临床免疫学检验技术实验教学改革模式探讨

临床免疫学检验技术是医学检验专业具有较强专业性和实践性的一门重要课程。实验课的传统教学模式也基本沿用理论课的教学方法,实验课的教学内容和体系不完善,教学方法和仪器设备陈旧落后等,针对这些不足之处,改进和优化实验教学形式,实现对当今迅速发展的医学检验专业人才的高质量培养。

HLA-A、HLA-DRB1等位基因多态性与中国南方活动性肺结核患者遗传易感性的相关性

目的研究中国南方活动性肺结核患者的HLA-A、HLA-DRB1等位基因频率分布,并分析该地区HLA-A、HLA-DRB1高分辨分型等位基因与肺结核遗传易感性的关联。方法采用聚合酶链式反应-直接测序基因分型(PCR-SBT),检测中国南方人群活动性肺结核患者(n=294)的HLA-A和HLA-DRB1高分辨等位基因多态性,并与来自HLA频率数据库[(http://www.allelefrequencies.net)]中国南方汉族人群(n=644)的HLA-A和HLA-DRB1等位基因多态性数据进行频率分布比较。结果活动性肺结核(APTB)病例组中HLA-A*0101和HLA-DRB1*1454基因频率显著高于人群对照组(2.4%vs 0.6%,χ~2=10.788,P=0.001,Pc=0.016;7.5%vs 0%,χ~2=69.850,P<0.0001);而APTB病例组中HLA-DRB1*1202和HLA-DRB1*1401基因频率显著低于人群对照组(10.4%vs 16.1%,χ~2=9.845,P=0.002,Pc=0.044;0%vs 3.1%,χ~2=18.520,P<0.0001)。结论在中国南方人群中,结核病的易感性与HLA-A和HLA-DRB1高分辨等位基因有一定的相关性,结果提示HLA-A*0101和HLA-DRB1*1454等可能是中国南方人群的肺结核易感基因,而HLA-DRB1*1202和HLA-DRB1*1401等可能是该地区人群结核病的保护基因。

免疫相关GTP结合蛋白2的亚细胞定位分析

目的:对免疫相关GTP结合蛋白2(GTPase of immunity-associated protein 2,GIMAP2)进行亚细胞定位分析,为深入研究GIMAP2蛋白的功能奠定基础。方法:使用国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库查询获取GIMAP2的蛋白序列,再利用生物信息学在线分析工具对GIMAP2蛋白的跨膜结构、核定位信号(nuclear localization signal,NLS)、核输出信号(nuclear export signal,NES)及亚细胞定位进行分析预测。采用PCR技术扩增GIMAP2基因片段,并插入至pQCXIP-mCherry-N1表达载体,用氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆。测序正确的重组质粒pQCXIP-GIMAP2-mCherry经过提取、纯化步骤后,与逆转录病毒包装质粒VSVG、Gag/Pol在脂质体介导下共同转入HEK293FT细胞中进行病毒包装。转染48 h后收集病毒上清,直接感染人乳腺癌细胞系MDA-MB-436。使用免疫荧光染色方法检测内、外源性GIMAP2在MDA-MB-436胞内表达定位情况。使用绿色荧光化学染料分别标记稳定表达GIMAP2-mCherry融合蛋白的MDA-MB-436活细胞中的线粒体、内质网、脂滴,在超分辨率显微镜N-SIM下观察其与红色荧光的GIMAP2蛋白的定位情况。结果:生物信息学分析数据显示,由337个氨基酸组成的GIMAP2蛋白在羧基端可能有2个跨膜螺旋结构,其中跨膜螺旋含预期氨基酸数为40~41个,紧随跨膜螺旋结构之后的蛋白结构朝细胞质侧;羧基端第279~281位氨基酸有NES但无NLS;可能定位在内质网。测序结果表明,成功构建表达载体pQCXIP-GIMAP2-mCherry。荧光染色结果证实,GIMAP2-mCherry融合蛋白成功在MDA-MB-436细胞内表达,并与内源性GIMAP2定位一致,分布于内质网和脂滴。结论:免疫相关GTP结合蛋白2定位于内质网和脂滴,可能与脂代谢相关。

黏膜相关恒定T细胞在感染性疾病中的免疫应答作用

黏膜相关恒定T细胞(mucosal-associated invariant T cells,MAIT)是一种高度保守的免疫细胞,可通过主要组织相容性复合物1类相关蛋白途径或细胞因子途径被激活,进而参与固有和适应性免疫应答。目前已证实MAIT细胞大量存在于人体外周血及特定组织,并在感染性疾病中发挥重要作用。本文将综述MAIT细胞在不同病原体感染过程中的免疫应答作用,并探讨在感染性疾病中以MAIT细胞为靶点的治疗方法及面临的挑战。