肾移植受者他克莫司剂量/浓度个体差异影响因素及其变化规律

目的探讨肾移植受者他克莫司剂量/浓度个体差异影响因素及其变化规律。方法观察118例肾移植术后早期(3、7、14、30d)、103例术后3月、75例术后6月、119例稳定期(≥1年)口服他克莫司+霉酚酸酯+泼尼松三联免疫抑制抗排斥的受者,记录性别、年龄、身高、体质量、他克莫司剂量、激素剂量、腹泻、血脂、肝功、肾功、白蛋白、红细胞比容,测定每个受者CYP3A5和MDR13435、2677、1236位点基因多态性及不同时期他克莫司药物浓度。然后以他克莫司浓度/剂量×体表面积为因变量分别进行多元线性回归分析。结果肾移植术后早期多元线性回归模型拟合度偏低,术后3月明显增高,术后6月进一步增高并逐渐趋于稳定;影响他克莫司剂量/浓度的因素在术后早期较多且变化剧烈,术后3月以后逐渐趋于稳定。从药物基因组学角度来看,影响他克莫司剂量/浓度的主要因素是MDR13435、MDR12677、MDR11236且术后早期变化剧烈,CYP3A5作用相对较弱且仅在稳定期入选,稳定期影响他克莫司代谢的主要因素是MDR13435。除药物基因组学因素外,年龄、肝功值、白蛋白和红细胞比容与他克莫司浓度/剂量×体表面积呈正相关,是个体差异的重要原因。结论肾移植术后他克莫司剂量/浓度影响因素的变化规律与肾移植临床特点相吻合,不同时期他克莫司剂量/浓度个体差异的影响因素不同。药物基因组学是影响他克莫司剂量/浓度个体差异的重要因素,临床用药应尽量避免对他克莫司代谢干扰大的药物。年龄、肝功、白蛋白、红细胞比容和激素剂量也是他克莫司剂量/浓度个体差异的重要原因。

KIR及其HLA配体与肾移植急性排斥反应的关系

目的探讨供受者对杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)及其人类白细胞抗原(HLA)配体所介导信号传导通路在肾移植受者术后发生急性排斥反应(AR)中可能的作用。方法回顾性分析53对肾移植供受者对HLA和KIR基因型,受者按照术后肾功能状态分为急性排斥组(n=19)和肾功能稳定组(n=34),探讨供者HLA、受者KIR基因型以及受者KIR/供者HLA配体组合型与肾移植急性排斥反应发生的相关性。结果供者HLA、受者KIR基因表现型频率在急排组和稳定组的分布:供者HLA基因型HLA-C1/2、HLA-A3、11、HLA-Bw4在两组间分布无显著统计学差异(P>0.05)。受者KIR2DL2/2DS2在急排组表达低于稳定组(26.3%vs55.9%,P=0.038),受者KIR基因组合型AA类型在急排组表达低于稳定组(31.6%vs67.6%,P=0.011)。供者HLA-C1/2、受者KIR基因组合型术后急性排斥反应发生率:供者HLA-C1/C1类型低于非HLA-C1/C1类型(31.6%vs46.7%,P>0.05)。受者KIR基因组合型AA类型低于非AA类型(20.7%vs54.2%,P=0.011)。受者KIR/供者HLA配体组合型匹配情况:肾功能稳定组中KIR2DL2/HLA-C1和KIR2DL3/HLA-C1信号匹配率较急性排斥组高(P=0.014,P=0.011)。结论特定的KIR/HLA配体组合型(如KIR2DL2/HLA-C1、KIR2DL3/HLA-C1)可能有利于降低肾移植术后急性排斥反应的发生率。良好的供者HLA和受者KIR配型选择有利于同种异体肾移植的预后。

NK细胞表面免疫球蛋白受体KIR基因的分析

目的为了探讨人类自然杀伤(NK)细胞的自然杀伤作用机制。方法采用PCR-SSP技术,调查和分析67例国人的KIR基因型和组合型频率。结果在表达出16个KIR基因中,87.5%的KIR基因的频率>0.35;由14个KIR功能基因组成的KIR基因组合型25个,其中仅KIR-2DL1-2DL3-2DL4-3DL1-3DL2-3DL3-2DS4的分布频率达到0.373,而其余频率均≤0.09。比较本文、日本人群、韩国人群和高加索人群中已报道的56个KIR基因组合型,4个民族和地区间基因组合型共享率为8.93%;本文、韩国人群和高加索人群间为5.36%;本文和高加索人群间为1.79%;28.58%为本文首先报道的基因组合型。结论本文证实单个KIR基因多态性有较高的分布频率;在25个KIR基因组合型中,仅有以传导抑制信号为主的组合型KIR-2DL1-2DL3-2DL4-3DL1-3DL2-3DL3-2DS4的分布频率达到0.373(4%),远低于87.5%的单个KIR基因的频率。但是,KIR-2DL1-2DL3-2DL4-3DL1-3DL2-3DL3-2DS4的分布频率在四个民族和地区人群中均列第一,提示KIR基因组合型以抑制性信号通路为主是一种常态,使自身细胞不会遭受自然杀伤。研究为可能探讨改变肾移植术通过KIR基因调节NK自然杀伤作用活性的增强或抑制功能,改变终生使用免疫抑制药物的相关研究提供可利用的数据。

抑制型KIR基因组合型与肾移植急性排斥反应的关系

目的:探讨抑制型KIR基因组合型(AA类型)传导通路在尸体肾移植受者发生急性排斥反应(AR)中可能的作用.方法:应用PCR-SSP方法,检测24对肾移植供受者的KIR基因组合型,分析供受者AA类型和非抑制型KIR基因组合型(BB,AB类型)与肾移植术后AR的相关性.结果:24对供受者中AA类型供者9例,受者10例;BB类型供者3例,受者4例;AB类型供者12例,受者10例.AA类型受者AR发生率10%(1/10),BB和AB类型受者AR发生率64%(9/14)(P<0.05).供者是AA类型受者AR发生率11%(1/9),供者是BB和AB类型受者AR发生率60%(9/15)(P<0.05).供受者为AA/AA类型配型受者AR发生率为0%(0/4),而供受者不是AA/AA类型配型受者AR发生率为50%(10/20)(P=0.114).结论:AA类型受者肾移植术后AR的发生率低,对BB或AB类型受者选择AA类型的供肾能够降低AR的发生率.AA类型可能传导抑制信号为主.

抗-MICA抗体在ESRD患者中的表达及其临床意义

目的探讨主要组织相容性复合物I类相关链A(MICA)抗体在终末期肾脏疾病(ESRD)患者中的表达。方法采用液相芯片分析技术和带有11种MICA抗原的荧光微球,对110例ESRD患者进行抗-MICA抗体的检测和抗-MICA抗体的特异性分析。结果在30例PRA阳性患者中抗-MICA抗体(+)的几率为40%(12/30),在80例PRA阴性患者中抗-MICA抗体(+)的几率为17.5%(14/80)。PRA阳性组患者与PRA阴性组患者抗-MICA抗体(+)几率之间呈显著性差异(χ2=6.120,P=0.013)。调查发现,26例MICA抗体(+)血清中表达出11种MICA抗原中的10种抗-MICA抗体特异性,其中,26.92%(7/26)为单特异性抗体,73.08%(19/26)为多特异性抗体。在随后的临床研究中还观察到,3例抗-MICA抗体(+)的患者接受尸体肾移植,术后随访2月,没有发生急性排斥并且移植肾功能良好。结论在PRA阳性患者中抗-MICA抗体(+)的几率亦高,说明抗-MICA抗体(+)的几率与PRA阳性的几率有明显的伴随关联。抗-MICA抗体表现为多特异性,抗-MICA抗体可能包含有IgM和IgG两种免疫球蛋白类型。研究提示,对于这部分ESRD患者未来接受移植替代治疗时,本研究数据将可以作为前瞻性数据提供临床进一步研究MICA与肾移植的关联和影响。

高PRA介导肾移植后延迟性超急排斥反应

目的:了解HLA-A、B、DR、DQ表现型为纯合子的终末期肾脏疾病患者的PRA水平,并研究其与肾移植预后的关系。方法:对2006年8月至2007年8月间在我院登记等待首次肾移植的438例终末期肾脏疾病患者HLA、PRA情况以及其中1例PRA65的HLA纯合子患者肾移植效果进行分析。HLA基因分型采用PCR-SSP技术,PRA、抗体强度及抗体特异性分析采用ELISA技术,数据统计采用SPSS11.5统计软件。结果:438例患者中有HLA纯合子12例,杂合子426例;12例纯合子中PRA阳性者6例,阳性率50,平均HLA抗体强度为55,广泛致敏率达100;426例杂合子中PRA阳性者65例,阳性率15.26,平均HLA抗体强度为28,广泛致敏率为40;纯合子与杂合子之间的PRA阳性率、平均HLA抗体强度和广泛致敏率相比差异均有统计学意义(P<0.05),纯合子高PRA的风险大(OR=5.29,95CI:1.67～16.70);1例PRA65的纯合子患者术前经血浆置换、蛋白免疫吸附、静滴丙种球蛋白治疗使PRA降低至阴性,在舒莱免疫诱导下行尸体肾移植术,供受者HLA抗原2个错配,术后移植肾功能逐渐恢复,第3天开始PRA呈阳性并逐渐升高,伴随临床逐渐出现尿少、血压升高、移植肾区疼痛等排斥反应征象,血清肌酐逐渐升高,移植肾B超见动脉阻力指数逐渐升高,提示急性排斥反应,采用术前有效清除HLA抗体的所有方法再次治疗无效,于术后第36天因移植物失功行移植肾切除。结论:HLA纯合子产生高PRA的风险大;文中1例PRA阳性的HLA纯合子早期移植肾功能恢复随后出现不可逆排斥反应致移植肾失功的情况,提示近年来随着各种有效清除HLA抗体的治疗方法不断用于临床导致了抗体介导的延迟性超急排斥反应(AMDR)的出现从而使移植肾失功;高PRA患者行肾移植术需高度慎重,应尽可能避开受者PRA峰值时的全部抗体谱来选择供体。

终末期肾脏疾病患者MICA与HLA致敏的相关性

目的探讨终末期肾脏疾病(ESRD)患者中主要组织相容性复合体Ⅰ类相关链A(MICA)抗原与人类白细胞抗原(HLA)致敏的相关性。方法根据HLA致敏情况将60例ERSD患者分为HLA致敏组(n=30)和非HLA致敏组(n=30)并采集临床资料,采用ELISA方法进行HLA致敏情况分析、Luminex100免疫磁珠流式细胞仪进行MICA致敏情况分析。结果HLA致敏患者都存在输血、妊娠和(或)移植史,HLA致敏组有输血史和移植史的患者百分率均高于非HLA致敏组(均P<0.05);两组中MICA致敏的患者共17例,其中16例有输血、妊娠和(或)移植史,1例既往无输血和移植史、无HLA致敏的32岁男性患者存在MICA致敏。HLA致敏组中MICA致敏率高于非HLA致敏组(40.0%vs16.7%,2=4.02,P<0.05)。结论HLA致敏与输血、移植、妊娠相关,而MICA致敏的途径尚未完全清楚,除输血、妊娠和移植等致敏途径外,可能存在天然的抗-MICA抗体。MICA致敏与HLA致敏之间存在相关性,这种伴随关系可能与输血、妊娠或移植等途径共同致敏有关。对非HLA致敏占大多数的ERSD患者进行MICA致敏状态的监测,将有助提高ERSD患者肾移植的长期生存率和远期移植效果,进一步增加肾移植的安全性。

中国华南地区慢性乙型肝炎患者HLA-A等位基因分布的初步调查及其意义

目的了解中国华南地区慢性乙型肝炎(CHB)患者HLA-A11、A2、A24、A33等位基因的分布状况,并为筛选HBV特异性CTL新表位提供必要背景资料。方法以267例CHB患者和300例健康献血员为研究对象,提取其外周血染色体基因组DNA,用PCR-SSP法进行HLA-A11、A2、A24、A33等位基因检测型,并进行统计学比较。结果CHB组HLA-A11、A2、A24、A33的基因频率分别为57%、41%、21%、7%,以HLA-A11最常见,较HLA-A2的基因频率高16%。健康对照组四种HLA-A等位基因的频率分别为57%、46%、24%、14%,HLA-A11较HLA-A2的频率高11%。HLA-A33的频率在两组间有显著差异(χ2=7.556,P=0.006)。CHB组HLA-A2/A11、A2/A24、A2/A33、A11/A24、A11/A33、A24/A33的基因频率分别为17%、4%、1%、16%、4%、0.4%,健康人群则为18%、8%、4%、11%、5%、1%,各种基因组合的出现率在两组间近似。HBeAg(+)与HBeAg(-)CHB组比较,HLA-A11(χ2=3.324,P=0.072)、A2(χ2=0.324,P=0.569)、A24(χ2=0.308,P=0.579)、A33(χ2=1.159,P=0.282)等位基因的频率分布在两组间无显著性差异。结论中国华南地区CHB患者和健康人群的主要HLA-A等位基因均为HLA-A11、A2、A24及A33,以HLA-A11最为多见,提示鉴定HLA-A11限制性HBV特异性CTL新表位具有十分重要的意义;此四种等位基因及其组合模式与CHB患者的HBeAg状态无明显相关,但与HBV感染的其他临床特点及抗病毒治疗应答之间的关系有待研究。

群体反应性抗体与器官移植

群体反应性抗体(PRA)是移植中最重要的免疫因素。研究证明移植排斥是由体液免疫介导的,PRA分析能反映受者人类白细胞抗原(HLA)的致敏状态,在移植前预测排斥反应的发生和移植后预警移植物丧失,使器官移植后各种排斥反应的发生率显著降低。目前PRA尤其是特异性抗供者抗体(DSA)在肾、心脏、肺等实体器官移植中的作用及其前瞻性应用研究成为热点。本文就PRA与器官移植的研究进展进行综述。

HLA—B^＊27高分辨等位基因在1606例疑似强直性脊柱炎患者中的表达

目的:探讨HLA-B*27高分辨等位基因分析对强直性脊柱炎(AS)诊断和鉴别诊断的临床应用价值。方法:采用PCR-SSP和PCR-SBT技术对2004年1月-2008年3月本院收治的广东地区1606例骨和关节疾病(OAP)患者(其中确诊AS患者1022例)进行了HLA-B*27低分辨和HLA-B*27高分辨的基因频率调查和分析。结果:OAP患者中B*27高分辨基因频率(70.50%,141/200)高于B*27低分辨基因频率(41.82%,588/1406)(P<0.001);1022例AS患者中高分辨的B*27基因频率(84.21%,121/133)也高于B*27低分辨基因频率(44.77%,398/889)(P<0.001)。HLA-B*27阳性患者表达出的HLA-B*27等位基因为B*2704占88.44%(459/519),B*2705占9.83%(51/519),B*2702占1.73%(9/519)。结论:高分辨技术能够准确检测HLA-B*27阳性患者,AS患者在不同地区或人群所表现出的HLA-B*27易感基因不同;应用高分辨技术进行HLA-B*27等位基因分型,将有益于提高AS早期诊断和鉴别诊断,发挥对AS预后预测和治疗选择的临床应用价值。

尿毒症患者NK1细胞表面受体KIR基因的表达

目的调查人类自然杀伤(NK)细胞表面免疫球蛋白样受体KIR在尿毒症患者的表达。方法采用PCR-SSP完成55例尿毒症患者KIR基因分析。结果尿毒症患者表达16个KIR基因,2DL4、3DL2、3DL3、3DP1基因频率1.00,2DL1、2DL3、3DL1、2DS4基因频率0.73～0.87,2DL2、2DS1、2DS2、2DS3、2DS5基因频率0.11～025,2DL5、3DS1、2DP1基因频率0.30～0.41。对尿毒症患者与部分亚洲地区人群的分布频率比较分析中发现,KIR-2DL4、3DL1、3DL2、3DL3、2DS4(GF0.73～1.00)和KIR-2DL2、2DL5、2DS1、2DS3、2DS5、3DS1(GF0.11～0.34)与韩国人、日本人、南亚人之间相差<0.20;KIR-2DL1、2DL3、2DS2与韩国人、日本人、南亚人群之间相差≥0.20,2DL1低于日本人,2DS2低于南亚人,2DL3高于南亚人。结论55例尿毒症患者普遍带有结构基因2DL4、3DL2、3DL3、3DP1,其次为2DL1、2DL3、3DL1、2DS4,较罕见为2DL2、2DS1、2DS2、2DS3和2DS5;显示尿毒症患者中14个KIR功能基因频率与亚洲其他人群KIR基因频率接近,但是KIR基因多态性与上述不同种族之间存在分布差异。

肾移植受者新发恶性肿瘤的生存分析

目的探讨肾移植受者术后新发恶性肿瘤的预后。方法分析1978年1月至2008年12月期间3150例次。肾移植受者的资料，其中共有59例患者术后新发恶性肿瘤，肿瘤的发生部位分别为：原肾肾癌6例，原肾‘肾盂输尿管癌4例，膀胱癌14例，前列腺癌7例，肝癌9例，胃癌3例，肠癌2例，胰腺癌1例，乳腺癌4例，宫颈癌3例，皮肤癌2例，肺癌2例，甲状腺癌1例，移植后淋巴增殖性疾病1例。将上述肾移植后新发恶性肿瘤的59例患者作为移植人群肿瘤组；另选择同期普通人群中性别相同、肿瘤确诊时年龄相同、肿瘤病理诊断以及病理分期相同的59例患者作为普通人群肿瘤组，比较两组患者肿瘤发生后的存活情况。用Cox风险分析模型对影响移植后新发肿瘤患者存活的因素进行分析。结果肾移植术后恶性肿瘤的总体发生率为1．9％（59／3150），以泌尿系统恶性肿瘤最为常见。移植人群肿瘤组和普通人群肿瘤组患者的5年存活率分别为30％和75％，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。多因素分析表明，肿瘤病理分期是影响移植后新发肿瘤患者存活率的主要不利因素．外科手术和肿瘤发病时移植肾功能正常则是提高患者存活率的保护性因素。结论与普通人群中的肿瘤患者相比，肾移植受者发生恶性肿瘤后的5年存活率明显降低。

肾移植术后血清抗MICA抗体与慢性排斥反应的相关性

目的 探讨肾移植受者的抗MICA抗体水平与慢性排斥反应的相关性及其对移植肾功能的影响.方法 共有105例受者被作为研究对象纳入分析,其中发生慢性排斥反应者（慢排组）43例,移植肾功能正常者（对照组）62例.记录两组受者术前群体反应性抗体（PRA）、HLA抗原错配数、供肾冷缺血时间、出院时血清肌酐（SCr）水平、术后免疫抑制方案以及入组时间（入组时距肾移植手术时间）等资料,并进行比较.受者分组后,抽取受者外周血,检测SCr及抗MICA抗体水平,抗MICA抗体的检测采用Luminex 100免疫磁珠流式细胞仪技术.观察与比较抗MICA抗体阳性受者和抗MICA抗体阴性受者间术后3个月内发生急性排斥反应（AR）的次数和移植肾功能的差异.移植肾功能的评价采用血清肌酐变化率（△SCr/M）,即（入组时SCr值-出院时SCr值）/入组时间.结果 两组受者在性别、年龄、HLA抗原错配数、供肾冷缺血时间、术后免疫抑制方案、出院时SCr水平及入组时间的比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）.分组后,慢排组受者SCr水平和抗MICA抗体阳性受者比例均明显高于对照组,两组比较,差别均有统计学意义（P＜0.01,表1）.抗MICA抗体阳性受者术后3个月内发生的AR次数明显多于抗MICA抗体阴性受者,二者比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.抗MICA抗体阳性受者的△SCr/M为8.3±3.6,明显高于抗MICA抗体阴性受者的2.4±2.6,二者比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 抗MICA抗体的表达与慢性排斥反应的发生相关,移植前进行MICA配型可减少术后移植肾慢性排斥反应的发生,有助于延长移植肾的长期存活.