新生儿化脓性脑膜炎并发脑白质损伤危险因素分析

目的探讨新生儿化脓性脑膜炎并发脑白质损伤(WMD)的临床特点及高危因素。方法回顾分析2008年1月至2018年1月收治的诊断为新生儿化脓性脑膜炎的足月新生儿的临床资料。结果170例足月化脓性脑膜炎新生儿中,32例(18.82%)合并WMD(WMD组),其中男20例、女12例,平均胎龄(38.71±1.14)周,出生体质量(2.94±0.26)kg;另138例患儿未并发WMD(对照组),男80例、女58例,平均胎龄(38.62±1.04)周,出生体质量(2.97±0.25)kg。两组患儿性别、胎龄、出生体质量的差异无统计学意义(P>0.05)。170例患儿中60例(35.29%)明确细菌病原学诊断,其中革兰阴性杆菌25例、革兰阳性球菌35例。WMD组的洋葱伯克霍菌阳性率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组间革兰阳性球菌及阴性杆菌的阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。WMD组同年龄组异常脑电图以及听力损害发生率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。惊厥(OR=5.28,95%CI:1.80~15.56)、脑脊液白细胞升高(OR=4.22,95%CI:1.47~12.07)、脑脊液乳酸脱氢酶升高(OR=3.64,95%CI:1.11~11.99)、细菌培养阳性(OR=3.12,95%CI:1.13~8.62)为足月新生儿化脓性脑膜炎并发WMD的独立危险因素。ROC曲线显示,脑脊液白细胞(AUC=0.707)、脑脊液乳酸脱氢酶(AUC=0.672)对于预测化脓性脑膜炎并发WMD有一定准确性。结论新生儿化脓性脑膜炎惊厥表现,脑脊液白细胞、乳酸脱氢酶升高可能为并发WMD的高危因素。

粒细胞集落刺激因子的神经保护作用及临床试验研究进展

粒细胞集落刺激因子作为一种刺激骨髓粒系造血的生长因子,在临床上被用于治疗各种原因引起的粒细胞减少症。然而,越来越多体内外研究实验及临床试验表明粒细胞集落刺激因子通过激活多种信号转导通路在神经系统损伤性疾病中发挥神经保护作用,包括动员外周干细胞迁移至神经系统、减轻神经细胞凋亡、平衡炎症反应、促进神经干细胞再生及血管生成等,但也存在一定的争议。目前在脑卒中、肌萎缩性侧索硬化及脊髓损伤等神经系统疾病中采用粒细胞集落刺激因子治疗已进入临床试验阶段,在缺氧缺血性脑损伤新生动物模型中也证实其疗效。现将粒细胞集落刺激因子的神经保护作用及临床试验安全性及疗效作一综述。

粒细胞集落刺激因子通过mTOR/p70S6K途径调节新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后炎症反应

目的观察粒细胞集落刺激因子（G-CSF）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后炎症反应的影响及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/p70核糖体S6蛋白激酶（mTOR/p70S6K）信号通路在其中发挥的作用。方法7日龄新生SD大鼠90只按随机数字表法随机分为假手术组、缺氧缺血（HI）模型组、G-CSF组、雷帕霉素组及对照组，改良Rice法建立新生大鼠HIBD模型。HI前1 h，雷帕霉素组腹腔注射雷帕霉素250 μg/kg，对照组予等体积乙醇腹腔注射。HI 1 h后，G-CSF组、雷帕霉素组及对照组腹腔注射G-CSF 50 μg/kg，HI模型组及假手术组予等体积9 g/L盐水腹腔注射。HI 48 h后，Western blot检测脑组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-10及mTOR/p70S6K信号通路蛋白水平，尼氏染色评估海马CA1区及皮质神经元损伤情况，2，3，5-氯化三苯基四氮唑染色检测脑梗死面积。结果与HI模型组比较，G-CSF组及对照组脑梗死面积减少[（12.87±1.54）%、（11.90±1.31）%比（24.21±3.28）%]，尼氏染色阳性神经元计数增多[海马CA1区：（61.00±4.90）个/视野、（61.67±6.40）个/视野比（42.67±4.46）个/视野；皮质：（92.67±6.68）个/视野、（90.17±4.45）个/视野比（70.83±6.97）个/视野]，TNF-α及IL-1β水平降低（TNF-α：0.67±0.07、0.55±0.05比0.86±0.05；IL-1β：0.65±0.06、0.52±0.10比0.86±0.06），IL-10、p-mTOR/mTOR及p-p70S6K/p70S6K水平升高（IL-10：0.68±0.04、0.62±0.05比0.34±0.02；p-mTOR/mTOR：0.53±0.02、0.51±0.01比0.26±0.01；p-p70S6K/p70S6K：0.89±0.03、0.90±0.03比0.55±0.02），差异均有统计学意义（均P〈0.05）。与G-CSF组及对照组比较，雷帕霉素组脑梗死面积增加[（25.70±1.50）%]，尼氏染色阳性神经元计数减少[海马CA1区：（40.67±3.50）个/视野；皮质：（68.33±8.17）个/视野]，TNF-α及IL-1β水平升高（分别为0.97±0.06、0.98±0.10），IL-10、p-mTOR/mTOR及p-p70S6K/p70S6K水平降低（分别为0.21±0.02、0.30±0.01、0.55±0.01），差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论G-CSF可能通过上调mTOR/p70S6K信号通路抑制HIBD后的炎症反应。

G-CSF通过上调mTOR/p70S6K信号通路抑制新生大鼠HIBD后神经细胞凋亡

目的 探讨粒细胞集落刺激因子（G-CSF）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后神经细胞凋亡的影响及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/p70S6K信号通路在其中发挥的作用. 方法 90只7d龄新生SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、G-CSF组、雷帕霉素组及对照组,每组18只.后4组采用改良Rice-Vannucci法制备成HIBD模型,其中雷帕霉素组、对照组于HIBD前1h分别腹腔注射雷帕霉素250μg/kg或等体积乙醇;G-CSF组、雷帕霉素组及对照组于HIBD后1h腹腔注射G-CSF 50 μg/kg,假手术组、模型组予等体积生理盐水腹腔注射.HIBD后48h,采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色检测脑梗死面积并计算梗死面积比,Nissl染色评估海马CA1区及皮质神经细胞情况,TUNEL法检测海马CA1区及皮质神经细胞凋亡情况,Westernblotting检测脑组织中抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）及促凋亡因子Caspase-3活化片段（CC3）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）,mTOR、磷酸化（p）-mTOR及其下游p70S6K、p-p70S6K蛋白的表达. 结果 与模型组相比,G-CSF组和对照组梗死面积比明显减少,海马CA1区及皮质Nissl染色阳性细胞数明显增多、神经细胞凋亡指数明显降低,脑组织中CC3、Bax蛋白表达水平明显降低,Bcl-2蛋白表达水平明显升高,p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K比值明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）.与G-CSF组和对照组相比,雷帕霉素组梗死面积比明显增加,海马CA1区及皮质Nissl染色阳性细胞数明显减少、神经细胞凋亡指数明显增加,脑组织中CC3、Bax蛋白表达水平明显升高,Bcl-2蛋白表达水平明显降低,p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K比值明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）. 结论 G-CSF可能通过上调mTOR/p70S6K信号通路抑制HIBD后神经细胞凋亡.

粒细胞集落刺激因子对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内质网应激的影响

目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠的神经保护作用及其对内质网应激的影响。方法54只7日龄新生SD大鼠采用随机数字表法分为3组:假手术组(Sham组)、缺氧缺血模型组(HIBD组)及给药组(G-CSF组),每组18只,采用改良Rice法建立HIBD模型,G-CSF组造模后1 h腹腔注射50μg/kg G-CSF,Sham组及HIBD组注射相应剂量9 g/L盐水。各组分别于造模后24 h采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测脑梗死大小,苏木精-伊红(HE)染色观察大脑病理变化,脱氧核糖核苷酸未端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)观察大脑皮质及海马CA1区神经细胞凋亡情况,采用免疫荧光检测各组大鼠大脑皮质葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达情况,采用Western blot检测GRP78、CCAAT/增强子结合蛋白(CHOP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)内质网应激相关蛋白表达情况。结果造模后24 h,HE染色示Sham组未见明显神经元损伤表现,HIBD组可见脑组织结构改变明显,G-CSF组病理改变较HIBD组减轻。HIBD组梗死面积[(25.40±5.15)%]显著高于Sham组[(0.31±0.15)%]及G-CSF组[(16.36±4.97)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。HIBD组免疫荧光GRP78阳性表达[(49.38±10.06)%]显著高于Sham组[(9.12±4.50)%]及G-CSF组[(30.61±6.35)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。HIBD组海马CA1区及皮质凋亡细胞比例[(44.84±11.54)%、(48.23±14.07)%]均明显高于G-CSF组[(17.87±7.20)%、(26.18±9.96)%],均显著低于HIBD组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。HIBD组GRP78、CHOP、Caspase-12相对表达水平(0.63±0.24、0.72±0.21、0.68±0.25)均显著高于Sham组(0.20±0.08、0.28±0.08、0.23±0.07)及G-CSF组(0.39±0.13、0.51±0.18、0.48±0.16),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论腹腔注射G-CSF对HIBD新生大鼠有神经保护作用,可能通过抑制内质网应激减少神经细胞凋亡。