慢病毒介导RNAi抑制大肠癌细胞APRIL表达对化疗敏感性的影响

目的探讨慢病毒介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默APRIL基因对大肠癌细胞株LOVO化疗敏感性的影响。方法实验分为3组:siRNA-APRIL组、非特异性序列组和空白对照组。制备siRNA-APRIL慢病毒表达载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。转染LOVO细胞48 h后,Western blot检测LOVO细胞的APRIL表达水平;同时用10μg/ml5-FU处理细胞,5-FU作用72 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化,MTT法检测细胞增殖抑制率。结果PCR和测序证实,成功构建siRNA-APRIL慢病毒表达载体。Western blot检测表明siRNA-APRIL组的APRIL表达水平下调。5-FU处理LOVO细胞后,流式细胞仪检测各组的凋亡率分别为(21.12±3.35)%、(13.06±1.92)%和(12.28±1.79)%,siRNA-APRIL组显著高于另两组(P<0.01),且G0/G1期细胞增多,G2/M期细胞减少(P<0.05);MTT法检测显示各组的增殖抑制率分别为(59.67±5.03)%、(42.33±4.16)%、和(39.67±4.73)%,siRNA-APRIL组显著高于另两组(P<0.01)。结论以APRIL为靶标的RNA干扰能下调大肠癌细胞株LOVO中的APRIL表达,增强其对5-FU的化疗敏感性。

MIER3在结直肠癌中的表达及其相关蛋白的生物信息学分析

目的构建基因真核表达载体并探讨MIER3对结直肠癌细胞生物学特性的影响,应用生物信息学方法对MIER3及其相互作用蛋白进行预测分析。方法应用Real-time PCR及Western blot方法检测MIER3在8例结肠癌及相应癌旁正常组织中mRNA和蛋白表达水平的差异表达;通过构建真核表达载体pcDNA3-MIER3,应用CCK8增殖实验、Transwell侵袭实验检测过表达MIER3对结直肠癌细胞株生物学特性的影响,进一步应用生物信息学方法对MIER3及其相互作用蛋白进行预测和分析。结果 MIER3在8例结肠癌组织中其mRNA及蛋白水平的表达明显低于相应正常癌旁组织;酶切及测序结果显示成功克隆构建pcDNA3-MIER3真核表达载体;CCK8增殖实验、Transwell侵袭实验结果显示过表达MIER3可明显抑制结直肠癌细胞株的增殖及侵袭能力;应用模式生物果蝇相互作用蛋白数据库DIP和基于保守的蛋白相互作用分析方法,预测NAT9可能是MIER3的潜在相互作用蛋白,提示MIER3可能与肿瘤的易感性相关。结论 MIER3与结直肠癌增殖、侵袭密切相关,为进一步深入阐明MIER3在结直肠癌发生发展中的作用奠定基础。