基于磁性碳纳米管修饰印刷电极的无酶型HIV p24安培免疫传感器

在多壁碳纳米管(MWNTs)表面固定Fe3O4(核)/Au(壳)纳米微粒(GMP),使其具有超顺磁性,包被p24抗体(anti p24),制得检测探针(MWNTs-GMP/anti p24);在磁场作用下将此探针吸附于N,N'-双(2-羟基苯亚甲基)邻苯二胺合铜(CuRb)修饰的碳基丝网印刷电极(SPCE|CuRb)表面,制得了免疫传感电极(SPCE|CuRb/MWNTs-GMP/anti p24)。当此电极在含p24样本中于室温下温育15min后,随p24浓度的增加在电极表面生成的免疫复合物增加,导致CuRb对H2O2的催化还原电流下降。在含5mmol/L H2O2的PBS(pH7.0)中和-300mV下,催化还原电流降低值ΔIo与p24浓度在0.6～160μg/L呈线性关系;检出限为0.32μg/L(3σ)。将其用于实际样品检测,结果与标准EILSA方法一致。由于MWNTs-GMP/anti p24具有超顺磁性,并可以显著提高电极比表面积及anti p24负载量,而CuRb代替易失活的HRP酶,使得该传感器灵敏度和稳定性俱佳,电极表面可更新,可用于艾滋病人血清中p24筛测。

基于包被包膜糖蛋白抗体纳米金磁性微粒的无试剂安培免疫传感器

在玻碳电极(GCE)表面固定对H2O2有催化还原活性的富马酸二甲酯联吡啶铜(GCE|CuL);再在GCE|CuL表面修饰一层金磁微粒-壳聚糖复合膜(nanoAu/Fe3O4/Chit),进而固定艾滋病毒(HIV)诊断标志物——包膜糖蛋白(gp160)抗体(antigp160),由此构建了一类快速检测gp160的无试剂安培免疫传感器。当该传感器在含gp160溶液中37℃下温育30min后,传感器表面生成的免疫复合物随gp160浓度的增大而增加,导致CuL对H2O2电催化还原效果降低,催化电流呈现下降趋势。在PBS溶液(pH7.0)和-300mV下,催化电流的降低值ΔIo与gp160浓度在1～400μg/L呈线性关系;检出限为0.5μg/L(3σ)。研制的免疫传感器检测gp160时,一步免疫反应即可得结果,较相同条件下包被gp160抗体的纳米金单分子层修饰电极灵敏度更高,检测范围更宽,有望用于艾滋病人血清标志物gp160快速筛测。

人胰岛细胞制备过程中细菌性污染的监测与干预

目的:在胰岛细胞制备过程中监测并预防性使用敏感抗生素,防止、清除制备过程中出现的污染,保证用于移植的胰岛细胞质量,以期减少移植后感染的发生,确保移植进一步用于临床的效果。方法:体外分离人胰岛细胞实验是于2004-11/2005-10在广州中山大学附属第三医院中心实验室进行。①成人胰岛细胞的分离纯化及其过程中细菌性污染的监测:胰腺取自成人脑死亡尸体,生前无糖尿病及相关病史(家属知情同意),胰腺进行修剪、灌注后,胰岛细胞消化收集中;COBE-2991细胞纯化机纯化胰岛细胞后;体外培养48h后6个步骤取样进行细菌性污染的鉴定,并作药敏实验。②在同样的制备过程中,分别采用青霉素+链霉素+两性霉素B或泰能+两性霉素B进行干预,未施加干预措施作为对照组。③胰岛细胞的功能测定:采用体外胰岛素释放试验,测定纯化培养后未被污染的胰岛细胞功能。结果:①3组不同处理的胰岛细胞(纯化培养后)的污染率:未用抗生素的对照组为100%、青霉素+链霉素+两性霉素B组为50%,泰能+两性霉素B组为0,3组污染率差异有显著性(P<0.05)。②取培养后未污染的胰岛细胞行体外胰岛素释放试验结果:青霉素+链霉素+两性霉素B组、泰能+两性霉素B组两组胰岛细胞高糖时胰岛素释放量分别是低糖的2.41和2.36倍(t=4.76,P<0.05),提示青霉素+链霉素+两性霉素B组、泰能+两性霉素B组胰岛细胞分泌功能良好。两组间的胰岛素敏感指数(ISI)在统计学上差异也无显著性(t=0.31,P=0.76),说明两组抗生素对胰岛细胞功能的影响无差异。结论:胰岛细胞制备过程中细菌性污染严重。泰能+两性霉素B的联合应用能有效清除胰岛细胞制备过程中出现的细菌性污染,经泰能+两性霉素B处理的胰岛细胞行胰岛素释放试验表明分泌功能良好。

肾移植受者术后早期他克莫司用药剂量及浓度个体差异的研究

目的探讨肾移植受者术后早期他克莫司（FK506）剂量及浓度个体差异的原因。方法肾移植术后早期采用FK506、霉酚酸酯及激素三联免疫抑制剂的受者118例，记录性别、年龄、身高，术后第3、7、14、30天分别记录体质量、FK506剂量、激素剂量、腹泻、血脂、肝功、肾功、白蛋白、血细胞比容等指标，测定每例患者细胞色素酶P450—3A5（cYP3A5）和多药耐药基因1（MDR1）3435、2677、1236位点基因多态性及不同时期FK506全血谷浓度，以FK506浓度／（剂量×体表面积）为因变量分别进行多元线性回归分析。结果多元线性回归模型的拟合度偏低，修正R2值在术后第3、7、14、30天分别为0．284、0．267、0．417、0．324。药物基因组学因素有MDR12677、MDR1 1236、MDR13435且变化剧烈，不同个体达到相同FK506浓度所需剂量突变型纯合子〈杂合子〈野生型纯合子。非药物基因组学因素在术后第3天为年龄、白蛋白和高密度脂蛋白胆固醇，第7天为白蛋白、年龄和血清肌酐，第14天为激素剂量和天冬氨酸转氨酶，上述影响因素均与FK506浓度／（剂量×体表面积）呈正相关。结论肾移植术后早期受者FK506剂量及浓度个体差异的原因主要是术后用药和受者剧烈的内环境变化，并与受者MDR1基因多态性、年龄、白蛋白、移植肾功能恢复情况、血脂和肝功能有关，术前应充分透析，尽可能改善患者一般情况，术后应当尽量避免使用对FK506吸收和代谢干扰大的药物。