特立帕肽通过mTORC2通路调控细胞骨架和黏附斑的观察研究

目的探讨特立帕肽通过mTORC2通路调控骨髓间充质干细胞的细胞骨架和黏附斑的变化的机制。方法从4~6周大的Sprague-Dawley大鼠中提取骨髓间充质干细胞并培养,使用不同浓度(1、10、20、50 nmol/L)的特立帕肽处理细胞。特立帕肽处理细胞后加入mTORC1抑制剂(20 nmol/L雷帕霉素)或mTORC1/2抑制剂(10μmol/L PP242)后观察现象。细胞迁移采用细胞迁移试验和伤口愈合试验。通过黏附实验观察细胞的黏附能力。蛋白表达的细胞骨架蛋白(β-actin)和黏着斑蛋白(vinculin)用免疫荧光检测。结果在不同浓度特立帕肽的处理下,大鼠的骨髓间充质干细胞相对于对照组呈现出更强的迁移和黏附能力(P <0.05);此外,与1 nmol/L的特立帕肽的浓度相比,10、20、50 nmol/L浓度的特立帕肽均能促进细胞迁移,且处理间差异无统计学意义(P> 0.05);在特立帕肽的刺激下,细胞更大,呈多边形,并且actin应力纤维倾向于有更强的粘连;而加入mTORC1/2抑制剂PP242的骨髓间充质干细胞能显著降低特立帕肽促进迁移和黏附的能力,并且细胞的黏着斑与肌动蛋白末端的骨架纤维较小;加入mTORC1抑制剂雷帕霉素对特立帕肽的抑制作用和则不明显。结论特立帕肽通过激活mTORC2通路调控细胞骨架和黏附斑的变化,进而促进细胞的迁移黏附。