人自体血清培养的鼻中隔软骨细胞

目的:比较人自体血清和胎牛血清对人鼻中隔软骨细胞增殖和分化的影响。方法:实验于2004-08/2005-03在解放军第一军医大学珠江医院全军儿科中心实验室完成。①全血标本取自健康鼻中隔偏曲手术患者,男2例(分别为27岁和32岁),女1例(35岁),经患者知情同意。②自体血清的制备:抽取患者全血40mL,室温静置1h后,离心(1000r/min,30min)后取上清约20mL。③取手术患者的鼻中隔软骨分离软骨细胞进行原代培养,设人自体血清组和胎牛血清组,分别加含体积分数为0.1的自体血清和胎牛血清的1640培养基,并进行传代培养。④取第3代软骨细胞接种于培养板上培养,设人自体血清组、胎牛血清组和对照组(无血清培养),分别于培养后的第1,2,3,4,5,6天行四甲基偶氮唑盐检测。⑤取第2,3,4,5,6代软骨细胞接种于养板上培养,设人自体血清组、胎牛血清组和对照组,行软骨基质蛋白多糖含量(35S-Na2SO4掺入量)测定。⑥取第2代软骨细胞,分别将人自体血清组和胎牛血清组的细胞接种于两个25mL的培养瓶中培养至细胞传代老化,观察细胞表型。结果:①在体积分数为0.1的血清浓度下,人自体血清和胎牛血清对人鼻中隔软骨细胞增殖作用差异不明显(P>0.05)。②人鼻中隔软骨细胞蛋白多糖合成量的比较显示两种血清对第2,3,4,5代软骨细胞软骨基质蛋白多糖的合成作用差异不明显(P>0.05),但在第6代,人自体血清组软骨细胞蛋白多糖合成量明显高于胎牛血清组(P<0.01)。③胎牛血清人鼻中隔软骨细胞到第6代几乎所有细胞变为梭形,人自体血清培养的软骨细胞到第7代以后才绝大部分变为梭形细胞,初步证实了人自体血清在维持鼻中隔软骨细胞表型方面也有一定的作用。结论:人自体血清能够有效地促进软骨细胞增殖和蛋白多糖合成同时维持细胞表型。