探讨活化素B在皮肤创伤愈合中的作用

目的探讨活化素B(activinB)在离体(In vitro)和载体(In vivo)上对小鼠皮肤创伤愈合的影响。方法利用原代角朊细胞创伤划痕实验在细胞水平上探索不同浓度activinB对细胞划痕愈合的作用,进一步观察activinB对小鼠皮肤创伤模型愈合的影响。每日观察小鼠伤口并记录小鼠创伤愈合面积,断髓处死小鼠取材制作石蜡切片,HE染色,光镜下观察小鼠皮肤动态愈合过程。结果用浓度为10 ng/mL的activinB刺激细胞,发现细胞创伤愈合的速度最快,而100 ng/mL孵育细胞,反而对细胞创伤划痕有抑制作用。进一步利用细胞上的最佳浓度10 ng/mL的activinB刺激小鼠创伤切口,发现其能加速小鼠皮肤创伤愈合。创面闭合率数据:实验组创面愈合速度明显快于对照组(F=70.462,P=0.000)。相同时间点比较实验组创面闭合率优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。肉眼大体观察实验组创面较对照组愈合速度快,HE染色光镜观察显示实验组上皮化速度要快于对照组,至创伤后第5天时,实验组上皮化已经完成,而对照组尚未完成,并且activinB能促进毛囊生长。结论activinB对皮肤角朊细胞创伤愈合有浓度依赖性;适中浓度的细胞因子activinB(10 ng/mL)有加速皮肤创伤愈合,促进毛囊生长的作用。

大鼠白细胞介素10复制缺陷型重组腺病毒前体质粒的构建

目的:构建含有大鼠白细胞介素10基因的重组复制缺陷型腺病毒前体质粒pAd.rIL-10,为后续病毒构建、真核表达及其动物模型研究提供实验基础。方法:实验于2005-07/2006-04在中山大学附属第一医院普通外科实验室完成。①实验材料:SD大鼠购自中山大学动物实验中心(SCXK(粤)2004-0011)。AdEasy系统由美国John Hopkins肿瘤研究中心惠赠。Thermoscript TMR Tkit和Trizol为Invitrogen产品;质粒小量提取试剂盒(QIAGENE公司);PCR试剂盒、限制性内切酶HindⅢ和SaⅡ、DNA marker(大连宝生物公司);限制性内切酶PmeⅠ(英国NEB公司)。克隆大鼠白细胞介素10基因引物合成及测序由上海博亚生物技术有限公司完成。②实验方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法从健康SD大鼠脾脏新鲜组织中提取的总RNA中,克隆大鼠白细胞介素10基因,采用AdEasy-1腺病毒载体系统,经两步氯化钙法通过E.ColiB J5183细菌内同源重组而获得重组腺病毒前体质粒pAd.rIL-10。③实验评估:使用PCR、酶切及DNA测序方法证实重组质粒中的目的基因。结果:①克隆大鼠白细胞介素10基因:用RT-PCR的方法从健康SD大鼠脾脏组织提取的总RNA中扩增出大鼠白细胞介素10基因,基因两端加上了限制酶酶切位点,均经测序证实。②重组腺病毒前体质粒pAd.rIL-10的鉴定:重组转移质粒pAdTrack-CMV.rIL-10及腺病毒前体质粒pAd.rIL-10均含大鼠白细胞介素10基因,经Hind Ⅲ和SaⅡ双酶切后均获得538bp的大鼠白细胞介素10片段。结论:采用AdEasy-1系统经两步氯化钙法成功构建出大鼠白细胞介素10重组腺病毒前体质粒,方法简便易行,结果稳定可靠。

国产人工真皮移植结合自体皮移植修复骨质肌腱外露创面的疗效评价

目的探索国产双层人工真皮结合自体皮移植修复骨质肌腱外露创面的临床疗效。方法第二军医大学长海医院、南方医科大学珠江医院、南方医科大学南方医院、深圳市第二人民医院2014年9月至2015年5月收治的全层皮肤缺损合并骨质肌腱外露的患者共22例,随机分为观察组与对照组,观察组13例采用国产双层人工真皮结合自体刃厚皮片移植修复创面,对照组9例采用皮能快愈双层人工真皮结合自体刃厚皮片移植修复创面。记录两组人工真皮植入次数、首次植入人工真皮至自体皮片植皮术间隔时间、自体皮片植皮术后10 d皮片成活率、3个月随访期内是否出现破溃以及采用Vancouver Scar Score量表对瘢痕进行评分。结果观察组的移植次数为1次9例、2次4例,对照组为1次7例、2次2例,二者比较差异无统计学意义(χ2=0.20,P>0.05);观察组的皮片成活率、瘢痕评分分别为(96.15±5.46)%、(4.08±1.85)分,对照组分别为(95.00±5.60)%、(5.56±1.33)分,二者比较差异无统计学意义(t=0.48、-2.05,P均>0.05);观察组间隔时间为(19.23±6.80)d,对照组为(14.67±5.00)d,二者比较差异有统计学意义(t=-2.11,P<0.05);3个月随访期内观察组与对照组均有1例患者出现破溃,差异无统计学意义(χ2=0.08,P>0.05)。结论国产双层人工真皮可以在骨质肌腱外露创面上达到满意的血管化,结合自体刃厚皮片移植可以获得稳定的覆盖,临床疗效与皮能快愈双层人工真皮无显著差别。