蛋白酶活化受体1在热打击人脐静脉内皮细胞炎症激活中作用的研究

目的:观察热打击对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中蛋白酶活化受体1(PAR1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的mRNA及蛋白表达水平的影响,探讨PAR1在热打击后HUVECs炎症激活中的作用。方法:培养的HUVECs分为37℃对照组(37℃培养)和42℃热打击组(42℃培养2 h后再于37℃继续培养至观察时间点)。42℃热打击细胞再分别预先采用PAR1抑制剂SCH79797(42℃+SCH组)、激活剂TFLLR-NH2(42℃+TFL组)、PAR1 siRNA转染(42℃+PAR1siRNA组)、腺病毒转染(42℃+AdPAR1)等预处理,再行热打击。各组细胞PAR1、TNF-α、IL-6、ICAM-1的mRNA表达水平采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测,PAR1蛋白水平采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测,TNF-α、IL-6、ICAM-1的蛋白表达水平采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测。将人单核细胞THP1与各组HUVECs共同培养,倒置荧光显微镜下观察单核细胞对HUVECs的黏附情况。结果:与37℃对照组比较,42℃热打击组PAR1、TNF-α、IL-6、ICAM-1的mRNA及蛋白表达水平在热打击结束后显著增高(P<0.05或P<0.01);siRNA转染能有效降低而腺病毒转染能有效升高常温培养及热打击后HUVECs的PAR1蛋白表达(P<0.01)。与单纯热打击HUVECs比较,SCH预处理及PAR1siRNA转染能有效降低HUVECs热打击后TNF-α、IL-6、ICAM-1的mRNA及蛋白水平,并能有效减轻单核细胞对HUVECs热打击后的黏附作用;TFL、AdPAR1能有效增加HUVECs热打击后TNF-α、IL-6、ICAM-1的mRNA及蛋白表达水平,并能有效增强单核细胞对HUVECs热打击后的黏附(P<0.05,P<0.01)。结论:热打击可导致HUVECs的PAR1活化,PAR1参与了热打击HUVECs炎症激活的过程。