盐酸椒苯酮胺通过降低caspase-3表达减轻庆大霉素豚鼠耳蜗损伤

目的研究盐酸椒苯酮胺(PPTA)对庆大霉素耳蜗损伤的保护作用及抗凋亡机制。方法听力正常豚鼠分3组:正常组、GM组和PPTA组。采用庆大霉素致豚鼠耳蜗损伤模型,PPTA腹腔注射,ABR分析听力变化,Western blot检测耳蜗组织中caspase-3蛋白表达,TUNEL染色、扫描电镜和透射电镜观察形态学改变。结果 ABR反应阈:GM组、PPTA组显著高于正常对照组(P<0.05),PPTA组显著低于GM组;Western blot测caspase-3的表达:结果表明用药后GM组豚鼠caspase-3表达显著增加(P<0.001),PPTA组显著高于正常组但显著低于GM组(P<0.001);TUNEL、扫描和透射电镜观察见:GM组毛细胞损伤严重,耳蜗螺旋器、血管纹和螺旋神经节存在大量凋亡细胞形态;而PPTA组耳蜗组织损伤较GM组明显减轻。结论 PPTA可以通过降低caspase-3蛋白表达抑制凋亡,对庆大霉素豚鼠耳蜗损伤起到保护作用。

Lenti-TK介导间充质干细胞对鼻咽癌CD133^+干细胞的靶向迁移及杀伤作用

目的:观察慢病毒-胸苷激酶(lentivirus-thymidine kinase,Lenti-TK)/间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)对鼻咽癌CD133+干细胞的靶向迁移及杀伤作用。方法:构建包含TK基因的重组慢病毒表达载体Lenti-TK,感染MSC后得到Lenti-TK-MSC,RT-PCR及Western blotting检测Lenti-TK-MSC中HA-TK的表达。免疫磁珠法从鼻咽癌5-8F细胞中分选CD133+细胞;Transwell小室迁移实验检测Lenti-TK-MSC对CD133+5-8F细胞的趋向性;Lenti-TK-MSC联合更昔洛韦(ganciclovir,Lenti-TK-MSC/GCV)与CD133+5-8F细胞共培养,CCK-8试剂盒检测其对细胞的杀伤作用和旁观者效应。结果:成功构建重组慢病毒载体Lenti-TK,其滴度为1×108UT/ml,Lenti-TK(MOI=50)感染MSC 72 h时,感染效率达(95.1±0.1)%。Lenti-TK-MSC迁移至CD133+5-8F细胞组的细胞数明显多于CD133-5-8F细胞组、未分选5-8F细胞组[(83.0±8.7)vs(29.6±5.3)、(38.3±5.2),P=0.000]。Lenti-TK-MSC/GCV处理组与单独GCV处理组、Lenti-TK-MSC/GCV条件培养液(即Lenti-TK-MSC加入1 mg/L GCV培养48 h的培养上清)处理组相比,CD133+5-8F细胞的存活率明显降低[(37.2±2.3)%vs(98.5±3.1)%、(83.8±3.4)%,P=0.000]。Lenti-TK-MSC数量达到混合细胞总数(Lenti-TK-MSC和CD133+5-8F细胞)的20%时,CD133+5-8F细胞存活率为(68.2±2.3)%,表现出明显的旁观者杀伤效应。结论:Lenti-TK感染后MSC对鼻咽癌CD133+5-8F细胞具有靶向迁移及杀伤作用。

耳鼻咽喉-头颈外科学课程解剖生理双语教学模式初探

本文探讨了耳鼻咽喉-头颈外科学课程中解剖生理双语教学的模式、实施效果、优势及存在问题.教学实践表明,耳鼻咽喉-头颈外科学课程中解剖生理开展双语教学是可行的.为了提高教学效果,双语教学应当特别关注教学质量、提高学生学习主动性、提高师资外语水平及建立完善的双语教学评价体系等方面的问题.

PPTA对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后Caspase-1的影响

目的探讨在豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,I/RI)后盐酸椒苯酮胺(piperphentonamine hydrochloride,PPTA)对蜗内含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)的影响。方法将24只豚鼠随机分为4组,每组6只,分别为正常组、假手术组、I/RI组、PPTA组。PPTA组在豚鼠I/RI后经股静脉注射PPTA,I/RI组以生理盐水代替PPTA注射。RT-PCR检测蜗内Caspase-1的mRNA表达,组间比较检测结果。结果各组耳蜗Caspase-1的mRNA表达量比较:I/RI组显著高于正常组、假手术组和PPTA组(P<0.001);PPTA组显著高于正常组和假手术组(P<0.001);正常组和假手术组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PPTA可能通过抑制Caspase-1 mRNA的表达,从而减少细胞凋亡来对I/RI耳蜗起保护作用。

人鼻咽癌细胞株中类肿瘤干细胞的分离、培养及鉴定

目的检测CD133在人鼻咽癌细胞株SUNE中的表达以及CD133+肿瘤细胞的体外增殖、分化情况,并对其进行类肿瘤干细胞的鉴定。方法采用免疫荧光细胞化学技术及流式细胞仪检测鼻咽癌细胞株SUNE中CD133的表达情况以及CD133+细胞体外分化能力;免疫磁珠分选技术纯化CD133+肿瘤细胞;MTT法检测CD133+细胞的体外增殖能力,并将其与CD133-及未分选细胞进行比较。结果鼻咽癌细胞株SUNE中有0.35%的微量细胞呈CD133+表达;免疫磁珠富集的CD133+肿瘤细胞在无血清培养基中悬浮生长,并可以形成肿瘤细胞球,具有很强的自我更新和繁殖能力,且在3、5、7 d的紫外吸光度(A)值分别为0.317±0.007、0.370±0.002、0.558±0.004,均高于相同条件下未分选细胞和CD133-细胞(P<0.05);CD133+细胞在含血清培养基中的比例逐日下降,至培养的第12天,由第1天的89.67%下降至0.37%。结论CD133可作为鼻咽癌类干细胞的标志之一。鼻咽癌细胞株SUNE中存在类肿瘤干细胞,并具有自我更新和分化能力。

加味补中益气汤治疗小鼠变应性鼻炎的实验研究

目的探讨加味补中益气汤对变应性鼻炎的预防及治疗作用以及可能机制。方法采用卵清蛋白腹腔注射及鼻腔激发制成变应性鼻炎小鼠模型,予以加味补中益气汤行灌胃治疗,观察小鼠行为学改变;组织病理学方法观察鼻腔黏膜肥大细胞数量;用ELISA法对血清总IgEI、L-4I、FN-γ含量进行检测。结果加味补中益气汤治疗后的变应性鼻炎小鼠相对于阳性对照组的抓鼻和喷嚏数明显减少;鼻黏膜中肥大细胞数减少;血清总IgE和IL-4降低,而IFN-γ含量上升。结论加味补中益气汤能降低变应性鼻炎小鼠血清总IgE和鼻黏膜肥大细胞数目,调节Th1和Th2细胞因子并纠正失衡的Th1/Th2细胞因子网络,从而对变应性鼻炎产生治疗作用。

人工耳蜗植入术鼓阶入口定位的相关解剖研究

目的通过对人工耳蜗植入手术相关的后鼓室及上鼓室解剖结构进行观察、测量,为人工耳蜗植入手术中顺利找到并准确定位鼓阶入口提供理论参考。方法对20侧成人颞骨标本进行解剖,模拟人工耳蜗植入术,在手术显微镜下观察、测量与人工耳蜗植入手术相关的解剖数据。结果砧骨短脚至圆窗龛之间的距离为(5.91±0.29)mm;镫骨头至圆窗龛之间的距离为(2.11±0.18)mm;面神经垂直段至圆窗龛之间的距离为(6.70±0.19)mm;锥隆起至圆窗膜前缘之间的距离为(2.22±0.21)mm;镫骨头至圆窗膜下缘之间的距离为(2.16±0.14)mm;鼓阶入口与卵圆窗最近距离为(2.12±0.19)mm;匙状突至圆窗龛之间的距离为(3.79±0.17)mm;镫骨头至耳蜗第二回切开点之间距离为(2.25±0.13)mm;锥隆起至耳蜗第二回转切开点之间距离为(2.28±0.20)mm。结论人工耳蜗植入手术中切开耳蜗底回的位置位于锥隆起前下方约2.22 mm处;切开耳蜗第二回的位置位于锥隆起前上方约2.28 mm处;根据病人不同情况,为术中选择不同的鼓阶切开点提供了参考。

耳屏软骨鼓室成形术治疗粘连性中耳炎

目的观察耳屏软骨鼓室成形术治疗粘连性中耳炎的疗效。方法 2008年6~2008年10月对18例粘连性中耳炎患者行耳屏软骨置入的鼓室成形术,比较术前和术后1个月、1年的语频听力气骨导差和患者自觉症状改善情况。结果全部患者于术后6周内干耳,17例鼓膜愈合,1例鼓膜前下有裂隙,术前平均气骨导差（0.25、0.5、1.0、2.0 kHz）44.65dB,术后1个月平均气骨导差为33.40 dB,骨气导差值缩小〉10 dB,术后1年平均气骨导差（0.25、0.5、1.0、2.0 kHz）为15.21 dB,骨气导差值缩小〉25 dB。自觉耳闷消失或减轻3/15例、耳鸣消失1/11例、耳鸣减轻10/11例,术后出现高频性耳鸣1/7例,鼓膜外观基本正常17例。结论利用耳屏软骨重建鼓膜治疗分泌性中耳炎是临床可行的治疗方法,但是要注意手术适应证的选择。

人工耳蜗植入术后并发症的分析和处理:附539例报道

目的总结和分析人工耳蜗植入术后并发症的发生情况,对术后并发症的预防和处理进行探讨。方法收集539例人工耳蜗植入病例进行统计和分析,介绍了各类并发症的处理及严重并发症的防治方法。结果各类并发症28例,总发生率为5.19%,其中术中并发症有井喷、乙状窦损伤和外耳道皮肤破裂,共计8例;术后早期并发症有迟发性面瘫、皮瓣愈合困难和骨膜下血肿,共计11例;术后晚期并发症有皮瓣后期感染裂开和面肌痉挛,共计9例。结论人工耳蜗植入术后并发症的预防和处理极为重要,尤其是要防治术后的严重并发症。

正常和庆大霉素致耳聋豚鼠清醒和麻醉状态下听性脑干反应的比较

目的检测正常豚鼠及庆大霉素致耳聋豚鼠在清醒和麻醉两种状态下的听性脑干反应(ABR),比较两种状态下ABR波形、反应阈及潜伏期等的差别。方法杂色豚鼠40只(正常组和庆大霉素致耳聋组各20只)分别在麻醉前后记录ABR各数据,用配对t检验进行统计学分析。结果正常豚鼠在清醒和麻醉状态下ABR波形,反应阈,Ⅰ、Ⅲ波峰潜伏期,Ⅰ-Ⅲ波峰间期无显著差异(P>0.05);庆大霉素致耳聋豚鼠在清醒和麻醉状态下ABR各参数亦无显著差异(P>0.05)。结论豚鼠(正常或耳聋)在清醒或麻醉状态下测试ABR无显著差异,因此为保证实验成功和减少误差可采用非麻醉方法。

hTERTp/TK/pGL3靶向抑制端粒酶活性及其对鼻咽癌干细胞的杀伤作用

目的:探讨hTERTp/TK/pGL3载体靶向抑制端粒酶活性及其杀灭鼻咽癌CD133+干细胞的作用机制。方法:将已构建的hTERTp/TK/pGL3载体及其对照处理因素(CMV/TK/pGL3和TK/pGL3载体)转染至鼻咽癌CD133+干细胞、CD133-肿瘤细胞、人脐静脉内皮细胞(ECV)(对照组)和鼻咽癌SUNE未分选细胞中,采用Stretch PCR法检测4种细胞端粒酶活性改变。MTT法测定CD133+干细胞和ECV细胞存活率。结果:CD133+鼻咽癌干细胞体外培养7d后细胞逐渐增多,CD133+鼻咽癌干细胞体内成瘤实验阳性。CD133+鼻咽癌干细胞转染hTERTp/TK/pGL3或CMV/TK/pGL3后端粒酶活性降低;而ECV细胞端粒酶为阴性表达;CD133+鼻咽癌干细胞分别转染TK/pGL3、CMV/TK/pGL3和hTERTp/TK/pGL3后细胞存活率平均为(87.4±0.4)%、(20.5±0.4)%和(27.9±0.2)%,ECV对照细胞组转染TK/pGL3、CMV/TK/pGL3和hTERTp/TK/pGL3后细胞存活率平均为(90.7±0.1)%、(18.1±0.2)%和(86.2±0.1)%,hTERTp/TK/pGL3杀灭鼻咽癌CD133+干细胞效率明显高于ECV细胞组(P<0.01)。结论:hTERTp/TK/pGL3载体可以通过下调端粒酶活性靶向抑制端粒酶阳性的鼻咽癌CD133+干细胞。

内耳Mondini畸形临床分析

目的探讨内耳Mondini畸形的病因、临床特征、诊断和治疗。方法分析2例Mondini畸形患者的临床资料并复习相关文献。结果 Mondini畸形属于常染色体显性遗传病;主要表现为听力下降,形成脑脊液漏后可伴发反复发作的脑膜炎,单侧畸形者,因对侧听力正常,常就诊于其他科室易漏诊;其诊断需结合病史、听力学及影像学检查;手术修补对脑脊液漏效果好,本文2例术后随访1年余,均未见复发。结论听力下降并反复发作不明原因的脑脊液漏伴脑膜炎者应疑为内耳Mondini畸形,CT与MRI检查是确诊该病的主要依据,对伴发脑脊液耳漏的患者,鼓室探查修补术是目前唯一有效的方法。

沙参麦冬汤对放射性鼻窦炎黏膜形态和功能转归的影响

目的:探讨应用加减沙参麦冬汤对放射性鼻窦炎黏膜形态和功能恢复的影响。方法:对51例鼻咽癌放疗后鼻窦炎患者随机分为治疗组26例和对照组25例,治疗组每次服用加减沙参麦冬汤,对照组用罗红霉素治疗,其他措施2组相同并做对比观察。随访3个月于治疗前、治疗1个月、治疗3个月进行糖精试验,每组4例患者分别于治疗前、治疗1个月、治疗3个月取窦口鼻道复合体黏膜进行电镜观察。结果:治疗组鼻腔黏膜形态和功能恢复时间均较对照组显著提前(P<0.05)。2组患者治疗前的SIgA无显著性差异(P>0.05),治疗1个月治疗组患者SIgA与对照组比较显著升高(P<0.05)。治疗前治疗组纤毛传输速率为3.14±1.05mm/min,2组比较差异无显著性(P>0.05);治疗3个月治疗组纤毛传输速率为6.09±2.63mm/min,与治疗前比较差异有显著性(P<0.01),对照组为5.04±1.22mm/min,2组之间比较有显著性差异(P<0.05)。电镜观察:治疗前黏膜上皮纤毛脱落,治疗后纤毛排列较整齐,粗细较均匀,呈"9+2"微管结构。结论:应用加减沙参麦冬汤能加快鼻腔黏膜形态和功能的恢复。

鼓阶开窗微孔技术注入胰岛素样生长因子-1对庆大霉素致聋豚鼠的治疗作用

目的探讨通过鼓阶开窗,微孔技术注胰岛素样生长因子-1(IGF-1)入内耳鼓阶,研究IGF-1对感音神经性聋动物模型(庆大霉素致耳聋豚鼠)的治疗作用。方法豚鼠20只,施用庆大霉素致耳聋后均分为IGF-1组和对照组,行鼓阶开窗术,微孔技术注入试剂(IGF-1组注入鼠重组IGF-1,对照组注入人工生理外淋巴液)10μl,分别在术前和术后7、14d行ABR测试;测试完后每组3只断头取听泡,在扫描电镜下观察耳蜗毛细胞改变。结果IGF-1组ABR反应阈(RT)术后7、14d均比术前有显著降低;IGF-1组比对照组RT在术后14d有显著降低。扫描电镜发现对照组较IGF-1组毛细胞受损严重;同时,IGF-1组受损毛细胞表面有指状微绒毛生长。结论微孔技术注入IGF-1可以改善豚鼠受损听力,减轻庆大霉素耳毒性的继续损伤,其机制可能为减轻耳蜗毛细胞的损伤并修复部分毛细胞,同时保护传入神经。

hTERT及CMV双调控TK基因靶向杀灭鼻咽癌细胞的实验研究

目的探讨hTERT启动子及CMV增强子双调控表达载体调控TK基因靶向杀灭鼻咽癌细胞的效应。方法将双调控增强型载体及hTERT单启动子载体(作为对照组)分别转染两种端粒酶(+)的人鼻咽癌5-8F细胞及对照组人乳腺癌MCF-7细胞及端粒酶(-)的正常人血管内皮ECV细胞,StretchPCR法验证5-8F细胞、MCF-7细胞及ECV细胞中端粒酶活性,荧光显微镜下观察TK基因绿色荧光蛋白表达差异,MTT法分析杀灭鼻咽癌细胞的效果。结果①Stretch PCR法验证人鼻咽癌细胞5-8F、人乳腺癌细胞MCF-7端粒酶活性呈阳性,人血管内皮ECV细胞端粒酶活性呈阴性。②增强型表达载体转染上述两种端粒酶(+)肿瘤细胞均有很强的荧光表达及TK基因的mRNA表达,单启动子亦有较强的荧光表达,但比增强型表达载体要弱,而ECV细胞几乎无绿色荧光。③加入GCV后,增强型表达载体对两种端粒酶(+)肿瘤细胞体外增殖均有明显抑制作用,且均高于单启动子组、空载体组及空白对照组,而增强型表达载体转染ECV细胞体外增殖无明显抑制作用。结论以hTERT启动子及CMV增强子双调控TK基因的表达载体能够靶向杀灭鼻咽癌细胞,且作用明显强于单启动子载体组。这种新型高效、靶向增强型载体有可能成为一种鼻咽癌临床靶向基因治疗的新策略。

间充质干细胞靶向转运胸苷激酶基因联合更昔洛韦杀伤鼻咽癌细胞

背景:研究证实,间充质干细胞能通过基因修饰成为肿瘤治疗的靶向载体。目的:观察转染胸苷激酶基因的胸苷激酶-间充质干细胞联合更昔洛韦对鼻咽癌细胞的靶向杀伤作用。方法:应用LipofectamineTM2000将表达胸苷激酶基因的重组质粒pGL3-EGFP-胸苷激酶转染至SD大鼠间充质干细胞,观察其增殖能力。应用Transwell小室观察胸苷激酶-间充质干细胞的归巢特性;将胸苷激酶-间充质干细胞植入裸鼠,观察其致瘤性;用胸苷激酶-间充质干细胞/更昔洛韦干预人鼻咽癌细胞5-8F,观察其对细胞的杀伤作用及旁观者效应。结果与结论:荧光显微镜观察及RT-PCR检测结果提示实验成功将胸苷激酶基因转染至间充质干细胞,CCK-8检测结果显示胸苷激酶-间充质干细胞与间充质干细胞增殖能力差异无显著性意义(P>0.05)。Transwell小室迁移实验显示胸苷激酶-间充质干细胞具有归巢特性,裸鼠移植瘤实验显示胸苷激酶-间充质干细胞无致瘤性。CCK-8检测检测发现胸苷激酶-间充质干细胞/更昔洛韦具有旁观者效应,可明显降低5-8F的生存率(P<0.01)。提示胸苷激酶-间充质干细胞/更昔洛韦对鼻咽癌细胞具有靶向迁移及杀伤作用,间充质干细胞可作为治疗鼻咽癌的理想靶向转运载体。

人工耳蜗植入术后面神经刺激征的调试对策——附一例报告

目的探讨人工耳蜗术后面神经刺激征的发生原因及处理对策,为编程调试提供指导。方法患者为一植入澳大利亚Cochlear Nucleus 24型人工耳蜗的17岁男性,术后一月开机调试时出现面肌抽搐等非听反应,通过影像学资料分析电极与面神经的关系,利用电极分组及逐个开通和关闭进行实时听声,并行聆氏五音的发声定位检测,找出引起面神经刺激征的电极,对产生刺激的电极增加脉宽并行实时听声观察面神经刺激征的表现,症状无改善者关闭相应的电极通道。结果检测显示第14～22号电极均可引出明显的面神经刺激征。除增加脉宽后面神经刺激征消失的第14～16号电极,其余第17～22号电极予以关闭,面神经刺激征消失。结论人工耳蜗植入者开机后引发的面神经刺激征可通过调试确认引发刺激的电极,增大脉宽和关闭相应的电极通道可明显改善症状。

同种异体小肠黏膜下层支架复合骨髓间充质干细胞修复兔耳郭软骨缺损:体内新生软骨的可行性

背景:小肠黏膜下层作为一种组织材料有很好的支撑作用,其降解性、生物相容性良好,但存在降解速度快等弊端。将其与软骨细胞进行复合培养后,由于具有良好的生物相容性和细胞相容性,从而更利于提高再生组织的速度和质量。目的:以转化生长因子β1诱导骨髓间充质干细胞生成的软骨细胞作为种子细胞,小肠黏膜下层作为支架材料,观察细胞-小肠黏膜下层复合物在体内形成新生软骨组织的可能性。设计、时间及地点:完全随机对照动物实验,于2007-07/2008-07在南方医科大学珠江医院儿科中心实验室完成。材料:6只4月龄雄性新西兰大白兔,随机分成软骨细胞/小肠黏膜下层复合物实验组3只,单纯小肠黏膜下层对照组3只。方法:取生长状态良好的第3代的兔骨髓间质干细胞制成细胞悬液,培养基中加入软骨起源诱导因子(转化生长因子β110μg/L、地塞米松10-7mmol/L和维生素C50mg/L)培养3周。将细胞悬液种于小肠黏膜下层支架上形成软骨细胞-小肠黏膜下层复合物。实验组用诱导后的软骨细胞、小肠黏膜下层复合物移植到成年新西兰大白兔的耳郭软骨缺损部位,对照组以单纯小肠黏膜下层植入。主要观察指标:分别于种植后4,10,16周取缺损区行大体观察和组织学检查。结果:诱导软骨细胞-小肠黏膜下层复合物在植入体内16周时材料明显被吸收完全,且有软骨生成,与正常组织未见明显区别,但修复层软骨较薄。经苏木精-伊红染色,Massan染色,甲苯胺蓝染色检查证实为软骨组织。结论:经诱导的软骨细胞-小肠黏膜下层复合物在动物体内能够形成新生软骨组织,比单纯小肠黏膜下层修复效果好。

盐酸椒苯酮胺对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的：探讨盐酸椒苯酮胺（piperphentonamine hydrochloride，PPTA）对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion injury，I/RI）后凋亡细胞的保护。方法将24只豚鼠随机分为正常组、假手术组、I/RI组、PPTA组4组，每组6只。采用TUNEL法观察耳蜗细胞凋亡情况，计算凋亡指数（apoptotic index，AI），组间比较检测结果。结果正常组、假手术组和PPTA组耳蜗没有或仅个别部位有凋亡细胞，I/RI组凋亡细胞明显多于其它3组。结论细胞凋亡是耳蜗I/RI的一种损伤形式，PPTA可能通过减少细胞凋亡对I/RI耳蜗起保护作用。

开瑞坦治疗小儿外耳道湿疹的疗效观察

目的评价第三代抗组胺药开瑞坦对小儿外耳道湿疹的临床疗效。方法外耳道湿疹患儿34例(43耳),随机分为治疗组(18例,22耳)和对照组(16例,21耳)。治疗组口服开瑞坦,对照组口服扑尔敏,两组患儿均局部外涂复方酮康唑氧氟沙星软膏,观察比较疗效差异。结果治疗组和对照组的痊愈率分别为86.4%和57.1%(P<0.05)。痊愈病例随访1个月,其复发率分别为21.1%和66.7%(P<0.05)。两组患儿均无严重的不良反应发生。结论开瑞坦用于小儿外耳道湿疹的治疗具有疗效好、副作用少、服用方便的特点,值得推广应用。