LMP1与绿色荧光蛋白融合基因慢病毒的制备

目的:制备EB病毒LMP1与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因慢病毒.方法:采用RT-PCR方法获得LMP1全外显子片段,使之克隆到带绿色荧光蛋白慢病毒表达载体质粒FUGW中.经限制性酶切、PCR扩增和测序鉴定重组载体.在脂质体介导下将慢病毒包装系统的包装结构基因pCMV.△8.9、包膜基因VSVG、目的基因FUGW-LMP1导入病毒包装细胞293FT,荧光显微镜检测基因的表达,包装成病毒后,收集病毒上清,浓缩,PCR鉴定.结果:限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实RT-PCR获得的LMP1 cDNA片段与Gen-Bank中的数据完全吻合;LMP1准确克隆入FUGW的多克隆位点.慢病毒的3种质粒可高效转染入293FT细胞,荧光显微镜下观察可见大量的绿色荧光.绿色荧光位于细胞的胞膜及胞质.结论:成功制备了LMP1与GFP融合基因慢病毒,为研究EBV瘤基因LMP1在多种疾病中的作用机制提供适合的稳定转染细胞的载体.

小鼠A20RS样细胞模型的初步建立

目的:研究EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)转染小鼠 B淋巴瘤细胞A20能否诱导出霍奇金淋巴瘤H/R S样细胞. 方法:采用RT PCR方法获得LMP1全外显子片段,使之克隆 到真核表达载体PLXSN中,限制性酶切、PCR扩增和测序鉴 定重组载体;运用脂质体介导转染技术,将LMP1的真核表达 重组质粒和空载体质粒导入A20细胞.结果:扩增的 LMP1cDNA长度为1.1kb,测序结果与已知序列吻合,重组真 核表达质粒经酶切鉴定表明获得正确重组子;经G418筛选获 得稳定整合了LMP1和空载体的亚克隆细胞,WesternBlot印迹 鉴定PLXSN LMP1组有LMP1蛋白的表达,出现了H/R S样细 胞形态改变.结论:建立了小鼠A20RS样细胞模型,为下一步 建立霍奇金淋巴瘤动物模型,研究其发病机制奠定了基础.

《法医学》CAI实施方法探讨

计算机多媒体辅助教学(Computer Aided Instruction, CAI)可提供理想的教学环境,提高学生的学习效率和教学质量,具有传统教育不可比拟的优势。首先,人机之间良好的交互性,有助于充分发挥学习者的主动性和积极性,激发学习者认知主体能动性的发挥;其次,计算机多媒体提供声音和图像等外部刺激,有利于知识的获以和记忆,第三,