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人表皮生长因子受体Ⅲ型突变体胞外区的克隆表达和鉴定
被引量:
1
1
作者
张兴梅
石玉生
刘忠英
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第2期151-153,共3页
目的构建含表皮生长因子(EGF)受体Ⅲ型突变体胞外区基因(vⅢECD)的重组质粒并进行表达和鉴定。方法应用PCR方法扩增EGFRvⅢ ECD片段,将其T-A克隆和测序,再将目的基因插入GST融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达。采用双酶切鉴定插入序列的...
目的构建含表皮生长因子(EGF)受体Ⅲ型突变体胞外区基因(vⅢECD)的重组质粒并进行表达和鉴定。方法应用PCR方法扩增EGFRvⅢ ECD片段,将其T-A克隆和测序,再将目的基因插入GST融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达。采用双酶切鉴定插入序列的正确性,用SDS-PAGE及Western blotting分析融合蛋白的表达。结果测序结果证实插入DNA序列与EGFR胞外区序列完全一致;双酶切鉴定表明,EGFRvⅢ ECD序列已经正确克隆到GST融合表达载体中。SDS-PAGE电泳显示融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中以包涵体形式表达,重组融合蛋白GST-vⅢECD的表达量占菌体总蛋白的15%以上。Western blotting分析证实重组融合蛋白可以被EGFR特异性抗体所识别。结论成功构建了融合表达载体(pGEX-4T-1/vⅢECD),并进行了融合蛋白的诱导表达和鉴定,可进一步用于EGFRvⅢ功能及免疫学研究。
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关键词
表皮生长因子受体
Ⅲ型突变体
胞外区
原核表达
融合蛋白
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职称材料
题名
人表皮生长因子受体Ⅲ型突变体胞外区的克隆表达和鉴定
被引量:
1
1
作者
张兴梅
石玉生
刘忠英
机构
南方医科大学
基础
医学院
神经生物
教研室
南方医科大学
南方
医院放疗科
南方医科大学基础医学院组织和胚胎学教研室
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第2期151-153,共3页
基金
国家自然科学基金(30500608)~~
文摘
目的构建含表皮生长因子(EGF)受体Ⅲ型突变体胞外区基因(vⅢECD)的重组质粒并进行表达和鉴定。方法应用PCR方法扩增EGFRvⅢ ECD片段,将其T-A克隆和测序,再将目的基因插入GST融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达。采用双酶切鉴定插入序列的正确性,用SDS-PAGE及Western blotting分析融合蛋白的表达。结果测序结果证实插入DNA序列与EGFR胞外区序列完全一致;双酶切鉴定表明,EGFRvⅢ ECD序列已经正确克隆到GST融合表达载体中。SDS-PAGE电泳显示融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中以包涵体形式表达,重组融合蛋白GST-vⅢECD的表达量占菌体总蛋白的15%以上。Western blotting分析证实重组融合蛋白可以被EGFR特异性抗体所识别。结论成功构建了融合表达载体(pGEX-4T-1/vⅢECD),并进行了融合蛋白的诱导表达和鉴定,可进一步用于EGFRvⅢ功能及免疫学研究。
关键词
表皮生长因子受体
Ⅲ型突变体
胞外区
原核表达
融合蛋白
Keywords
epidermal growth factor receptor
type Ⅲ variant
extracellular domain
prokaryotic expression
fusion protein
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人表皮生长因子受体Ⅲ型突变体胞外区的克隆表达和鉴定
张兴梅
石玉生
刘忠英
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
1
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