神经干细胞治疗应用安全性的研究进展

目的:神经干细胞具有分化及自我更新的潜能,可分化为神经元及胶质细胞。神经干细胞的发现为神经系统疾病治疗带来了巨大的希望,但当前对于神经干细胞的诱导、分化及迁移等调控机制尚未完全清楚。因此,神经干细胞在完全进入临床治疗应用之前仍面临许多问题亟待解决。其中,安全性问题(包括其致癌性问题)是人们关注的焦点。本文就目前国内外对此所做的研究及其展望做一综述。

人Tau基因多表位肽段原核表达载体的构建与表达

目的构建含人Tau多表位肽段基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化目的蛋白,检测Tau多表位DNA疫苗免疫小鼠后特异性抗体产生情况。方法以质粒pVAX1-Tau为模板,用PCR扩增人Tau多表位肽段基因,插入表达载体pGEX-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-TauP1/P2。将鉴定后的阳性重组质粒转入E.coli BL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并采用GST法纯化、SDS-PAGE鉴定目的蛋白的表达。以TauP1/P2 DNA疫苗免疫小鼠获取血清,Dot-blot检测TauP1/P2特异性抗体产生情况。结果 PCR扩增出约300 bp的基因片段,克隆至表达载体后,经酶切和测序验证正确;获得了纯化的目的蛋白,并证实了GST-TauP1/P2融合蛋白的表达。Dot-blot检测到特异性TauP1/P2抗体的产生。结论成功构建和表达人Tau多表位肽段基因的目的蛋白GST-TauP1/P2,能够识别Tau多表位DNA疫苗免疫后小鼠产生的特异性TauP1/P2抗体。

脑深部电刺激术治疗帕金森病患者及手术靶点的选择

帕金森病（Parkinson’S disease，PD）是一种年龄相关的、慢性中枢神经退行性疾病^[1]。该病在各年龄段均可发病，多见于50岁以上人群，世界人口患病率约为1％。2005年对北京，上海和西安三地的调查显示，我国的老年（〉50岁）PD患病率为1．7％，较上世纪有所提高，而欧洲的患病率早在上世纪就已达1．6％^[2-3].脑深部电刺激（deep brain stimulation，DBS）是通过立体定向手术，将刺激电极植入脑深部特定神经核团，

阿尔茨海默病治疗的新策略：促进轴突再生

阿尔茨海默病是一种以进行性痴呆为显著特征的中枢神经系统退行性疾病，以老年斑、神经纤维缠结和选择性神经元及其突触丢失为主要病理学特征。轴突损伤在阿尔茨海默病的发病及进展中具有重要作用，通过促进轴突再生与突触重塑进行阿尔茨海默病治疗，改善脑内神经环路的可塑性，对阿尔茨海默病学习记忆、认知能力等的改善具有潜在的重要意义。本文就针对阿尔茨海默病发病机制的治疗新策略了以综述。

高血压丘脑出血的神经内镜微创手术治疗

目的 探索神经内镜微创手术治疗高血压丘脑出血的效果.方法 通过改进现有神经内镜手术技术与设备,南方医科大学珠江医院等4家医院神经外科自2007年7月至2010年6月通过常规骨孔在神经内镜下微创手术治疗高血压丘脑出血患者15例,分析患者的临床资料和手术疗效.结果 本组患者平均手术时间（1.5±0.4）h,手术失血量约30～40mL,丘脑脑内血肿平均清除率为（86.2±7.9）%.随访3个月显示恢复良好3例（21.4%）,轻度残疾4例（28.6%）,重度残疾4例（28.6%）,植物状态2例（14.3%）,死亡1例（7.1%）.结论 神经内镜微创手术治疗高血压丘脑出血具有微创、高效、快速、出血少等特点.

改良颈静脉孔区手术入路的显微解剖学研究

目的研究一期切除复杂颈静脉孔区（JF）肿瘤的手术入路。方法成人尸头标本20例，在手术显微镜下对高颈部、JF及相关结构进行显微解剖。结果对C1-C4段高位颈部进行解剖，观察研究其对增加颅外暴露的作用及效果；做迷路后乳突切除，暴露外半规管，轮廓化乙状窦和颈静脉球；充分轮廓化面神经垂直段，研究面神经移位的必要性；随后做外侧枕下颅骨切除，磨除后内侧1／3枕髁，尽可能磨除全部的颈静脉结节。结论改良后的JF入路可以从上、下、后、外多个角度对JF的充分暴露，能够比较容易完成一期全切颅内外位于JF、枕骨大孔和向高颈位发展的各类肿瘤，还可以有效减少甚至避免面神经损伤及其他术后并发症的发生。

脑损伤的干细胞移植治疗研究进展

外伤性脑损伤（traumatic brain injury．TBI）是世界性的多发性疾病，也是死亡率和致残率最高的疾病之一。TBI后生存患者常残留有运动、认知及社会交流障碍，导致患者、家属及社会受到破坏性影响。广东省由于交通网络发达，各种车辆保有量大，发生交通事故的比例也显著高于其他省份。2005年广东省共发生交通事故67756宗．

替尼泊甙联合司莫司汀治疗脑胶质瘤疗效与MGMT表达关系的研究

目的通过观察脑胶质瘤中O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）的表达状态，探讨MGMT在脑胶质瘤中的表达与替尼泊甙（VM-26）联合司莫司汀（Me－CCNU）方案化疗疗效之间的关系。方法对资料完整的47例经病理证实的脑胶质瘤患者进行回顾性研究，对患者的胶质瘤病理石蜡切片采用免疫组化法检测MGMT的表达，然后分析MGMT的表达与患者生存率之间关系。结果本组患者MGMT阳性表达率为40．4％。MGMT阴性表达组3年生存率为66．7％，平均总生存时间为（67．861±10．094）月；MGMT阳性表达组为52．6％，平均总生存时间为（47．263±7．983）月，比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。11例患者出现I度的骨髓抑制现象，6例患者出现胃部不适、呕吐、腹泻、食欲不振等消化系统症状。结论VM－26联合Me－CCNU化疗方案可以有效克服脑胶质瘤中MGMT所带来的化疗耐药性问题，且该方案的毒副作用不大．是一个有效的化疗方案。

阻断Eag-1通道活性抑制胶质瘤细胞增殖的研究

目的 探讨阻断Eag—1通道活性对胶质瘤细胞生物活性的影响。方法设计3对Eag-1通道蛋白的特异性小分子干扰RNA（siRNA）并转染人U87细胞，RT—PCR及Westernblotting检测其对U87细胞Eag-1 mRNA和蛋白表达的影响；将50nmol／LsiRNA1、siRNA2转染U87细胞，同时设5、10、20、30和40mmol／L奎尼丁（Eag-1通道特异性阻断剂）组和空白对照组，MTT法观察作用24、48、72h后U87细胞增殖情况，流式细胞仪检测作用48h后细胞周期、细胞凋亡率、胞内活性氧簇（ROS）浓度的变化。结果RT—PCR及Westernblotting结果显示siRNAl和siRNA2转染U87细胞12h后细胞Eag-1mRNA、蛋白的表达产物带明显弱于空白对照组，而siRNA3转染组产物条带虽也弱于空白对照组，但条带仍清晰；MTT检测结果显示与空白对照组比较，50nm01／LsiRNA1、siRNA2转染组和10、20、30、40mmol／L奎尼丁组细胞培养24、48和72h后吸光度值均降低，差异有统计学意义（P＜0．05），奎尼丁IC。为33．7mmol／L。流式细胞仪分析显示与空白对照组比较，50nmol／LsiRNA1、siRNA2转染组和33．7mmol／L奎尼丁组G1期细胞百分比、细胞凋亡率和胞内ROS水平均增加，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论阻断Eag-1通道活性能明显抑制胶质瘤细胞增殖，使G1期细胞比例、胞内ROS水平明显升高并诱导其凋亡。

大鼠视觉皮层动态锰离子增强磁共振功能成像研究

目的应用动态锰离子增强磁共振技术行大鼠视觉皮层功能成像，为神经系统功能的研究提供方法。方法成年雄性Wistar大鼠6只，右颈外动脉插管后于连续的4个时段分别进行不同处理，第一时段（5min）不给予药物，无视觉刺激；第二时段（10min）经右颈外动脉注射甘露醇和氯化锰，无视觉刺激；第三时段（15min）仅注射氯化锰，给予视觉刺激；第四时段（5min）注射氯化锰与谷氨酸混合液，无视觉刺激。每一时段处理后立即进行大鼠头颅磁共振成像，应用SPM软件进行图像的配准和平滑处理，应用Matlab软件得出图像的配色图及等高线图：选取视觉皮层进行兴趣区（ROI）分析，观察不同处理后磁共振图像中脑内特异性增强区域并比较大鼠视觉皮层的信号强度。结果磁共振图像分析显示第一、二时段处理后大鼠脑内未发现特异性增强区域。第三时段处理后大鼠右侧视觉皮层特异性增强，第四时段处理后大鼠右侧脑内多个核团特异性增强：ROI分析显示第三时段处理后的视觉皮层信号强度（1．897±0．172）明显强于第二时段（1．549±0．163），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论动态锰离子增强磁共振成像技术能分析大鼠视觉皮层功能活动，可做为研究神经系统功能的新方法。

胚胎肝细胞修复大鼠脑组织辐射损伤的研究

目的 研究胚胎肝细胞对脑组织辐射损伤的修复作用.方法 24只雌性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组和治疗组,每组8只.后2组大鼠行一次性全脑照射20GyX线制备脑辐射损伤模型,造模后1、7、14、21 d治疗组大鼠后尾静脉注射雄性大鼠胚胎肝细胞1 mL（3×106个/mL）,模型组大鼠尾静脉注射等量生理盐水.于每次输注后12h取各组大鼠血清,分光光度计测定丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的水平,ELISA法测定肿瘤坏死因子α（TNFα）、白介素-1（IL-1）和白介素-6（IL-6）的含量.造模28 d后处死大鼠,RT-PCR检测治疗组大鼠脑组织Y染色体mRNA的表达,HE染色观察海马区脑组织的病理变化.结果 造模后1、7、14、21、28 d,与对照组比较,模型组和治疗组大鼠血清SOD水平较低,而MDA、TNFα、IL-1和IL6水平较高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与模型组比较,治疗组大鼠血清SOD水平较高,而MDA、TNFα、IL-1和IL6水平较低,差异有统计学意义（P＜0.05）;RT-PCR结果显示治疗组大鼠脑组织有Y染色体mRNA表达;HE染色显示治疗组大鼠海马区虽可见凋亡状态的尼氏小体,但大脑皮质较模型组大鼠明显增厚,可见再生的海马神经元.结论 胚胎肝细胞能够修复脑组织的辐射损伤.

有序胶原支架联合胶原靶向神经营养因子3对背根节细胞突起延伸的影响

目的 研究天然有序胶原支架联合具有胶原靶向结合域（CBD）的神经营养因子3（NT3）（CBD-NT3）对背根节细胞（DRGs）突起延伸的影响，探讨这种联合策略对脊髓损伤修复的意义。方法将SD大鼠尾肌腱行去细胞处理制备胶原支架，HE染色评价支架的处理效果；去细胞处理后支架负载CBD-NT3并与SD大鼠原代DRGs体外共培养1、3、5d．同时设NT3、PBS组作对照：FDA染色观察共培养后DRGs并定量分析各组细胞突起的长度及角度；扫描电镜观察共培养3d后支架和DRGs的超微结构。结果HE染色显示经处理后支架内细胞成分基本去除；共培养3d后CBD-NT3组DRGs突起延伸长度最长，与NT3组和PBS组比较差异均有统计学意义（P＜0．05）；细胞突起总体延伸方向与支架纤维长轴夹角的双侧95％可信区间为（18．8-20．7）°；扫描电镜显示DRGs能依靠胶原支架表面地貌锚定和生长。结论有序胶原支架联合CBD—NT3能定向引导并促进细胞突起延伸。为脊髓损伤修复的研究提供了一种有效的途径。

脑动脉瘤模型制作及高血压对其影响的实验研究

目的建立脑动脉瘤动物模型并初步探讨高血压对脑动脉瘤的影响。方法45只雄性SD大鼠按随机数字表法分为高血压组、正常血压组和正常对照组。高血压组行脑动脉瘤模型制作＋双侧肾动脉狭窄术；正常血压组只建立脑动脉瘤模型；正常对照组不予任何处理。各组在术前，术后6周、12周三个时间点分别测量各组大鼠动脉收缩压。术后12周测量脑动脉瘤大小，并灌注固定，取脑动脉瘤部位血管组织，应用HE染色、Van Geson染色和Verhoeff染色进行病理检查。结果高血压组在处死前血压明显升高[（197．48±15．44）mmHg]，与手术前的血压[（104．40±14．70）mmHg]相比差异有统计学意义（P〈0．05）；处死前脑动脉瘤的长度[（2．38±0．31）mm]和宽度[（1．89±0．35）mm]与脑动脉瘤制作完成时的长度[（1．62±0．18）mm]和宽度[（1．36±0．09）mm]相比差异有统计学意义（P〈0．05）；正常血压组和正常对照组无明显变化。病理检查显示高血压组血管内膜消失，弹力层完全断裂；正常血压组尚存部分弹性纤维；正常对照组血管组织无改变。结论本实验采用的脑动脉瘤模型稳定性好，制作方便，具有与人类脑动脉瘤相似的形态和病理结构。高血压对脑动脉瘤的弹力蛋白和胶原蛋白有明显影响，是影响脑动脉瘤增大的重要因素之一。

脑损伤修复与功能重建干预策略

脑是人体的生命中枢,脑功能损害将严重影响人的生存与健康.脑损伤是造成脑功能损害的直接原因,具有发病率高,致死、致残率高的特点.无论是脑创伤、脑部缺血或出血,其共同病理特点都是神经元严重受损、缺失或死亡,造成神经功能障碍,患者出现偏瘫、失语、视力丧失、智力及意识障碍等症状,严重影响患者生活质量.在临床上,脑损伤主要包括颅脑损伤和卒中,前者因机械性损伤所致,后者因脑血管梗死或出血引起,其中缺血性卒中（缺血性脑损伤）最为多见,占80%[1].

高颈位手术入路中寰椎横突的解剖学意义

目的研究寰椎横突（TPA）在高颈位手术入路中的临床解剖学意义。方法成人尸头标本20例，在手术显微镜下以TPA为参照中心对高颈部进行显微解剖。结果在确定TPA位置之后以之为中心，高颈部的所有重要结构均可有条理地识别。TPA浅面有二腹肌后腹。茎突位于其前方，颈内静脉和后组颅神经位于茎突和TPA之间。沿颈动脉鞘向上可至颈动脉管和颈静脉孔（JF）。JF的前下方，舌下神经通过舌下神经管出颅。TPA后部为枕下三角，三角内可见椎动脉及静脉丛。结论TPA在高颈位手术入路中是一个恒定而又可靠的解剖学标记，可通过其切除病变同时识别并保护相关的重要组织结构，减少并发症的发生。

雌激素缺乏对大鼠颅内动脉瘤形成的影响

目的建立雌激素缺乏的颅内动脉瘤模型，并在此基础上初步研究雌激素缺乏对颅内动脉瘤形成、生长的影响及其可能机制。方法雌性Wistar大鼠30只按随机数字表法分为实验组（切除双侧卵巢＋颅内动脉瘤模型）、实验对照组（切除双侧卵巢旁与其大小相当的一块脂肪＋颅内动脉瘤模型）、空白对照组（每组各10只）。大鼠去势模型或腹部假手术模型制作后2周用猪胰弹性蛋白酶滴加到颈外动脉及分叉处动脉壁周围，在颈外动脉距分叉处约1．5mm位点用两根手术线结扎颈外动脉，在两根线之间剪断颈外动脉，使颈外动脉的盲段形成颈内动脉的一个动脉瘤。动脉瘤模型制作6周后取右心房全血2mL，离心取上清液后于-20℃冰箱保存，用于检测大鼠血清中雌激素的含量，同时游标卡尺测量颅内动脉瘤长度和直径，并取实验组及实验对照组的颅内动脉瘤组织和空白对照组相应的一段颈外动脉组织用于常规组织切片染色。结果实验组血清中雌激素水平为（105．00±12．96）pmol／L，实验对照组为（178．50±25．96）pmol／L，空白对照组为（180．40±18．70）pmol／L，实验组与实验对照组及空白对照组组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。实验组颅内动脉瘤长度扩张率为（131.31±6．63）％，直径扩张率为（125．10±5．49）％，实验对照组为（109．90±3．44）％和（106．82±2.49）％，比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论雌激素缺乏对颅内动脉瘤的形成、生长有一定的促进作用。本研究使用盲段法结合酶消化法制作颅内动脉瘤模型简便可行。

伽玛刀治疗功能性泌乳素腺瘤患者内分泌改变及疗效分析

目的评价伽玛刀治疗功能性泌乳素（PRL）腺瘤的疗效及患者内分泌的改善程度。方法回顾性分析135例应用伽玛刀治疗的功能性PRL腺瘤患者的临床资料，按照治疗剂量分为3组，A组：中心剂量50～60Gv（含50Gy），边缘剂量：20～30Gy；B组：中心剂量40～50Gy，边缘剂量15～25Gy；C组：中心剂量30～40Gy，边缘剂量12～20Gy；比较3组患者的临床资料和伽玛刀治疗后PRL水平的改变。结果伽玛刀治疗后患者临床症状部分缓解90例（66．7％1，全部缓解35例（25．9％），无变化10例（7．4％）；3组患者的年龄、性别及肿瘤大小差异均无统计学意义（P〈0．05），经不同剂量伽玛刀治疗后患者PRL正常率不同，差异有统计学意义（F=8．604，P=0．000），两两比较结果显示伽玛刀中心剂量和边缘剂量较高时．PRL正常率较高。结论伽玛刀治疗功能性PRL腺瘤，在控制肿瘤的同时改善内分泌功能，可以作为临床治疗功能性PRL腺瘤的方法之一。

血脑屏障紧密连接在人脑胶质瘤中的变化

目的 探讨人脑胶质瘤血脑屏障（BBB）内皮细胞间紧密连接的变化及其可能的分子机制. 方法 将南方医科大学珠江医院神经外科自2008年至2009年切除的胶质瘤和正常脑组织标本分为3组：正常脑组织组（n=6）、低级别胶质瘤组（n=11）与高级别胶质瘤组（n=10）,采用透射电镜观察标本BBB紧密连接的超微结构特征,应用免疫荧光双标染色和RT-PCR分别检测标本紧密连接蛋白Claudin-5和Claudin-5 mRNA的表达. 结果 电镜结果 显示正常脑组织微血管相邻内皮细胞间可见连续条带状的紧密连接.细胞间未见裂隙.低级别胶质瘤中多数微血管内皮细胞间可见连续的紧密连接,未见明显窗口形成.高级别胶质瘤中微血管内皮细胞间紧密连接破坏严重,内皮细胞间可见明显裂隙;免疫荧光双标染色结果 显示正常脑组织中微血管内皮细胞上有大量Claudin-5表达.低级别胶质瘤中微血管内皮细胞上Claudin-5表达略为下降,而高级别胶质瘤中微血管内皮细胞上无明显Clandin-5表达;RT-PCR结果 显示高级别胶质瘤Claudin-5 mRNA表达低于正常组脑组织和低级别胶质瘤,差异有统计学意义（P〈0.05）. 结论 在脑胶质瘤发生发展过程中.胶质瘤细胞可以导致BBB内皮细胞间紧密连接蛋白Claudin-5的表达下降及BBB紧密连接结构的破坏,而紧密连接蛋白Claudin-5这一分子元件的表达下降可能是紧密连接结构受到破坏的重要分子机制.