骨髓源性神经干细胞去甲肾上腺素神经递质变化的实验研究

目的:研究骨髓源性神经干细胞在体外培养及诱导分化条件下能否分泌去甲肾上腺素(NE).方法:分离兔骨髓基质细胞(BMSCs),在体外应用神经干细胞培养液和诱导分化因子使其分化为神经干细胞及神经元样细胞,采用免疫细胞化学方法进行鉴定;应用高效液相色谱法(HPLC)检测其NE的含量.结果:BMSCs培养7～14 d免疫细胞化学鉴定Nestin抗原阳性;培养20 d可见长突起神经元样细胞,神经核蛋白(NeuN)呈阳性表达;HPLC检测神经干细胞培养液及L-02肝细胞等阴性对照组及BMSCs(0～5 d)组未检测到NE,骨髓源性神经干细胞(培养7 d、14 d)及神经元样细胞(培养20d)均可检测到NE.随着培养天数的增加,所含的NE浓度也逐渐增加(P＜0.01).结论:在适宜条件下,兔BMSCs可在体外分化成神经干细胞及神经元样细胞,并合成和分泌NE.

神经元膜NMDA受体蛋白免疫复合物单分子纳米结构及定位AFM比较研究(英文)

目的 探讨NMDAr(N- 甲基- D- 天冬氨酸受体)在神经细胞膜表面定位,对比不同成像方法的特点,建立纳米尺度神经细胞膜表面蛋白单分子三维标记的免疫细胞化学新方法。方法 应用原子力显微镜,对分布在云母表面的抗NMDAR1亚单位IgG 葡萄球菌蛋白A 胶体金颗粒免疫标记复合物分子进行扫描,明确其特定的三维结构作为对照标准,然后扫描结合了免疫标记复合物分子的神经细胞膜表面,对表面形貌作出对比后确定目的抗原的定位和复合物三维结构。并与光镜、激光共聚焦、扫描电镜等方法进行对比。结果 在空白云母表面,免疫复合物分子在原子力显微镜下呈现出均匀分散粒径为49nm的特征性球形结构。在神经元表面结合免疫标记物后可以发现有大量的粒径为53nm的球形或双球形(短棒状)结构,颗粒均匀,截面为双峰或单峰。光镜下染色成片状结果,在共聚焦显微镜下荧光呈颗粒点状分布,扫描电镜结果为单个或结合颗粒,缺乏三维成像能力。结论 原子力显微镜下免疫胶体金标记技术可以在纳米尺度对目的膜受体蛋白进行定位和表面三维结构测定。NM- DA受体蛋白可以结合一个或两个胶体金复合物,与传统成像手段相比,原子力显微镜下胶体金标记方法可以对单个膜NMDA受体蛋白抗原进行定位、定性、定量标记测定。

氯胺酮对培养胎鼠皮层神经元NMDA兴奋毒性损伤的保护作用

目的研究氯胺酮对培养神经细胞兴奋性氨基酸N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)损伤的保护作用。方法采用原代培养的胎鼠皮层神经细胞模型,给予NMDA直接损伤,加入不同浓度的氯胺酮,测定神经细胞损伤后噻唑蓝(MTT)变化。结果氯胺酮在50～1000μmol/L范围内存在对兴奋性氨基酸损伤的保护作用,非剂量线性相关。结论氯胺酮对神经元NMDA兴奋毒性损伤产生拮抗作用,离体细胞模型中1×102-3μmol/L浓度左右具有保护效果。

MgSO_4对神经元NMDA兴奋毒性损伤的剂量依赖保护作用

目的研究镁离子(Mg2+)对神经细胞兴奋性氨基酸N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)损伤的保护作用。方法采用原代培养的大鼠皮层神经细胞模型,给予NMDA损伤,加入不同浓度的Mg2+,测定神经细胞损伤噻唑蓝(MTT)变化。结果Mg2+对兴奋性氨基酸损伤保护作用在1.0~3.0 mmol/L范围内存在,2.0 mmol/L效果最可靠。结论在重型颅脑损伤的临床治疗中应尽早使用镁剂,剂量根据脑脊液浓度尽快调整到2.0 mmol/L保护作用最好。

粉防己碱对培养皮层神经元NMDA兴奋毒性损伤的保护作用

目的研究粉防己碱(Tet)对神经细胞兴奋性氨基酸N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)损伤的保护作用。方法采用原代培养的大鼠皮层神经细胞模型,给予NMDA直接损伤,加入不同浓度的粉防己碱,测定神经细胞损伤MTT变化。结果粉防己碱对兴奋性氨基酸损伤保护作用在10-8～10-6mmol/L范围内存在非剂量线性相关。结论Tet通过多靶点对神经元兴奋损伤产生拮抗作用,离体细胞模型中5×10-7mol/L浓度具有最佳的保护效果。