关病毒(rAAV)介导的RNA干扰技术沉默人D... 目的研究沉默细胞因子信号抑制因子1(suppressor of cytokine signaling 1,SOCS1)基因联合rAAV/PSA基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)对前列腺癌LNCaP细胞的体外杀伤效应。方法应用重组腺相关病毒(rAAV)介导的RNA干扰技术沉默人DC的SOCS1基因的表达,行Western blot检测基因沉默效果。rAAV-shRNA-SOCS1和rAAV/PSA感染DC,将DC细胞分为Control-DC组、rAAV/PSA-DC组、SOCS1(-)+rAAV/PSA-DC组。采用系列细胞因子诱导DC成熟,诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。流式细胞术检测分析各组DC细胞表型及CTL细胞的免疫表型;ELISA法检测各组DC细胞培养上清中细胞因子白介素-10(IL-10)及IL-12 p70的分泌水平,各组CTL细胞释放γ-干扰素(IFN-γ)的水平;LDH法检测各组CTL细胞对前列腺癌LNCaP靶细胞的杀伤效率。结果rAAV-shRNA-SOCS1感染DC后,可有效下调DC的SOCS1表达水平。与对照组比较,沉默SOCS1联合rAAV/PSA基因修饰的DC细胞培养上清中细胞因子IL-12 p70的分泌水平显著增高,IL-10的分泌水平明显下降(P<0.05);该组DC表面分子CD80、CD83和CD86的表达明显上调(P<0.05)。该组DC诱导的CTL中CD8^(+)、CD8^(+)CD69^(+)T细胞的比例明显增高,而CD4^(+)T细胞、CD4^(+)CD25^(+)FoxP3^(+)Treg细胞的比例显著降低(P<0.05),IFN-γ的释放水平明显增高(P<0.05),对PSA阳性的前列腺癌靶细胞LNCaP具有更强的杀伤活性(P<0.05),且具有抗原特异性。结论沉默SOCS1联合rAAV/PSA基因修饰的DC疫苗可以产生高效而特异性的抗前列腺癌免疫效应。 展开更多
关键词 细胞因子信号抑制因子1 基因沉默 腺相关病毒 前列腺癌特异性抗原 前列腺癌 疫苗
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公共实验研究平台的管理探讨 被引量:7
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作者 胡子有 张兰兰 +2 位作者 颜晓慧 曾勇 吴炳义 《实验科学与技术》 2013年第3期145-146,187,共3页
公共实验研究平台是高校、医院进行科研的重要场所,不少高校或医科大学附属医院虽然都设有公共实验平台——中心实验室,但多数实验室在管理和运行中,存在较多难题。文中以南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心的成功运行经验为例,... 公共实验研究平台是高校、医院进行科研的重要场所,不少高校或医科大学附属医院虽然都设有公共实验平台——中心实验室,但多数实验室在管理和运行中,存在较多难题。文中以南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心的成功运行经验为例,探讨公共实验研究平台的管理。 展开更多
关键词 中心实验室 实验室管理 研究平台 管理系统
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荧光定量PCR和环介导等温扩增方法检测隐球菌CAP10基因的比较研究 被引量:6
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作者 韩慧 胡子有 吴炳义 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期817-820,共4页
目的建立荧光定量PCR和环介导等温扩增技术(LAMP)检测隐球菌荚膜相关蛋白基因(CAP10)的方法,并比较和评价两种方法的优缺点。方法针对新型隐球菌CAP10基因序列,使用在线软件设计引物,并构建质粒标准品,优化反应条件后用荧光定量PCR和LAM... 目的建立荧光定量PCR和环介导等温扩增技术(LAMP)检测隐球菌荚膜相关蛋白基因(CAP10)的方法,并比较和评价两种方法的优缺点。方法针对新型隐球菌CAP10基因序列,使用在线软件设计引物,并构建质粒标准品,优化反应条件后用荧光定量PCR和LAMP两种方法检测定量的质粒,分析其敏感性和特异性,并检测临床标本。结果荧光定量PCR检测CAP10质粒的敏感性为6.8×101拷贝,LAMP方法的敏感性为6.8×103拷贝,PCR检测阳性率比LAMP方法高。两种方法特异性好,对脑膜炎奈瑟菌、白色念珠菌、热带念珠菌、黄曲霉、黑曲霉和大肠埃希菌的检测结果均为阴性。结论成功建立了检测CAP10基因的荧光定量PCR方法敏感性和特异性高,但是需要特殊仪器;LAMP方法敏感性较低,但其操作简单,无需特殊仪器和设备,加入核酸染料即能观察结果。两者均适用于新型隐球菌感染的检测。 展开更多
关键词 荧光定量PCR 环介导等温扩增技术 新型隐球菌 CAP10
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n-3多不饱和脂肪酸对坏死性小肠结肠炎保护作用的机制研究 被引量:2
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作者 姚芳 王晓睛 +3 位作者 李松霖 郑梦如 梁锦霞 谢芳 《现代消化及介入诊疗》 2021年第7期811-815,820,共6页
目的探讨n-3多不饱和脂肪酸对坏死性小肠结肠炎(NEC)保护作用的机制。方法将30只3日龄的C57BL/6J乳鼠随机分成DF组、NEC组及n-3补充组(n=10)。观察每组小鼠NEC发生情况与严重程度;组织学检测乳鼠肠道组织损伤情况;采用ELISA检测乳鼠肠组... 目的探讨n-3多不饱和脂肪酸对坏死性小肠结肠炎(NEC)保护作用的机制。方法将30只3日龄的C57BL/6J乳鼠随机分成DF组、NEC组及n-3补充组(n=10)。观察每组小鼠NEC发生情况与严重程度;组织学检测乳鼠肠道组织损伤情况;采用ELISA检测乳鼠肠组织IL-1β和TNF-α的分泌水平;利用qRT-PCR与Western Blotting方法检测ZO-1、claudin-4和claudin-7基因及蛋白的表达;采用CaCo2细胞株构建肠上皮细胞炎症模型,检测DHA对紧密连接蛋白表达水平的影响。结果与DF组相比,NEC组体重显著降低,而饲喂n-3多不饱和脂肪酸可显著缓解体重下降。与DF组相比,NEC组肠组织损伤严重,而n-3补充组较NEC组损伤程度显著减轻。与DF组相比,NEC组炎症因子水平显著上升,而n-3补充组较NEC组炎症因子水平下降显著。与DF组相比,NEC组乳鼠肠组织中ZO-1、claudin-4和claudin-7蛋白表达水平显著下降,而n-3多不饱和脂肪酸能促进紧密连接相关蛋白的表达。在CaCo2细胞炎症模型中,DHA能促进ZO-1、claudin-4和claudin-7蛋白的表达,并能维持紧密连接蛋白的正确分布。结论n-3多不饱和脂肪酸通过维持肠上皮细胞紧密连接减轻坏死性小肠结肠炎的发生发展。 展开更多
关键词 N-3多不饱和脂肪酸 坏死性小肠结肠炎 肠道屏障 紧密连接
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脑脊液细菌学基因诊断方法的研究进展
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作者 韩慧 胡子有 吴炳义 《医学综述》 2010年第18期2855-2857,共3页
颅内感染时脑脊液病原体的检查是早期诊断和治疗的关键,传统的细菌学诊断方法缺乏敏感性和特异性,而且操作费时,不能满足临床要求,以聚合酶链反应为基础的分子生物学诊断技术,已经越来越多地应用于细菌学的诊断,为颅内感染的早期诊断提... 颅内感染时脑脊液病原体的检查是早期诊断和治疗的关键,传统的细菌学诊断方法缺乏敏感性和特异性,而且操作费时,不能满足临床要求,以聚合酶链反应为基础的分子生物学诊断技术,已经越来越多地应用于细菌学的诊断,为颅内感染的早期诊断提供了有效手段。 展开更多
关键词 脑脊液 基因诊断 颅内感染
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槲皮素对胶质瘤U87细胞侵袭、迁移、增殖及其细胞周期的影响 被引量:12
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作者 苑召虎 胡子有 +3 位作者 张兰兰 颜晓慧 王惠丽 吴炳义 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期207-211,共5页
目的探讨黄酮类化合物槲皮素对人胶质瘤U87细胞侵袭、迁移、增殖及其细胞周期的影响。方法将U87细胞分成Q0、Q50、Q100和Q1504个组,Q0组加适量二甲亚砜(槲皮素溶剂)处理,Q50、Q100和Q150组槲皮素的浓度分别为50、100、150μmol/L。分别... 目的探讨黄酮类化合物槲皮素对人胶质瘤U87细胞侵袭、迁移、增殖及其细胞周期的影响。方法将U87细胞分成Q0、Q50、Q100和Q1504个组,Q0组加适量二甲亚砜(槲皮素溶剂)处理,Q50、Q100和Q150组槲皮素的浓度分别为50、100、150μmol/L。分别通过transwell体外侵袭实验、transwell体外迁移实验、Click-iT Edu test技术和流式细胞术检测槲皮素对其侵袭迁移能力,增殖能力及其细胞周期的影响。结果槲皮素处理36 h后,与对照组相比,Q50、Q100和Q150组的侵袭细胞比率分别为:52.08%、24.63%和13.13%,P均<0.05。槲皮素处理12 h后,与对照组相比,Q50、Q100和Q150的迁移细胞比率分别为:49.46%、26.78%和14.56%,P均<0.05。槲皮素处理24 h后,Q0、Q50、Q100和Q150组的增殖细胞百分比分别为25.21%、18.38%、16.74%和15.24%。G0/Gl期C6细胞所占比例分别为71.14%、72.71%、69.29%、66.47%,S期分别为25.32%、22.48%、21.96%、23.32%,G2/M期分别为3.53%、4.80%、8.75%、10.25%;Q100、Q150组的G2/M期细胞比例与Q0组比较,P均<0.05。结论槲皮素能明显降低胶质瘤细胞的侵袭迁移能力;并可通过阻断U87细胞的细胞周期进程来抑制其增殖。 展开更多
关键词 槲皮素 U87胶质瘤细胞 侵袭 迁移 增殖 细胞周期
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槲皮素对成年大鼠局灶性脑缺血后侧脑室室管膜下区神经干细胞增殖的影响 被引量:8
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作者 张兰兰 曹琼 +2 位作者 胡子有 颜晓慧 吴炳义 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1200-1203,共4页
目的观察槲皮素对成年大鼠局灶性脑缺血后侧脑室室管膜下区(SVZ)细胞增殖的影响。方法线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉阻塞模型,术后6h腹腔注射槲皮素(50mg/kg,1次/3d),术后4h腹腔注射BrdU(50mg/kg,1次/d),分别于缺血第7、14、21天采用免... 目的观察槲皮素对成年大鼠局灶性脑缺血后侧脑室室管膜下区(SVZ)细胞增殖的影响。方法线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉阻塞模型,术后6h腹腔注射槲皮素(50mg/kg,1次/3d),术后4h腹腔注射BrdU(50mg/kg,1次/d),分别于缺血第7、14、21天采用免疫荧光染色观察侧脑室SVZBrdU阳性细胞数。结果脑缺血第7天,缺血侧SVZBrdU阳性细胞较假手术组明显增多,第14天达峰值,第21天减少(P<0.01)。槲皮素组第7天时,缺血侧SVZBrdU阳性细胞亦明显增多,并随着缺血时间延长明显增加;与缺血组比较,槲皮素组7、14和21d缺血侧SVZBrdU阳性细胞数均显著增加(P<0.01),至21d仍保持高水平。结论槲皮素可维持成年大鼠局灶性脑缺血后侧脑室SVZ的细胞增殖在较高水平。 展开更多
关键词 槲皮素 侧脑室 室管膜下区 细胞增殖 脑缺血
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三氧疗法配合柳氮磺吡啶经结肠途径治疗溃疡性结肠炎 被引量:11
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作者 耿焱 王伟 +2 位作者 马强 彭莉琼 梁仲惠 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2683-2685,共3页
目的观察三氧疗法配合柳氮磺吡啶经结肠途径治疗轻、中度远段溃疡性结肠炎的效果。方法采用前瞻性随机对照试验,将符合入选标准的活动期轻、中度远段溃疡性结肠炎患者分成三氧加结疗组、结疗组及对照组各18例。3组均予柳氮磺吡啶2g/d,... 目的观察三氧疗法配合柳氮磺吡啶经结肠途径治疗轻、中度远段溃疡性结肠炎的效果。方法采用前瞻性随机对照试验,将符合入选标准的活动期轻、中度远段溃疡性结肠炎患者分成三氧加结疗组、结疗组及对照组各18例。3组均予柳氮磺吡啶2g/d,三氧加结疗组和结疗组经结疗机途径给药,三氧加结疗组加用三氧,对照组经灌肠途径给药。临床观察期4周,分别于第0、2、4周复查大肠镜,进行疾病活动度评价,第0、4周取活检进行组织学评价。结果三氧加结疗组临床症状缓解速度,以及组织学分级下降程度均优于单纯柳氮磺吡啶结疗和灌肠治疗组,治疗过程中无一例发生不良反应。结论三氧疗法经结肠途径治疗溃疡性结肠炎是可行,值得进一步研究。 展开更多
关键词 溃疡性结肠炎 结肠途径治疗系统 三氧疗法
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EB病毒抗体联合检测在鼻咽癌血清学诊断中的价值 被引量:18
9
作者 蔡永林 郑裕明 +7 位作者 王伟 魏轶 申雪翔 成积儒 吴英松 高健全 钟伟铭 李军 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2746-2748,共3页
目的评价VCA/IgA、EA/IgA、Rta/IgG和EBNA1/IgA等EB病毒抗体联合检测在鼻咽癌血清学诊断中的价值。方法收集211例初治鼻咽癌和203例相似症状的非鼻咽癌病例的血清,采用免疫酶法检测VCA/IgA及EA/IgA,酶联免疫吸附法检测Rta/IgG和EBNA1/Ig... 目的评价VCA/IgA、EA/IgA、Rta/IgG和EBNA1/IgA等EB病毒抗体联合检测在鼻咽癌血清学诊断中的价值。方法收集211例初治鼻咽癌和203例相似症状的非鼻咽癌病例的血清,采用免疫酶法检测VCA/IgA及EA/IgA,酶联免疫吸附法检测Rta/IgG和EBNA1/IgA。应用ROC曲线分析确定各抗体检测的最佳截断值,采用复合阳性判断方法评价联合检测对鼻咽癌的诊断价值。结果采用复合阳性判断方法,联合检测的敏感度及特异度比单项抗体的指标基本上均有提高。VCA/IgA+Rta/IgG+EBNA1/IgA组合的敏感度(98.1%)较其它3种组合高,特异度、准确度、约登指数及阳性预测值分别为88.7%、93.5%、0.868、90.0%;而EA/IgA+Rta/IgG+EBNA1/IgA组合的特异度(95.1%)、准确度(94.9%)、约登指数(0.899)及阳性预测值(95.2%)最高,敏感度为94.8%,显示其在鼻咽癌血清学诊断中可能具有更高的准确性。四抗体组合有最高的敏感度(98.6%),特异度、准确度、约登指数及阳性预测值分别为88.2%、93.5%、0.868、89.7%。结论抗立即早期抗原Rta/IgG抗体、抗早期抗原EA/IgA抗体、抗晚期抗原VCA/IgA和抗潜伏期抗原EBNA1/IgA抗体联合检测可更大范围地反映EB病毒溶解感染期及潜伏感染期的抗原表达,具有很好的互补作用,是鼻咽癌血清学诊断的合适组合。 展开更多
关键词 鼻咽癌 EB病毒 抗体 血清学诊断
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血清外泌体miR-21在肺癌中的表达水平及其诊断效能 被引量:15
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作者 颜晓慧 安泰学 +3 位作者 覃思华 徐咏 黄依瑶 张涵 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第16期2666-2669,共4页
目的探索外泌体miR-21在肺癌患者血清中的表达水平及诊断效能。方法收集南方医院肺癌患者94例,肺结核患者29例,健康对照26例。纯化鉴定血清外泌体,提取miRNA,进行RT-PCR,比较各组间miR-21表达水平。利用ROC曲线评价外泌体miR-21诊断效... 目的探索外泌体miR-21在肺癌患者血清中的表达水平及诊断效能。方法收集南方医院肺癌患者94例,肺结核患者29例,健康对照26例。纯化鉴定血清外泌体,提取miRNA,进行RT-PCR,比较各组间miR-21表达水平。利用ROC曲线评价外泌体miR-21诊断效能。结果纯化样品具备已有报道的外泌体的典型特征。外泌体miR-21表达水平在肺癌、肺结核、健康对照3组间存在显著性差异;外泌体miR-21在肺癌组中显著升高,肺结核组显著降低。肺癌组中,早、晚期肺癌患者外泌体miR-21与健康对照间均存在显著性差异。外泌体miR-21的ROC曲线的曲线下面积为0.702,且具有较好的特异性。结论血清外泌体miR-21具有较高的诊断效能,有望作为诊断标志物,辅助肺癌临床诊断。 展开更多
关键词 外泌体 血清 肺癌 诊断标志物 MIR-21
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环介导等温扩增技术检测粪便幽门螺杆菌方法的建立及应用 被引量:7
11
作者 韩慧 胡子有 +3 位作者 姚芳 曾勇 吴炳义 熊婧 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第19期3485-3487,共3页
目的:建立一种快速、简单的检测粪便幽门螺杆菌的环介导等温扩增方法(loop-medi atedisotherma lamplification,LAMP)。方法:针对幽门螺杆菌的16SrRNA基因设计4条特异性引物(2条内引物和2条外引物),优化反应条件后,对方法的敏感性、特... 目的:建立一种快速、简单的检测粪便幽门螺杆菌的环介导等温扩增方法(loop-medi atedisotherma lamplification,LAMP)。方法:针对幽门螺杆菌的16SrRNA基因设计4条特异性引物(2条内引物和2条外引物),优化反应条件后,对方法的敏感性、特异性进行评估,并评估检测粪便模拟标本的敏感性。结果:使用LAMP方法可以在2h内得到检测结果,加入染料后阳性结果为绿色,电泳后有明显的阶梯状条带。幽门螺杆菌的基因组DNA检测敏感性为12pg,是普通PCR的10倍,对模拟粪便标本进行检测,检测限为102CFU/mL。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌的检测结果均为阴性。结论:本研究建立的检测幽门螺杆菌的LAMP方法敏感性高、特异性强,操作简单,不需要特殊设备,是一种很有前景的检测方法。 展开更多
关键词 螺杆菌 幽门 环介导等温扩增技术 16srRNA
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TaqMan探针法荧光定量PCR检测脑脊液细菌方法的建立及应用 被引量:7
12
作者 韩慧 胡子有 +1 位作者 姚芳 吴炳义 《现代检验医学杂志》 CAS 2011年第1期6-8,共3页
目的建立TaqMan探针法荧光定量PCR检测方法,用于脑脊液标本细菌的快速检测。方法针对细菌的16srRNA基因,设计合成细茼的通用引物和革兰阳性菌、革兰阴性菌分型探针,通过构建质粒和制作脑脊液模拟标本来研究引物和探针的检测特异度和... 目的建立TaqMan探针法荧光定量PCR检测方法,用于脑脊液标本细菌的快速检测。方法针对细菌的16srRNA基因,设计合成细茼的通用引物和革兰阳性菌、革兰阴性菌分型探针,通过构建质粒和制作脑脊液模拟标本来研究引物和探针的检测特异度和敏感度。结果两种革兰分型探针只对相应的细菌可以检测到荧光信号,乙肝病毒DNA、白色念珠菌及人基因组DNA检测结果均为阴性,此方法最低可以检测到10个拷贝的质粒DNA以及100CFU/ml的金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌。结论TaqMan探针法荧光定量PCR检测细菌的特异度和敏感度高,检测快速,对脑脊液细菌的早期诊断有重要意义。 展开更多
关键词 TAQMAN探针 荧光定量PCR 脑脊液 细菌
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焦磷酸测序法在败血症常见病原体检测中的应用 被引量:3
13
作者 胡子有 韩慧 +1 位作者 曾勇 吴炳义 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1053-1056,共4页
目的将焦磷酸测序技术应用于败血症常见病原体的检测鉴定。方法根据细菌16S rRNA序列的特点,设计焦磷酸测序用的PCR扩增引物和测序引物,提取败血症常见病原体的基因组DNA,进行焦磷酸测序,分析获得的序列,进行比对,对病原体种类作出判断... 目的将焦磷酸测序技术应用于败血症常见病原体的检测鉴定。方法根据细菌16S rRNA序列的特点,设计焦磷酸测序用的PCR扩增引物和测序引物,提取败血症常见病原体的基因组DNA,进行焦磷酸测序,分析获得的序列,进行比对,对病原体种类作出判断。结果经焦磷酸测序可以获取有效长度28 bp的序列,使用该测序序列可以有效区分化脓性链球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷白杆菌、脑膜炎双球菌、沙门氏菌,但不能区分金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌。结论应用焦磷酸测序可以较有效地对败血症常见病原体的种类实现种属水平的区分。 展开更多
关键词 焦磷酸测序 败血症 病原体 16sRNA
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5-氟尿嘧啶对EdU方法检测细胞增殖准确性的影响 被引量:3
14
作者 王惠丽 陈志江 +2 位作者 姚芳 胡子有 吴炳义 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1495-1497,共3页
目的探讨EdU方法检测细胞增殖的准确性及其禁用药物。方法将对数生长期的LoVo细胞同时传代于60 mm培养皿中,放入37℃、5%CO2的培养箱中过夜,待其贴壁后更换加药的培养基,分为如下4组:对照组:未加任何药物处理;5-氟尿嘧啶(5-Fu)组:加入5-... 目的探讨EdU方法检测细胞增殖的准确性及其禁用药物。方法将对数生长期的LoVo细胞同时传代于60 mm培养皿中,放入37℃、5%CO2的培养箱中过夜,待其贴壁后更换加药的培养基,分为如下4组:对照组:未加任何药物处理;5-氟尿嘧啶(5-Fu)组:加入5-Fu 10 mg/L;Q50组:加入槲皮素浓度为50μmol/L;联合用药组:同时加入10 mg/L 5-Fu与50μmol/L槲皮素。作用48 h后,分别用EdU和MTT两种方法检测不同组中LoVo细胞的增殖率。结果 48 h后,对照组、5-Fu组、Q50组及联合用药组的增殖抑制率,MTT法检测结果依次为(0.00±0.00)%、(49.62±1.30)%、(25.09±3.17)%、(62.25±5.82)%,差异有统计学意义(P<0.05),EdU增殖检测结果依次为(52.45±6.69)%、(85.22±9.33)%、(29.52±6.10)%、(22.40±5.26)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EdU与MTT两种方法都能应用于细胞增殖的检测,EdU检测方法简单、准确。但EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物,对于一些通过抑制胸腺嘧啶生成发挥作用的药物,实验结果不准确,不宜采用此种方法进行检测。 展开更多
关键词 EDU MTT 细胞增殖
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槲皮素对胶质瘤C6细胞侵袭、迁移、增殖及其细胞周期的影响 被引量:3
15
作者 苑召虎 张彦 +4 位作者 王惠丽 姚芳 胡子有 颜晓慧 吴炳义 《医学研究杂志》 2013年第7期29-33,共5页
目的探究黄酮类化合物槲皮素对大鼠胶质瘤C6细胞侵袭、迁移、增殖及其细胞周期的影响。方法将C6胶质瘤细胞分成Q0、Q50、Q100和Q1504个组;Q0组加适量二甲亚砜处理,Q50、Q100和Q150组槲皮素的浓度分别为50、100和150μmol/L。分别通过tra... 目的探究黄酮类化合物槲皮素对大鼠胶质瘤C6细胞侵袭、迁移、增殖及其细胞周期的影响。方法将C6胶质瘤细胞分成Q0、Q50、Q100和Q1504个组;Q0组加适量二甲亚砜处理,Q50、Q100和Q150组槲皮素的浓度分别为50、100和150μmol/L。分别通过transwell体外侵袭实验,transwell体外迁移实验,Click-iT Edu test技术和流式细胞术检测槲皮素对其侵袭迁移,增殖能力及其细胞周期的影响。结果槲皮素处理36h后,Q50、Q100和Q150组的侵袭细胞比率分别为45.81%、13.63%和4.63%;与对照组(100%)相比,其侵袭细胞比率显著降低(P均<0.05)。槲皮素处理12h后,Q50、Q100和Q150的迁移细胞比率分别为:57.98%、33.60%和11.79%;与对照组(100%)相比,其迁移细胞比率显著降低(P均<0.05)。槲皮素处理24h后,Q0、Q50、Q100和Q150组的增殖细胞百分比分别为45.37%、21.49%、7.30%和1.12%;G0/Gl期C6细胞所占比例分别为60.86%、52.11%、35.64%、39.63%,S期分别为34.39%、40.86%、63.48%、60.36%,G2/M期分别为4.76%、6.87%、0.88%、0.11%;Q50、Q100、Q150组的G0/Gl、S、G2/M期细胞比例与Q0组比较,具有显著的统计学差异(P均<0.05);结论研究发现,槲皮素能明显降低胶质瘤细胞的侵袭迁移能力;并可通过阻滞C6细胞的细胞周期进程来抑制其增殖。 展开更多
关键词 槲皮素 C6胶质瘤细胞 侵袭 迁移 增殖 细胞周期
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槲皮素诱导U87细胞凋亡及对MDM2-p53负反馈调节的影响 被引量:2
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作者 王惠丽 苑召虎 +3 位作者 陈志江 姚芳 胡子有 吴炳义 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期686-689,共4页
目的探讨槲皮素对人脑胶质瘤U87细胞凋亡及MDM2-p53负反馈调节的影响。方法以不同浓度槲皮素(50、100、150μmol/L)处理U87细胞,分别采用流式细胞术、RT-PCR及Western blotting技术检测槲皮素对U87细胞凋亡的影响、MDM2mRNA及p53、caspa... 目的探讨槲皮素对人脑胶质瘤U87细胞凋亡及MDM2-p53负反馈调节的影响。方法以不同浓度槲皮素(50、100、150μmol/L)处理U87细胞,分别采用流式细胞术、RT-PCR及Western blotting技术检测槲皮素对U87细胞凋亡的影响、MDM2mRNA及p53、caspase-3蛋白的表达。结果槲皮素处理U87细胞48 h后,流式细胞术结果显示细胞凋亡率:Q50组为(22.53±0.72)%,Q100组为(29.06±0.81)%,Q150组为(31.5±0.45)%,明显高于对照组(12.40±0.70)%(P<0.05)。随着槲皮素浓度的升高,泛素连接酶MDM2 mRNA表达量升高,在蛋白水平发现,槲皮素处理后,caspase-3凋亡蛋白表达增加,p53蛋白的表达降低。结论槲皮素可以促进人脑胶质瘤U87细胞凋亡,通过凋亡蛋白caspase-3发挥作用,并且在凋亡过程中可以发生MDM2-p53的负反馈调节。 展开更多
关键词 槲皮素 U87 凋亡 MDM2-P53
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人乳头瘤病毒感染与宫颈病变程度的关系 被引量:8
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作者 颜晓慧 林金端 《检验医学》 CAS 2017年第8期700-703,共4页
目的分析不同病变程度的宫颈脱落细胞人乳头瘤病毒(HPV)的感染特点,探讨HPV感染与宫颈病变程度的关系。方法采用多重聚合酶链反应(PCR)-反向点杂交(RDB)技术对53例宫颈正常或轻微炎症、79例宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级、42例CINⅡ级、87例... 目的分析不同病变程度的宫颈脱落细胞人乳头瘤病毒(HPV)的感染特点,探讨HPV感染与宫颈病变程度的关系。方法采用多重聚合酶链反应(PCR)-反向点杂交(RDB)技术对53例宫颈正常或轻微炎症、79例宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级、42例CINⅡ级、87例CINⅢ级、54例浸润性宫颈癌(ICC)患者的宫颈脱落细胞进行23种HPV基因分型检测,统计HPV感染特点与宫颈病变程度的关系,并分析不同基因型HPV对宫颈病变等级的影响。结果宫颈病变等级与HPV感染有一定的相关性(r=0.500,P<0.05);HPV检出率随着宫颈病变等级的增加而增加(χ~2=43.322,P<0.05),除CINⅢ组与ICC组间HPV检出率差异无统计学意义(χ~2=0.003,P>0.05)外,其他各等级组间的检出率差异均有统计学意义(P<0.01)。HPV多重感染与宫颈病变等级呈一定的等级相关(r=0.496,P<0.05);除ICC组外,随着宫颈病变等级的增加,HPV多重感染的检出率逐渐增加(P<0.01)。随着宫颈病变等级的增加,高危型HPV的检出率及构成比明显增加。不同基因型对宫颈病变等级的影响差异有统计学意义(χ~2=46.775,P<0.05)。对宫颈病变影响较大的5种HPV亚型分别为16型、18型、31型、33型和58型。结论宫颈病变等级与HPV感染的型别、多重感染有关,不同病变程度的宫颈脱落细胞HPV的基因型构成特点不同,随着宫颈病变等级的增加,高危型HPV的检出率及构成比明显增加。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 宫颈上皮内瘤变 宫颈癌 基因分型
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阿片受体δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达 被引量:1
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作者 胡子有 漆松涛 +2 位作者 张遐 颜晓慧 吴炳义 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1442-1444,共3页
目的构建带FLAG标签的大鼠δ型阿片受体的pIRES2-EGFP表达质粒(δ-FLAG-pIRES2-EGFP),并实现其在CHO细胞中的表达。方法以含大鼠全长δ阿片受体基因的δ-pMD20-T载体为模板,设计引物并行PCR扩增,在δ基因C端引入FLAG标签,AT克隆至pMD20-... 目的构建带FLAG标签的大鼠δ型阿片受体的pIRES2-EGFP表达质粒(δ-FLAG-pIRES2-EGFP),并实现其在CHO细胞中的表达。方法以含大鼠全长δ阿片受体基因的δ-pMD20-T载体为模板,设计引物并行PCR扩增,在δ基因C端引入FLAG标签,AT克隆至pMD20-T载体中,测序鉴定,经酶切连接入pIRES2-EGFP中,将获得的δ-FLAG-pIRES2-EGFP载体转染CHO细胞,应用荧光显微镜观察EGFP表达情况,并采用细胞免疫荧光和蛋白印迹法检测δ-FLAG的表达。结果测序及酶切结果表明获得了带FLAG标签的δ基因,成功构建δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达质粒,在荧光显微镜下,转染细胞可以观察到绿色荧光。应用免疫荧光和蛋白印迹法可观察到目的基因表达。结论成功构建了δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达质粒,并在CHO细胞中实现了高效表达。 展开更多
关键词 受体 阿片样 δ 绿色荧光蛋白质类 CHO细胞
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大鼠μ型阿片受体的pIRES2-EGFP质粒构建及其在HEK293细胞中的表达 被引量:1
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作者 胡子有 漆松涛 +2 位作者 张遐 张兰兰 吴炳义 《生命科学研究》 CAS CSCD 2009年第6期501-504,共4页
提取大鼠脑组织总RNA,通过逆转录巢式PCR,扩增μ型阿片受体全长cDNA,克隆至pMD20-T载体中,测序鉴定,纠正点突变后,经酶切连接克隆入pIRES2-EGFP中,测序及酶切结果表明μ基因正确,μ-pIRES2-EGFP质粒构建成功.用脂质体法将μ-pIRES2-EGF... 提取大鼠脑组织总RNA,通过逆转录巢式PCR,扩增μ型阿片受体全长cDNA,克隆至pMD20-T载体中,测序鉴定,纠正点突变后,经酶切连接克隆入pIRES2-EGFP中,测序及酶切结果表明μ基因正确,μ-pIRES2-EGFP质粒构建成功.用脂质体法将μ-pIRES2-EGFP转染入HEK293细胞中,在荧光显微镜下,转染细胞可以观察到绿色荧光,应用免疫组化荧光可以观察到μ基因的高强度表达. 展开更多
关键词 Μ型阿片受体 巢式PCR pIRES2-EGFP质粒 HEK293细胞
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解耦连蛋白2在脓毒症大鼠心肌组织中的动态表达变化 被引量:1
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作者 陈志江 王惠丽 +4 位作者 王阳 宋远斌 车頔 吕娟娟 曾其毅 《发育医学电子杂志》 2014年第2期99-103,共5页
目的探讨解耦连蛋白2与脓毒症心肌损伤发生、发展的关系。方法将40只成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组、脓毒症6小时组、脓毒症12小时组、脓毒症24小时组、脓毒症48小时组。脓毒症组以腹腔注射内毒素10 mg/kg。各组分别于相应时间点处... 目的探讨解耦连蛋白2与脓毒症心肌损伤发生、发展的关系。方法将40只成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组、脓毒症6小时组、脓毒症12小时组、脓毒症24小时组、脓毒症48小时组。脓毒症组以腹腔注射内毒素10 mg/kg。各组分别于相应时间点处死动物,采取荧光定量逆转录聚合链反应测定心肌UCP2 mRNA表达,同时应用免疫组化方法检测心肌组织切片中UCP2蛋白表达,应用免疫印迹检测脓毒症大鼠心肌组织UCP2蛋白水平的变化。结果大鼠脓毒症造模后UCP2 mRNA表达从脓毒症6小时组上调并逐渐增加,在24小时达到高峰后回落。脓毒症6、12、24、48小时组心肌UCP2 mRNA为1.31±0.06,2.94±0.40,8.20±1.96和2.15±0.24。与对照组的0.78±0.22相比,12、24、48小时差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。与mRNA水平变化类似,脓毒症6、12、24、48小时UCP2蛋白水平为0.0806±0.0067,0.1063±0.0054,0.1200±0.0057和0.0985±0.0096,均明显高于对照组的0.0516±0.0080(P<0.01)。结论脓毒症时大鼠心肌组织解偶联蛋白2上调,这种变化可能参与脓毒症心肌损伤的病理生理过程,需要进一步研究其作用机制。 展开更多
关键词 脓毒症 心肌 解偶联蛋白2
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