胸腰段短阶段椎弓根螺钉置钉位置不佳原因临床分析

目的:分析临床应用胸腰段短阶段椎弓根螺钉出现置钉位置不佳的原因,以提高手术成功率及手术效果.方法:1995年3月～2003年8月行短阶段椎弓根螺钉固定治疗胸腰椎脊柱疾患592例,其中置钉位置不佳22例,通过临床检查、初次手术情况、X线片检查,再次手术情况对置钉位置不佳的原因及对策进行分析.结果:22例置钉位置不佳原因主要包括:(1)解剖不熟悉所致12例:包括正常椎弓根变异;骨折及退变时椎弓根变化而致进钉点掌握不当;(2)手术技术掌握不够所致10例:包括进钉的深度和角度不当.结论:应用短阶段椎弓根螺钉系统治疗胸腰椎疾患手术医师应术前仔细阅X线片,熟悉椎弓根的局部解剖及手术技术.

内外科呼吸机相关性肺炎的病原学分析

目的分析内外科呼吸机相关性肺炎(VAP)的病原菌差异,为临床治疗提供参考依据。方法经纤维支气管镜(纤支镜)保护性样本毛刷采取下呼吸道标本,对内科疾病基础上的VAP和外科疾病基础上的VAP的细菌培养结果进行了统计分析。结果外科VAP病原菌主要以绿脓假单胞杆菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌为主。内科主要以肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、坂琦肠杆菌等细菌为主。结论内外科VAP所涉及的细菌虽有相同的菌种,但分布不同。造成这种现象的因素可能与患者本身免疫功能、肺部条件、人工气道建立方法及住院病区环境不同有关。

重组人神经肽Y融合蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备与鉴定

目的：构建人神经肽Y（NPY）基因的原核表达载体，诱导表达重组蛋白，制备兔抗人NPY抗血清。方法：取已构建好且经测序确认无误的再组质粒pET28a—NPY转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达融合蛋白，并经SDS—PAGE检测和Western印迹鉴定，表达产物包涵体经Ni^2＋-NTA亲和层析纯化，以纯化后的融合蛋白pET28a—NPY为抗原免疫家兔，获得抗血清，Western blotting、ELISA法鉴定获得的抗血清。结果经IPTG诱导含有pET28a—NPY重组质粒的DE3菌，表达出重组人NPY融合蛋白。重组蛋白经Ni^2＋-NTA亲和层析进行纯化后，得到了较高纯度的融合蛋白，用纯化的融合蛋白免疫家兔制备了多克隆抗体，Western blotting、ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论：成功表达了人NPY蛋白并获得了其多克隆抗体，为进一步研究人NPY蛋白的功能奠定了基础。

血清介质对体外培养L929系小鼠成纤维细胞表达产物Ⅰ、Ⅲ型胶原及其比值的影响

目的探讨不同浓度血清、不同体外培养时间对L929系小鼠成纤维细胞表达产物Ⅰ、Ⅲ型胶原及其比值的影响。方法采用双抗体夹心法检测细胞培养液中Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量,并同时计算出Ⅰ/Ⅲ型胶原的比值。结果除0%血清浓度组的Ⅰ、Ⅲ型胶原呈现无明显变化的微弱升高趋势外,其余各血清浓度组的Ⅰ、Ⅲ型胶原均处于增加状态,且在6~8 d时增加最为明显;另外,Ⅰ/Ⅲ型胶原比值随着血清浓度和细胞生长时间不同,表现出不同的变化趋势。其中20%和40%血清浓度组随着培养细胞生长时间延长,Ⅰ/Ⅲ型胶原比值逐渐增加;而其他血清浓度组,随着细胞培养时间的延长,Ⅰ/Ⅲ型胶原比值增加并不明显。结论 L929细胞在不同体外培养时间和不同浓度血清下其表达产物Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及其比值有一定变化,为今后优化体外细胞培养条件提供了相关的实验数据。

大肠侧向发育型肿瘤细胞株的建立及其鉴定

目的 为了深入研究大肠侧向发育型肿瘤 (LST)细胞的生物学特性及其发生发展的机制。方法 采用人LST组织进行肿瘤细胞建株及细胞分离与原代培养 ,传代至 70代进行细胞鉴定 ,包括细胞的形态结构分析、染色体分析和免疫组化分析等 ,并与非LST细胞作对比。结果 LST细胞为上皮来源的肿瘤细胞 ,多形性上皮细胞占大多数 ,其有近似肿瘤细胞的生长特性 ,群体倍增时间为 36h ;染色体数量为 4 2～6 6 ,85 %在三倍体范围内 ,并具有异常染色体核型 ;免疫组织化学观察ESA、CK2 0均呈阳性 ;超微结构具肿瘤细胞样表现和特征。结论 成功建立了 1个LST细胞株 ,并命名为LST R1细胞 ,为进一步深入研究LST细胞的生物学特性及大肠癌的发生发展机制奠定了基础。

晚期氧化蛋白产物导致血管内皮细胞氧化应激损伤

目的 研究慢性肾功能衰竭病人循环晚期氧化蛋白产物 (AOPP)对人血管内皮细胞活性的影响及机制。方法 用次氯酸(HOCl)氧化牛血清白蛋白 (BSA)体外制备AOPP BSA ,将人血管内皮细胞株ECV30 4与不同浓度、不同氧化修饰程度的AOPP BSA共同培养 ,用MTT法测定细胞活性 ,用VICTORWallac 14 2 0多标记分析系统动态检测细胞内活性氧的产生量。结果 AOPP BSA使血管内皮细胞活性降低 ,其对内皮细胞活性的影响与BSA氧化程度及AOPP BSA的浓度有关 ;AOPP BSA刺激内皮细胞生成活性氧 ,细胞内活性氧的生成量随BSA氧化程度和AOPP BSA浓度增加而升高。用硒谷胱甘肽过氧化物酶小分子模拟物ebselen预处理细胞 ,可使AOPP BSA诱导产生的活性氧减少 5 3% ,并可保护细胞免受AOPP BSA造成的细胞损伤。结论 晚期氧化蛋白产物能通过氧化应激引起血管内皮细胞损伤。

大肠侧向发育型肿瘤(LST)的内镜诊治

目的 回顾性分析南方医院近 2年内在肠镜检查中发现的 4 6例共 4 7个大肠侧向发育型肿瘤 (LST)病变的检出及处理情况。方法 记录所有LST病变的部位、大小、形态特征及内镜下大体分型 ,所有病例均行放大内镜观察病变表面的pit形态 ,4 6例LST患者中 ,4 2例共 4 2个病变接受内镜下治疗 ,其中 14例行注射法内镜下黏膜剥离切除术 (EMR)切除病变 ,2 4例行注射法内镜下黏膜剥离分片切除术 (EPMR)切除病变 ,1例行透明帽辅助EPMR切除病变 ,3例行单纯高频电热圈套切除术切除病变。结果 LST检出率 :常规肠镜检查中LST病变检出率为 0 8%。病变分布 :4 7个LST病变中 ,直肠 2 2个 ,乙状结肠 10个 ,降结肠 7个 ,横结肠 4个 ,升结肠 2个 ,盲肠 2个。内镜下病变大体分型 :颗粒均一型 2 5个 ,结节混合型 12个 ,平坦隆起型 8个 ,假凹陷型 2个。Pit形态 :Ⅱ型pit 2个 ,Ⅱ型 +ⅢL型pit8个 ,ⅢL型pit9个 ,IV型pit2 8个。病理形态 :绒毛状腺瘤 2 8例 ,均伴中度以上不典型增生 ,其中 7例有局部癌变 (6例m癌 ,1例sm1癌 ) ,但根部无癌残留 ;增生性息肉 2例 ;管状腺瘤 11例 ,10例合并中度不典型增生 ,1例局部癌变 (m癌 ) ;锯齿状腺瘤 (Serrated腺瘤 ) 6例。结论 大肠LST病变在我国有较高的检出率 ,其内镜形态具有一定特殊性 ,?

放大内镜及实体显微镜对结肠肿瘤性病变检查的意义

目的 探讨如何通过放大内镜和实体显微镜观察分析大肠息肉腺管开口类型 ,从而发现早期大肠癌及癌前病变。方法 2 0 0 1年 8月～ 2 0 0 2年 2月结肠镜检查 139例大肠病变。采用内镜下黏膜染色技术 ,结合放大内镜、实体显微镜观察腺管开口分型 (pitpat tern)并与病理诊断对照。结果 139例患者中发现大肠息肉 12 4例 ,进展期癌 9例 ,LST型病变 5例。 5例LST的直径为 10～5 0mm ,其中ⅢL型 1个 ,Ⅳ型 4个。本组采用放大内镜与病理、实体显微镜诊断的符合率高。结论 大肠腺管开口对于判断肿瘤性、非肿瘤性病变以及早期大肠癌具有重要意义 。

大肠侧向发育型肿瘤(LST)早期癌变8例内镜下治疗及随访

目的 探讨大肠侧向发育型肿瘤(LST)早期癌变在内镜下治疗的新方法及疗效。方法 采用放大大肠镜与黏膜染色技术观察黏膜pit分型 ,发现LST早期癌变 ,并采用内镜下黏膜剥离切除术(EMR)对LST早期癌变进行治疗且随访疗效。结果 8例LST早期癌变主要分布在直肠、乙状结肠和降结肠 ,占 75 % ;病变大于 30mm以上者占 75 % ;放大内镜下病变pit分型以Ⅳ型为主 ,占 75 % ;病理形态以绒毛状腺瘤癌变为主 ,占 6 2 5 % ,浸润深度以黏膜内癌为主 ,占 75 % (m +sm1占 87 5 % )。8例早期病变均进行EMR ,一次性完全切除成功 ,其中EMR和内镜下分片黏膜剥离切除术 (EPMR)各 4例。平均随访 2 0 7个月 ,随访期间均未发现肿瘤局部残留、复发及转移。结论 大肠侧向发育型肿瘤早期癌变多为黏膜内癌 ,内镜下行EMR是一种有效的或可能治愈的方法。

HGF+FGF4体外定向诱导人骨髓来源的多能成体祖细胞向肝样细胞分化的特征性表型鉴定

目的 探索人骨髓来源多能成体祖细胞 (hMAPCs)在肝细胞生长因子 (HGF) +成纤维生长因子 4 (FGF 4 )诱导下分化为肝细胞的可行性 ,为肝组织工程提供新的种子细胞来源。方法 取健康成人适量骨髓 ,采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞并行贴壁培养 ,获取骨髓间充质干细胞(MSCs) ,将MSCs通过CD4 5、GlyA免疫微磁珠负分选得到hMAPCs;将获取的hMAPCs用HGF(2 0ng/ml) +FGF 4(10ng/ml)进行诱导分化 ,L 0 2人肝细胞株为阳性对照 ,未加任何诱导因素的hMAPCs为阴性对照 ;免疫细胞化学染色鉴定不同诱导分化阶段细胞的ALB、AFP、CK 18、CK 19等肝细胞特征的表型变化 ,并计数阳性细胞比率 ;Westernblot检测诱导分化第 2 1天、35天后细胞的ALB表达。结果 ALB、CK 18在诱导组中基本为阳性着色 ,CK 19均为阴性着色 ,AFP仅在诱导第 7天有阳性着色。在诱导分化第 2 1天、35天 ,ALB均有阳性表达。

p53基因第72位密码子多态与瘢痕疙瘩易感性研究

目的 探讨 p5 3基因第 72位密码子多态与瘢痕疙瘩遗传易感性的关系。 方法 采用聚合酶链反应 -反向斑点杂交、DNA直接测序方法 ,检测了 15例瘢痕疙瘩患者与 15名正常人对照的 p5 3基因第 72位密码子的基因型。 结果 瘢痕疙瘩组的 Pro等位基因及 Pro/ Pro基因型频率明显高于对照组 (P值分别为 0 .0 35、0 .0 30 ) ,Pro/Arg、Arg/ Arg基因型频率在病例组和对照组的分布差异无显著性。 结论 p5 3基因第 72位密码子 Pro等位基因及Pro/ Pro基因型可能是瘢痕疙瘩的易感因素。

海水中火器伤早期血液电解质蛋白和渗透压的变化

目的观察海水中火器伤早期血电解质、蛋白、血糖和晶体渗透压的变化,为早期救治方案的拟定提供实验依据。方法将17只普通级比格犬分为海水中致伤组(n=14)和地面致伤组(n=3)。海水组于海水中枪伤后救出,(33.75±25.29)m in经中心静脉测压管采血测试电解质、蛋白、血糖和晶体渗透压,分析其致伤前后的变化。结果海水中火器伤伤后与实验前相比Na+、血糖和晶体渗透压明显升高(P<0.05或P<0.01),总蛋白和白蛋白下降(P<0.05或P<0.01),K+、C l-、Ca2+、球蛋白和白球比值的改变虽无统计学意义(P>0.05),但K+有上升趋势,C l-、Ca2+、球蛋白和白球比值均有下降趋势;火器伤伤后海水组与地面组相比Na+、血糖和晶体渗透压明显增高(P<0.01,P<0.05),K+、C l-、Ca2+、总蛋白、白蛋白、球蛋白和白球比值的改变虽无统计学意义(P>0.05),但K+、C l-比地面组高,而Ca2+、总蛋白、白蛋白、球蛋白和白球比值比地面组低。结论海水中火器伤伤后早期即出现明显的水与电解质紊乱,表现为高钠血症、高钾血症、低氯血症、高渗血症及创伤后“高血糖症”和低蛋白血症,临床救治时应尽早纠正这些紊乱。

晚期糖基化终产物诱导单核细胞产生细胞因子的细胞内信号传导机制

目的 探讨晚期糖基化终产物 (AGE)诱导单核细胞产生白细胞介素 1β(IL 1β)和肿瘤坏死因子 浕(TNF 浕)的细胞内信号传导机制。方法 采用密度梯度离心法分离健康成人外周血单核细胞 ,经AGE修饰的人血清白蛋白 (AGE HSA)刺激后 ,用ELISA法检测培养上清中IL 1β、TNF 浕水平 ,用化学发光法测定活性氧的生成 ;免疫细胞化学染色及凝胶迁移电泳 (EMSA)法观察核因子 κB(NF κB/p6 5 )的激活。分别用抗AGE受体 (RAGE)抗体、NADPH氧化酶特异性抑制剂apocynin和p38通路抑制剂SB 2 0 35 80预处理单核细胞 ,观察对AGE HSA诱导细胞因子和活性氧产生的影响。结果 AGE HSA与单核细胞在体外共同培养后 ,细胞内NF κB激活 ,培养上清中IL 1β、TNF 浕水平明显增高 ,活性氧生成增加 ;用抗RAGE抗血清或apocynin预处理细胞可阻断AGE HSA诱导的活性氧生成 (P <0 0 1) ,抑制NF κB的活化并使培养上清IL 1β、TNF 浕显著降低 (P <0 0 1)。用SB 2 0 35 80预处理细胞也可抑制AGE HSA诱导的NF κB激活及IL 1β、TNF 浕的产生 ,但对活性氧的产生无明显影响 (P >0 0 5 )。结论 AGE通过RAGE介导的途径刺激单核细胞生成IL 1β、TNF 浕和活性氧 ,NADPH氧化酶途径可能是RAGE细胞内信号途径的上游 。

携带Fas基因重组腺病毒治疗瘢痕疙瘩的体外研究

目的 应用成功制备的携带人 Fas基因的两种重组腺病毒 ,感染瘢痕疙瘩 (keroid,K)成纤维细胞 (fi-broblasts,FB) ,使其稳定高效地表达以替换原有无功能的 Fas蛋白 ,并恢复正常的重建后 Fas信号传导通道。 方法 腺病毒感染 KFB后 ,检测及比较两种腺病毒转染前后 ,KFB内 Fas蛋白的表达变化、蛋白功能以及细胞增殖 -凋亡状况。 结果 腺病毒感染后的 KFB均能稳定提高 Fas蛋白的表达 ,并且在 Fas单克隆抗体的诱导下可以发生明显的细胞凋亡。 结论 1构建的两种重组腺病毒 Ad- Fas在体外实验中能有效地提高 KFB蛋白的表达 ,并可以重建原来阻断的死亡信号传导通道 ;2细菌内重组腺病毒体外治疗效果更佳 ;3再次估证了 Fas基因突变与 K之间的联系 ,为 K基因治疗展示了一条新途径。

纤维支气管镜引导下经鼻气管插管在神经科疾病中的应用

目的探讨纤维支气管镜引导下经鼻气管插管在神经科患者中的应用价值和意义。方法对82例神经系统疾病并呼吸衰竭患者在床边采用纤维支气管镜引导下经鼻气管插管,总结分析其临床资料。结果82例患者全部顺利完成气管插管,且均为一次成功,成功率100%,无严重并发症发生。插管时间30s～5min。结论纤维支气管镜引导下经鼻气管插管快速,准确,安全,在神经系统疾病患者中具有很高的临床应用价值。

周围型胆管细胞癌临床病理与CT及MR诊断研究

目的:对比研究肝内周围型胆管细胞癌的临床病理与CT及MRI表现。方法:回顾性分析经病理学证实的周围型胆管细胞癌39例,32例行CT平扫和动态增强扫描,11例行MRI扫描,其中4例同时做过CT和MRI检查。结果:肿瘤在CT、MRI上表现为类圆形软组织肿块(肿块型)、不规则形片状异常密度(信号)影(浸润生长型)和扩张胆管腔内结节样(或菜花样)软组织肿块,动态增强扫描早期呈轻度强化,以边缘为主,延迟后扫描病灶可无明显强化,或内部呈现片状、分隔状甚至均匀性强化。病理学上见肿瘤细胞呈高柱状、立方形或扁平形排列成腺管状,中间含有增生的纤维结缔组织,在不同类型肿瘤中两者含量和分布特点不同构成不同影像表现的病理学基础。结论:周围型胆管细胞癌的临床表现缺乏特异性,动态增强扫描是CT、MRI诊断和鉴别诊断要点,排列成腺管状的瘤细胞造成肿瘤早期强化,而增生的纤维结缔组织是形成肿瘤延迟强化的病理基础。

蛋白质芯片与ELISA法对肿瘤标志物检测结果的对照研究

目的研究蛋白质芯片与ELISA法对肿瘤标志物检测结果的差异。方法分别应用蛋白质芯片和ELISA法测定分析50例PHC患者、17例肝硬化患者、16例肝炎患者和40例健康查体者血清中CA199、AFP和CEA的水平。结果采用蛋白芯片联合检测CA199、AFP及CEA等3项指标对PHC的诊断阳性率为78.00%,特异性为82.19%;而采用ELISA法结果为78.00%和75.34%,两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。两种方法检测结果符合率为92.95%(相关系数r=0.842,P<0.001)。结论蛋白质芯片能够较准确地反映肿瘤标志物的水平,并且较传统方法快速方便,可以作为检测标志物的常规手段之一。

中药宝宝乐对幼龄厌食大鼠模型β-EP及CCK的作用

目的:研究运脾平肝复方宝宝乐口服液对小儿厌食症动物模型β-EP及CCK的调节作用。方法:模拟小儿厌食症的主要病因制作幼龄厌食大鼠模型,用宝宝乐口服液治疗,用放免检测技术测定实验动物下丘脑、胃窦部及外周血β-EP和CCK的含量,并与单纯运脾复方儿宝颗粒对照。结果:模型大鼠胃窦部及血浆中β-EP浓度明显下降(1.71±0.80vs6.87±1.63,P<0.01;6.53±1.05vs10.76±4.05,P<0.05),下丘脑无明显变化;下丘脑和血浆CCK—8浓度均明显增高(131.12±28.56vs91.08±18.68,P<0.05;486.95±113.32vs262.15±95.09,P<0.01);宝宝乐和儿宝颗粒治疗组血浆中β-EP浓度、下丘脑和血浆CCK—8浓度均恢复正常,宝宝乐治疗组下丘脑CCK-8浓度回降较儿宝颗粒明显(85.67±22.62vs108.36±20.97,P<0.05)。结论:宝宝乐能调节该模型中枢及外周β-EP和CCK的分泌与释放。