超高效液相色谱-串联质谱法同时测定肿瘤细胞mRNA中12种正常核苷和修饰核苷

建立了一种肿瘤细胞mRNA中12种正常核苷和修饰核苷的分析方法。肿瘤细胞样品经总RNA提取、mRNA纯化和mRNA水解后,加入8-溴鸟苷(8Br-G)为内标,以0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸甲醇溶液为流动相,采用Agilent RRHD SB-C18(2.1 mm×50 mm,1.8μm)色谱柱进行分离,电喷雾电离源正离子扫描(ESI+),多反应监测(MRM)模式检测。该方法符合方法学验证要求,12种正常核苷和修饰核苷在一定浓度范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.99,定量下限(LOQ)为0.17~3.13 ng/mL,检出限(LOD)为0.08~1.56 ng/mL。将建立的方法应用于人鼻咽癌5-8F细胞系、人宫颈癌Hela细胞系和人胚肾上皮293T细胞系,成功地检测出多种修饰核苷水平。该方法细胞用量少(每样品2×106个),分析时间短(每样品6 min),灵敏度高,可为癌症研究和临床诊断等提供一种有效的分析方法。